• KSBB Journal
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• 제21권4호
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• pp.279-285
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• 2006

본 연구에서는 trypsin을 모델 단백질로 하여 단백질 본연의 환성을 유지할 수 있는 고정화 방법을 찾기 위하여 공유결합방법과 친화력 결합방법을 이용하여 trypsin을 고정화 하였다. Streptavidin-biotin system을 이용한 고정화 방법은 bioactivity 유지측면에서 공유결합 방법보다 우수함을 확인하였다. 하지만 streptavidin-biotin system을 이용하였을 때 고정화 수율이 낮은 것은 해결해야 할 과제이다. 분자량이 다른 기질들(BAPNA, insulin, BSA)을 대상으로 고정화 trypsin의 부위 특이적 절단 특성을 분석한 결과 streptavidin-biotin에 의해 고정화된 trypsin이 절단효율도 높고 sequence coverage도 높은 것으로 확인되었다. 또한 공유결합된 trypsin은 견고한 분자구조를 나타낸 반면 streptavidin-biotin system으로 고정화된 trypsin은 유연성이 높은 것을 QCM-D를 이용하여 관찰할 수 있었다. 따라서 streptavidin-biotin system에 의한 고정화 방법에서 streptavidin-biotin 결합이 일종의 spacer arm 역할을 하면서 고정화된 trypsin의 분자유연성을 향상시켜 절단반응의 부위특이성과 절단수율을 향상시키는 것으로 판단되었다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제33권10호
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• pp.3233-3240
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• 2012

We demonstrated the combined applications of online protein digestion using trypsin immobilized enzyme reactor (IMER) and dual tandem mass spectrometry with collisionally activated dissociation (CAD) and electron transfer dissociation (ETD) for tryptic peptides eluted through the trypsin-IMER. For the trypsin-IMER, the organic and inorganic hybrid monolithic material was used. By employing the trypsin-IMER, the long digestion time could be saved with little or no sacrifice of the digestion efficiency, which was demonstrated for standard protein samples. For three model proteins (cytochrome c, carbonic anhydrase, and bovine serum albumin), the tryptic peptides digested by the IMER were analyzed using LC-MS/MS with the dual application of CAD and ETD. As previously shown by others, the dual application of CAD and ETD increased the sequence coverage in comparison with CAD application only. In particular, ETD was very useful for the analysis of highly-protontated peptide cations, e.g., ${\geq}3+$. The combination approach provided the advantages of both trypsin-IMER and CAD/ETD dual tandem mass spectrometry applications, which are rapid digestion (i.e., 10 min), good digestion efficiency, online coupling of trypsin-IMER and liquid chromatography, and high sequence coverage.

• 펄프종이기술
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• 제35권2호
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• pp.39-45
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• 2003

This study was performed to develop the new type enzyme immobilization sheet from carboxymethylated refiner mechanical pulp (CRMP) substrate. Enzyme immobilization was attempted to couple carboxyl groups of CRMP with amino groups of the enzyme, trypsin, through the reaction of carbodiimide reagent, 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl)-carbodimide (EDC ). Immobilization carrier, water insoluble CRMP fraction (CRMP-IS), was successfully reacted with the enzyme, formed peptide linkage like -CONH- at 1680$cm^{-1}$ / and new ester linkage like -COO$CH_3$, methylester at 1735$cm^{-1}$ /, and produced enzyme immobilized substrate (CRMP-IST). The enzyme immobilized handsheet was prepared by mixing the above chelated enzyme immobilized substrate(CRMP-IST) with kraft pulp by paper sheet machine like papermaking process. The sheet weight and strength were increased with increasing dosage of CRMP-IST, and decreased at more than 10％ mixing of CRMP-IST, but higher than the controls. Concerning activities of immobilized trypsin(CRMP-IST) sheet by caseinolysis, the teared-off sheet with shaking was shown higher enzyme activities than sheet shape without shaking. In conclusion, this enzyme immobilized sheet would be expected easy handling for practical application and reutilization.

• 한국식품과학회지
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• 제28권1호
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• pp.99-104
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• 1996

탄수화물을 갖고 있지 않은 caseinomacropeptide (CMP)를 감성유청분말로부터 12% TCA법에 의해 분리한 결과 100 g의 감성유청분말로 부터 2.7 g을 얻을 수 있었다. 분리된 CMP는 전기영동과 아미노산 조성을 분석한 결과 매우 순도가 높은 CMP로 나타나 12% TCA침전법은 감성유청분말로 부터 CMP를 분리하는 효과적인 방법임을 알 수 있었다. 트립신을 pore glass beads에 carbodiimide (EDC) 방법으로 amide결합에 의해 고정화시켰으며 고정화된 트립신의 양은 1 g glass beads당 20 mg이었다. 수용성 트립신에 의한 CMP 가수분해는 24시간이 지나면 거의 완료되었으며 고정화 트립신은 24시간이 지난 후에도 가수분해가 진행되고 있었다. 가수분해물을 Bio-Gel P4 column에 의해 분획한 후 혈소판 응집 저해작용을 측정한 결과 고정화 트립신에 의해 24시간 가수분해시킨 CMP 분해물이 가장 높은 혈소판 응집 억제능을 보였다.

• KSBB Journal
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• 제23권4호
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• pp.350-354
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• 2008

본 연구에서는 나노담체를 이용하여 효소를 고정화 하였으며 고정화 효소의 활성도, 재사용 가능성, pH 영향 및 시간에 따른 안정성을 검토하였다. 고정화 효소의 활성도는 PAMP를 사용한 경우 가장 빠른 것으로 나타났으며 이때 Vm값은 0.169 mM/min였고 Km값은 0.263 mM 이었다. 이는 PS/PSMA를 사용한 경우보다 2배 이상의 효소 반응속도 향상을 보여주었다. 그림을 통하여 효소의 재활용가능성을 제시하였으며 여러 번 재사용한 경우에도 활성도를 잃지 않고 유지하였다. 고정화한 트립신은 공통적으로 pH증가에 따라 활성도가 증가하였으며 PAMP, PANI, DEAE, CMC, PS/PSMA 순으로 활성도가 높음을 확인 할 수 있었다. 트립신이 자체 효소를 분해하는 특성을 고려할 때 고정화 되지 않은 트립신의 안정성은 매우 낮게 된다. 본 연구에서 사용된 담체 중에 크기가 아주 작은 담체인 PAMP와 PANI의 경우에는 활성도가 급격히 감소하는 현상을 보였으나 비교적 크기가 큰 다른 담체의 경우에는 고정화 효소의 안정성이 우수한 것으로 나타났다.

• 한국의류학회지
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• 제37권7호
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• pp.852-863
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• 2013

We investigate the immobilization of trypsin on chitosan nonwoven using glutaraldehyde (GA). The conditions for trypsin on chitosan nonwoven and GA cross-linking were optimized depending on different conditions. The order of GA cross-linking was determined by the activity of immobilized trypsin. The characteristics of chitosan nonwoven were examined by Fourier-transform infrared (FT-IR) and surface morphology analyses (SEM). Results showed that the optimal treatment conditions for trypsin on chitosan nonwoven were as follows: pH 8.5; temperature $37^{\circ}C$; trypsin concentration 15% (o.w.f); and treatment time 60 min. Those for GA cross-linking were: pH 10.0; GA concentration 3% (v/v); and treatment time 120 min. FT-IR analysis showed that GA was cross-linked on chitosan nonwoven. The SEM analysis also showed that trypsin was immobilized on chitosan nonwoven.

• 한국식품과학회지
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• 제29권5호
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• pp.1052-1056
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• 1997

우유 casein단백질을 trypsin, alcalase, neutrase, protamax, S. aureus type V8 등의 단백질분해효소를 이용하여 가수분해시키고 생성된 peptide의 철분가용화능을 측정하였을 때, trypsin과 alcalase에 의해 생성된 peptide들이 pH 6의 조건에서 각각 6.42와 $2.37\;{\mu}g/mL$를 가용화시키는 능력을 보였으며 그외의 protease들은 $1\;{\mu}g/mL$내외의 철분가용화능을 보였다. Trypsin과 alcalase에 의해 생성된 peptide를 역상 column으로 10개의 분획으로 나누어서 각각의 분획의 pH6에서의 철분가용화능을 측정한 결과, trypsin의 경우 분획 5에서 가장 높은 철분가용화능$(2.33\;{\mu}g/mL)$이 발견되었으며 alcalase의 경우에는 분획 7이 가장 높은 철분가용화능$(1.56\;{\mu}g/mL)$을 보였다. 이들 철분과 결합력이 있는 peptide를 분리하기 위하여 IMAC의 방법을 이용하여 철분을 chelating sepharose fast flow column에 고정화 시키고 이들 철분에 흡착하는 peptide의 분리를 시도한 결과, trypsin이나 alcalase에 의해 생성된 peptide중 철분을 가용화시키는 능력이 높은 peptide들이 IMAC에 의해 효과적으로 분리되었다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제8권2호
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• pp.195-200
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• 2004

Trypsin can be immobilized on silk fibroin fiber (SFF) by introducing several spacer arms, such as ethylene diamine (ED), bovine serum albumin (BSA) and silk sericin (SS). Direct immobilization on silk fiber (SFFGA) has low activity because of the steric hindrance between the trypsin and substrate. The introduction of spacer arms onto SFF-GA can enhance the activity of trypsin by reducing the steric hindrance. When ED is used as a spacer arm, the activity of trypsin has increased but its stability decreased due to the increased hydrophobicity of SFF. BSA and SS, as a spacer arm, have better results in both activity and stability. SFF-BSA shows some decrease in the specific activity due to improper immobilizatin. SFF-SS maintained 90% of its initial activity even after 12 hrs incubation at $50^{\circ}C$. In the case of repeated hydrolysis of silk sericin with immobilized trypsin, SFF-GA and SFF-ED lost 50% of their initial activity right after first run, whereas SFF-BSA and SFF-SS maintained 80% of their initial activities even after 5 runs. Higher operational stability is due to increased hydrophilicity of SFF by introducing hydrophilic spacer arms such as BSA and SS. The high content of serine in SS increases the hydrophilicity of SFF resulting the best results among other spacer arms.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVII)
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• pp.728-729
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• 2005

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제27권2호
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• pp.329-332
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• 2013

In present preliminary report, we showed the possibility of silk sericin (SS) in enzyme immobilization. SS beads were prepared and enzymes were immobilized on it. The specific activity of immobilized a-chymotrypsin retained more than 87% compared to the free enzyme. The immobilized a-chymotrypsin has better stability against ethanol especially those immobilized on SS beads coagulated in methanol. Immobilized trypsin and lipase had also comparable apparent activity compared to free enzyme. Our result indicates that SS could be a good candidate for enzyme immobilization support due to its hydrophilicity.