Heat shock proteins (HSPs) are induced in most living cells by mild heat treatment, ethanol, heavy metal ions and hypoxia. In yeast Saccharomyces cerevisiae, mild heat pretreatment strongly induces Hsp104 and thus provide acquired thermotolerance. The ability of hsp104 deleted mutant $({\triangle}hsp104)$ to acquire tolerance to extreme temperature is severely impaired. In providing thermotolerance, two ATP binding domains are indispensible, as demonstrated in ClpA and ClpB proteases of E. coli. The mechanisms by which Hsp104 protects cells from severe heat stress are not yet completely elucidated. We have investigated regulation of mitochondrial metabolic pathways controlled by the functional Hsp104 protein using $^{13}C_NMR$ spectroscopy and observed that the turnover rate of TCA cycle was enhanced in the absence of Hsp104. Production of ROS, which are toxic to kill cells radiply via oxidative stress, was also examined by fluorescence assay. Mitochondrial dysfunction was manifested in increased ROS levels and higher sensitivity for oxidative stress in the absence of Hsp104 protein expressed. Finally, we have identified mitochondrial complex I and Ferritin as binding protein(s) of Hsp104 by yeast two hybrid experiment. Based on these observations, we suggest that Hsp104 protein functions as a protector of oxidative stress via either keeping mitochondrial integrity, direct binding to mitochonrial components or regulating metal-catalyzed redox chemistry.
Effect of silicon (Si) nutrition on growth and temperature stress tolerance of Nephrolepis exaltata 'Corditas' grown in a soilless substrate was examined. In vitro-grown acclimatized plantlets were transplanted into the pots containing a coir-based substrate. A nutrient solution containing 0, 50, or $100mg{\cdot}L^{-1}$ Si was supplied through a drip-irrigation system. After 5 months of cultiv ation, S i-treated and -untreated p lants were grown at 10, 25, or $40{\pm}1^{\circ}C$ under a 12 h photoperiod with $530{\mu}mol{\cdot}m^{-2}{\cdot}s^{-1}$ PPFD and 60% RH. After 7 days, chlorophyll content and chlorophyll fluorescence parameters were measured. Silicon nutrition had a negative effect on growth characteristics of N. exaltata 'Corditas'. However, Si-treated plants had more tolerance to temperature stress than the control plants. The Fv/Fm value was not significantly different when the plants were exposed to $25^{\circ}C$. However, significant difference in Fv/Fm was recorded when plants were exposed to 10 or $40^{\circ}C$. Thus, Fv/Fm could be used as an indicator of low and high temperature tolerance in ferns. The present study also suggests that application of Si may be used to enhance temperature tolerance of ferns.
산화적 스트레스는 정상적인 대사 과정뿐만 아니라 외부적인 환경에 노출 되었을 때 일어나는 것으로 잘 알려져 있다. 이러한 스트레스를 극복하기 위해 생물체들은 각자의 시스템에 맞게 다양한 항산화 시스템을 진화 발전시켜 왔다. Saccharomyces cerevisiae KNU5377 균주는 고온뿐만 아니라 다양한 스트레스에 대해 내성을 가짐을 확인하였다. 대부분의 스트레스는 궁극적으로는 산화적 스트레스로 귀결된다. 이러한 측면에서 본 연구는 KNU5377 균주가 어떠한 시스템에 의해서 다른 균주보다 스트레스 내성을 가지는지를 밝히기 위해 접근하였다. 수행된 연구결과에서 KNU5377 균주는 항산화 시스템과 밀접하게 관련된 단백질(superoxide dismutase, thioredoxin system, heat shock proteins)과 항산화 관련 물질(trehalose)을 과발현함을 확인하였다. 그러나 이러한 단백질들이 어떠한 조절 시스템에 의해서 균주 특이적인 발현 양상을 보이는지는 현재까지 확인되지 않고 있다. 본 연구는 KNU5377 균주 그 자체의 중요성과 함께 균주 내의 스트레스 내성과 관련된 유용한 유전자를 탐색하여 더욱 우수한 유전자원을 발굴하는데 기여 할 것으로 보인다.
Cold, salt and heat are the most critical factors that restrict full genetic potential, growth and development of crops globally. However, clarification of genes expression and regulation is a fundamental approach to understanding the adaptive response of plants under unfavorable environments. In this study, we applied an annealing control primer (ACP) based on the GeneFishing approach to identify differentially expressed genes (DEGs) in Italian ryegrass (cv. Kowinearly) leaves under cold, salt and heat stresses. Two-week-old seedlings were exposed to cold ($4^{\circ}C$), salt (NaCl 200 mM) and heat ($42^{\circ}C$) treatments for six hours. A total 8 differentially expressed genes were isolated from ryegrass leaves. These genes were sequenced then identified and validated using the National Center for Biotechnology Information (NCBI) database. We identified several promising genes encoding light harvesting chlorophyll a/b binding protein, alpha-glactosidase b, chromosome 3B, elongation factor 1-alpha, FLbaf106f03, Lolium multiflorum plastid, complete genome, translation initiation factor SUI1, and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. These genes were potentially involved in photosynthesis, plant development, protein synthesis and abiotic stress tolerance in plants. However, this study provides new insight regarding molecular information about several genes in response to multiple abiotic stresses. Additionally, these genes may be useful for enhancement of abiotic stress tolerance in fodder crops as well a crop improvement under unfavorable environmental conditions.
내염성의 광합성 cyanobateria 인 Aphanothece halophytica로 부터 molecular chaperone으로 가능하는 HSP70 homolog인 dnaK2 유전자를 cloning 하였다. 이 danK2 유전자는 616개의 아미노산으로 구성되었으며 추정되는 분자량 68 kDa 의 단백질을 code하고 있었다. 아미노산 서열로부터 추정되는 DnaK2 단백질의 구조를 분석하여 본 결과, 다른 원핵생물의 DanK2 단백질들이 공통적으로 갖는 특성인 N-terminal ATPase domain과 C-terminal의 peptide-binding domain이 잘 보존되어 있었으며, 다른 HSP70/DanK 단백질들과의 높은은 상동성을 나타내었다. 한편 danK2 유전자는 생장온도인 28$^{\circ}C$에서 낮은 수준으로 구성적으로 발현하였으며 heat stress에 의해 그 발현량이 급격히 증가하였다. 또한 A. halophytica를 고농도의 염 스트레스로 처리한 결과, heat stress가 없음에도 불구하고 그 발현량이 급격히 증가하였다. 이러한 결과들은 DnaK 단백질의 고온 또는 염 스트레스에 따른 세포의 손상을 보호하기 위하여 중요한 기능을 담당하고 있기 때문에 추정된다.
Lee, Eun Byeol;Ahn, Dalrae;Kim, Ban Ji;Lee, So Yeon;Seo, Hyun Won;Cha, Youn-Soo;Jeon, Hoon;Eun, Jae Soon;Cha, Dong Seok;Kim, Dae Keun
Biomolecules & Therapeutics
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제23권1호
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pp.77-83
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2015
The seed of Vigna angularis has long been cultivated as a food or a folk medicine in East Asia. Genistein (4',5,7-trihydroxyisoflavone), a dietary phytoestrogen present in this plant, has been known to possess various biological properties. In this study, we investigated the possible lifespan-extending effects of genistein using Caenorhabditis elegans model system. We found that the lifespan of nematode was significantly prolonged in the presence of genistein under normal culture condition. In addition, genistein elevated the survival rate of nematode against stressful environment including heat and oxidative conditions. Further studies demonstrated that genistein-mediated increased stress tolerance of nematode could be attributed to enhanced expressions of stress resistance proteins such as superoxide dismutase (SOD-3) and heat shock protein (HSP-16.2). Moreover, we failed to find genistein-induced significant change in aging-related factors including reproduction, food intake, and growth, indicating genistein exerts longevity activity independent of affecting these factors. Genistein treatment also led to an up-regulation of locomotory ability of aged nematode, suggesting genistein affects healthspan as well as lifespan of nematode. Our results represent that genistein has beneficial effects on the lifespan of C. elegans under both of normal and stress condition via elevating expressions of stress resistance proteins.
Several theories emphasize that aging is closely related to oxidative stress and disease. The formation of excess ROS can lead to DNA damage and the acceleration of aging. Vigna angularis is one of the important medicinal plants in Korea. We isolated vitexin from V. angularis and elucidated the lifespan-extending effect of vitexin using the Caenorhabditis elegans model system. Vitexin showed potent lifespan extensive activity and it elevated the survival rates of nematodes against the stressful environments including heat and oxidative conditions. In addition, our results showed that vitexin was able to elevate antioxidant enzyme activities of worms and reduce intracellular ROS accumulation in a dose-dependent manner. These studies demonstrated that the increased stress tolerance of vitexin-mediated nematode could be attributed to increased expressions of stress resistance proteins such as superoxide dismutase (SOD-3) and heat shock protein (HSP-16.2). In this work, we also studied whether vitexin-mediated longevity activity was associated with aging-related factors such as progeny, food intake, growth and movement. The data revealed that these factors were not affected by vitexin treatment except movement. Vitexin treatment improved the body movement of aged nematode, suggesting vitexin affects healthspan as well as lifespan of nematode. These results suggest that vitexin might be a probable candidate which could extend the human lifespan.
Kim, Il-Sup;Shin, Sun-Young;Kim, Young-Saeng;Kim, Hyun-Young;Lee, Dong-Hee;Park, Kyung-Moc;Jin, Ingn-Yol;Yoon, Ho-Sung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제20권6호
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pp.974-977
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2010
Cyclophilins contain the conserved activity of cis-trans peptidyl-prolyl isomerase, which is implicated in protein folding, and function as molecular chaperones. When the yeast cyclophilin A gene (cpr1) was subcloned into the prokaryotic expression vector pKM260, it was found that the expression of Cpr1 drastically increased the cell viability of E. coli BL21 when under abiotic stress conditions, as in the presence of cadmium, copper, hydrogen peroxide, heat, and SDS. Therefore, this study illustrates the importance of Cpr1 as a molecular chaperone that can improve the cellular stress responses when E. coli cells are exposed to adverse conditions, while also demonstrating its potential to increase the stability of E. coli strains utilized for the production of recombinant proteins.
Three novel Class A genes that encode heat shock transcription factor (HSF) were cloned from Oryza Sativa L using a yeast hybrid method. The OsHSF7 gene was found to be rapidly expressed in high levels in response to temperature, which indicates that it may be involved in heat stress reception and response. Over-expression of OsHSF7 in transgenic Arabidopsis could not induced over the expression of most target heat stress-inducible genes of HSFs; however, the transcription of some HSF target genes was more abundant in transgenic plants following two hours of heat stress treatment. In addition, those transgenic plants also had a higher basal thermotolerance, but not acquired thermotolerance. Collectively, the results of this study indicate that OsHSF7 might play an important role in the response to high temperature. Specifically, these findings indicate that OsHSF7 may be useful in the production of transgenic monocots that can over-express protective genes such as HSPs in response to heat stress, which will enable such plants to tolerate high temperatures.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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