Kim, Won-Baek;Park, So Hae;Koo, Kyoung Yoon;Kim, Bo Ram;Kim, Minji;Lee, Heeseob
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권9호
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pp.1527-1532
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2016
Strain SPF4211, having hyaluronidase (HAase) inhibition activity, was isolated from P. davidiana (Carriere) Franch fruit (PrDF) sugar extract. The phenotypic and biochemical properties based on 16S rDNA sequencing and an API 50 CHB kit suggested that the organism was B. subtilis. To optimize the HAase inhibition activity of PrDF extract by fermentation of strain SPF4211, a central composite design (CCD) was introduced based on three variables: concentration of PrDF extract (X1: 1-5%), amount of starter culture (X2: 1-5%), and fermentation time (X3: 0-7 days). The experimental data were fitted with quadratic regression equations, and the accuracy of the equations was analyzed by ANOVA. The statistical model predicted the highest HAase inhibition activity of 37.936% under the optimal conditions of X1 = 1%, X2 = 2.53%, and X3 = 7 days. The optimized conditions were validated by observation of an actual HAase inhibition activity of 38.367% from extract of PrDF fermented by SPF4211. These results agree well with the predicted model value.
우슬(牛膝)은 비름과(Amaranthaceae)의 쇠무릎(Achyranthes japonica)의 뿌리를 약용으로 한방에서 사용하고 있다. 1, 1- diphenyl 2-picrylhyorazyl (DPPH)은 잘 알려진 자유 라디칼이다. Hyaluronidase (HAase)은 결합조직의 세포외성 기질에서 히알루론산분해에 관여하는 효소이다. Lipoxygenases (LOX)은 지방산 대사와 면역에 중요한 역할을 수행한다. 본 연구에서는 쇠무릎에서 이 세 작용을 에탄올 추출물을 사용하여 생육 발달 단계(어린 영양기관과 성숙한 영양기관)에 대해 이들 추출물의 활성을 비교 조사하였으며 각 항목에 대해 50% 저해(IC50)의 농도를 산출하였다. 항산화 활성은 잎과 줄기, 뿌리 모두에서 탁월되었다. 특히 히알루로니다아제의 저해작용이 현저하였으며 향후 어떤 화합물인지 심도 있는 연구가 필요하다고 판단되었다. DPPH에 대한 항산화 활성과 LOX에 대한 저해작용은 기존 연구자의 결과와 유사하였다. 어린 식물조직과 성숙한 식물조직에서 추출한 발달 단계에 따른 이들 세 가지 활성에서 어린 뿌리보다 성숙한 뿌리에서 약간 더 우수한 작용을 보였으나 통계적으로 유의한 차이가 없었다.
Kim, Minji;Kim, Won-Baek;Koo, Kyoung Yoon;Kim, Bo Ram;Kim, Doohyun;Lee, Seoyoun;Son, Hong Joo;Hwang, Dae Youn;Kim, Dong Seob;Lee, Chung Yeoul;Lee, Heeseob
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제27권4호
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pp.701-708
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2017
This study was conducted to evaluate the hyaluronidase (HAase) inhibition activity of Asparagus cochinchinesis (AC) extracts following fermentation by Weissella cibaria through response surface methodology. To optimize the HAase inhibition activity, a central composite design was introduced based on four variables: the concentration of AC extract ($X_1$: 1-5%), amount of starter culture ($X_2$: 1-5%), pH ($X_3$: 4-8), and fermentation time ($X_4$: 0-10 days). The experimental data were fitted to quadratic regression equations, the accuracy of the equations was analyzed by ANOVA, and the regression coefficients for the surface quadratic model of HAase inhibition activity in the fermented AC extract were estimated by the F test and the corresponding p values. The HAase inhibition activity indicated that fermentation time was most significant among the parameters within the conditions tested. To validate the model, two different conditions among those generated by the Design Expert program were selected. Under both conditions, predicted and experimental data agreed well. Moreover, the content of protodioscin (a well-known compound related to anti-inflammation activity) was elevated after fermentation of the AC extract at the optimized fermentation condition.
In this study, we investigated the potential of Resina Pini (RP) for anti-inflammatory and analgesic agents to treat inflammatory diseases such as gingivitis and periodontitis. Crude RP (RP1), recrystallized RP (RP2), and Ramus Mori Albae-treated RP (RP3), plus their respective water extracts (RP1-WE, RP2-WE and RP3-WE) were prepared for in vitro and in vivo tests. We couldn't find any signs of heavy metals pollution in all the RP samples. RP2-WE exhibited the highest viability of human gingival fibroblasts (HGF) and the strongest scavenging activity on superoxide anion. RP1, RP2 and RP3, RP2 showed potent scavenging activity on DPPH free radical. RP2-WE displayed a stronger inhibition on hyaluronidase (HAase) activity and RP3 also displayed potent HAase inhibition. RP2-WE, RP3-WE, RP3 and RP2 were reduced admirably the production of $PGE_2$ in HGF. In addition, RP2-WE and RP3-WE exhibited potent inhibitory activities on arachidonic acid-induced ear edema in mouse. Moreover, RP-2 prevented completely acetic acid-induced writhing by 100.0% and RP1, RP3, RP1-WE and RP2-WE also exhibited excellent protective activities against writhing. While aminopyrine, the positive control, showed 76.9% analgesic effect at the same dose. Taken together, these results suggest that recrystallized aqueous extract of Resina Pini could be a promising drug for the treatment of periodontal diseases.
Hydrocotyle is a genus of prostrate, perennial aquatic or semi-aquatic plants formerly classified in the family Apiaceae, now in the family Araliaceae. Lipoxygenases (LOX) are present in the human body and play an important role in the stimulation of inflammatory reactions. Ethanolic extracts of five Hydrocotyle species (H. ramiflora, H. maritima, H. nepalensis, H. sibthorpioides, and H. yabei) showed inhibition of 23.5~50.6% at 2.0 mg/mL. Their extracts showed LOX inhibition in half maximal effective concentration (EC50) range 15.1~15.7 ㎍/mL. Hyaluronic acid is a glycosaminoglycan, a major component of the extracellular matrix Five extracts of these species inhibited less than 23.0% of Hyaluronidase (HAase) activity at a concentration of 2.0 mg/mL Xanthine oxidase (XO) is a form of xanthine oxidoreductase, a type of enzyme that generates reactive oxygen species. Five Hydrocotyle species were found to have inhibitory activity of XO at 2.0 mg/ml, with 65% having greater than 50% inhibition. H. ramiflora exhibited the highest activity with an inhibition of 80.0%. The results suggested that Lipoxygenases, Hyaluronidase, and Busan 47340, Republic of Korea from five Hydrocotyle species might be multifunctional and prevent the degradation of allergic reactions and inflammation.
HAase는 신체의 연골, 피부, 눈의 초자체 등에 포함된 고분자 다당류의 HA를 분해하는 효소로서 상처나 염증질환 시 활성화되어 염증, 알레르기 유발과 관련된 효소이다. 본 연구는 500종 식물에서 각 종당 한 식물체로부터 한 천연물의 메탄올 추출물(500추출물)을 이용하여 생물학적으로 기능이 다양하고 산업적으로 활용 가능성이 많은 HAase 저해제를 검색하였다. 그 결과 HAase 저해효과가 가장 우수한 천연물 추출물은 때죽나무 줄기 추출물 57.28%, 매화말발도리 줄기 추출물 53.50%의 저해효과를 나타내었다. 이 같은 추출물들의 농도 별 저해효과를 확인한 결과 농도 의존적으로 저해율이 증가하였다. 이 같은 결과로 볼 때 때죽나무, 매화말발도리 추출물은 HAase 효소의 저해효과가 우수하여 향후 HA 분해와 관련된 항염증 및 항 알레르기 연구에 이용될 수 있다.
본 연구에서는 항염증 및 항산화 활성을 갖는 유용한 물질 을 검색하기 위해 40여 가지 생약재를 에탄올 추출하여 H HAase 억제 및 라디칼 소거 활성을 측정하였다 .. HAase 억제 활성을 측정한 결과, I mg/mL의 농도에서 황기, 두충, 오미 자, 황금, 오가피, 목과, 목단피, 산사가 50% 이상의 저해활 성을 나타내었고, 이들에 대하여 n-hexane, chloroform, ethyl a acetate, water로 순차적으로 용매분획하여 활성을 측정한 결 과, 모든 시료의 ethyl acetate와 water 분획에서 높은 활성을 보였다 항산화 활성은 DPPH 라디칼에 대한 전자공여능과 F Fenton 반응에 의해 발생한 hydroxyl radical에 대한 소거능으 로 평가하였다 .. DPPH 라디칼에 대한 전자공여능은 복분자, 목단피, 백작약, 차전자, 마가목 에탄올 추출물이 I mg{mL 놓도에서 90% 이상으로 대조군으로 이용한 BHA와 Q - -tocopherol과 유사한 활성을 나타내었다 .. 2-deoxyribose 산화 법에 따른 hydroxyl 라디칼 소거활성에서 대부분의 에탄올 추출물 시료에서 모두 높은 활성을 나타내었다. 활성올 갖는 시료에 대하여 지질과산화 억제 활성을 측정한 결과 linoleic a acid와 phosphatidylcholine liposome 기질 모두에 대하여 오미 자 추출물은 가장 높은 억제 활성을 나타내었다.
본 연구에서는 생리활성물질유도제인 elicitor를 처리한 주름조개풀의 열수, 에탄올 추출물들의 항산화 효과, tyrosinase, elastase, collagenase 및 HAase 등의 미용관련 생리활성의 변화를 살펴보았다. Elicitor 처리한 주름조개풀 추출물의 DPPH 및 PF 등의 항산화 효과는 elicitor 비처리구인 대조구에 비해 elicitor 처리구가 농도의존적으로 더 높은 항산화 활성을 나타내었다. Elicitor 처리한 주름조개풀 추출물의 미용활성은 elastase 및 collagenase 억제 효과에 의한 주름개선효과와 tyrosinase 저해에 의한 미백효과가 비처리구인 대조구에 비해 상대적으로 매우 높은 효소 억제 효과를 나타내어 elicitor 처리가 주름조개풀추출물의 미백 및 주름개선 효과의 증대에 크게 영향을 미치는 것으로 확인되었으며, 농도의존적인 양상을 나타내었다. 또한 HAase 억제에 의해 유래되는 염증 억제 효과도 비처리구인 대조구에 비해 에탄올 추출물에서 우수한 염증 억제 효과를 나타내었다. Elicitor 처리에 의해 대조구에 비해 처리구에서 생리활성 효소에 대한 억제율이 큰 폭으로 상승하는 효과를 나타내어, elicitor 처리가 유용물질의 산업화라는 전제를 충족시키기 위한 biomass 기법으로 매우 적당하다는 것을 시사해주었다. 따라서 주름조개풀 노지재배 시에 본 연구에서 사용한 elicitor를 처리하면 수확되는 주름조개풀의 단위 무게 당 유용물질의 생산량을 높일 수 있고, 생리할성도 증대시킬 수가 있어 산업화를 위한 고기능성 원료생산에 효율적인 재배기법으로 활용할 수 있을 것이라 판단되었다.
본 연구에서 92종의 한약재로부터 물과 ethanol을 용매추출물에 대하여 HAase의 저해에 의한 항염증 효과를 측정한 결과 물 추출물에서는 E. officinalis(86.8%), T. orientalis(80.8%), C. semen(66.5%), M. azedarach(74.7%), S. pubescen (61.3%), S. chinensis(49.15%) 등이 높게 나타났다. Ethanol 추출물에서는 A. altissima와 S. chinensis 추출물이 90% 이상의 높은 항염증 활성을 나타내었다. 이들 중 물과 에탄올 추출물에서 모두 항염증 활성이 높게 측정된 S. chinensis가 선발되었다. 선별된 삼백초의 유효성분을 보다 효율적으로 추출할 방안을 확립하기 위하여 인체에 유해하지 않은 용매로 물과 ethanol을 선택하여 추출 최적조건을 살펴보았다. Phenolic 성분의 추출을 위한 최적조건은 50% ethanol을 사용하여 12시간 추출이 최적이었다. Phenolic 성분의 추출을 위해서는 ethanol이 물보다 더 효율적이었다. 최적조건에서 추출된 삼백초 추출물의 염증억제 활성은 $100{\sim}250{\mu}g/mL$ phenolic 농도로 첨가했을 때 70~80%의 염증 억제 효과를 나타내었으나, $500{\mu}g/mL$ 이상의 농도로 첨가 시 오히려 염증 억제활성이 감소하는 경향을 나타내었다. 삼백초를 초미세 분쇄 하였을 때 추출 수율과 염증억제 활성이 증가하는 것을 확인하였다. 따라서 초미세 분쇄 기술은 한약재로부터 생리활성물질 추출수율의 증가를 목적으로 적용할 수 있는 기술로 개발이 가능할 것으로 판단되었다.
잣나무 잎 추출물에 대해 염증인자인 hyaluronidase 저해효과를 측정한 결과 ethanol 추출물에서 물추출물에 비해 상대적으로 더 높은 HAase 저해효과를 보여주었으며, $50-200{\mu}g/mL$ phenolic 농도에서 13.2-29.5%의 저해효과를 나타내었다. 잣나무잎 추출물을 Raw 264.7 cell에 농도별로 처리하여 생성되는 NO량을 측정한 결과 LPS처리군은 LPS 무처리군에 비하여 3배에 가까운 NO발현을 나타내었으며, 농도 의존적으로 NO발현을 억제하였다. LPS에 의해서 생성된 $PGE_2$의 생성억제 효과를 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 처리농도에서 ethanol 추출물이 26.2%의 저해율을 나타내었다. NO 생성 억제기작에 관한 iNOS 단백질의 발현량을 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 농도에서 40%의 높은 억제효과를 나타내었으며, 농도 의존적으로 감소하는 경향을 관찰 할 수 있었다. LPS 처리시 또 다른 염증인자인 COX-2의 단백질 발현을 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 처리 농도에서 64%의 저해효과를 나타내었다. 잣나무잎 추출물이 Raw 264.7 세포에서 LPS에 의해서 생성되는 $TNF-{\cdot}$, IL-6의 생성억제 효과를 측정한 결과 $25{\mu}g/mL$의 처리농도에서 각각 61.7, 62%의 저해 효과를 나타내었다. 따라서 잣나무잎 추출물은 염증억제를 위한 천연 기능성 소재로 활용이 가능할 것으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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