화학물질은 생체에 들어오면 여러 가지 독성반응을 나타내는데, 독성반응에 따른 유전자 발현을 분석하기 위해 바이오 칩 등을 이용한 신기술이 확산되면서 바이오 디지털 콘텐츠가 다량으로 생성되고 있다. 이 콘텐츠는 그 자체로는 의미가 적고 컴퓨터를 이용한 분석과 보정과정을 거쳐 생물학적으로 의미 있는 값들을 선별하여야 한다. 이런 콘텐츠에는 유전자들의 발현 양상 측정을 목적으로 하는 유전체학(genomics), 유전자의 발현 양상을 측정하는 전사체학(transcriptomics), 단백질의 발현을 측정하는 단백체학(proteomics), 대사체의 발현을 측정하는 대사체학(metabolomics) 등이 있으며, 이를 통칭하여 오믹스(omics)라고 부른다. 오믹스 기술을 독성을 연구하는 분야에 접목한 것이 독성유전체학(toxicogenomics)이며, 이에 대한 콘텐츠를 분석함으로써 독성을 예측하고 독성기전을 규명할 수 있다. 독성분석에 있어서 초기 단계의 분석은 향후 만성독성의 예측에 있어서 중요한 부분을 차지하고 있다. 바이오 디지털 콘텐츠를 이용하여 독성을 예측함에 있어 기존의 방법보다 더 빠르고 정확하게 예측하기 위해서는 많은 정보에 대한 분석기술의 진보가 필요하다. 또, 바이오 디지털 콘텐츠를 이용한 독성예측에 있어서 전체세포보다는 생물학적 현상을 일으키는 특이세포에서 이런 정보를 얻는 것이 중요하다고 생각된다. 또, 향후 바이오 디지털 콘텐츠 분석은 전략적 실험설계에 의한 데이터가 분석되고 축적되어야 하고, 분석알고리즘을 통한 네트워크 분석이 이루어져야 하며, 통합적 데이터 구축을 통해 이루어져야 할 것으로 생각된다.
일품벼(Oryza sativa L. cv. Ilpoombye)에 고선량 감마선을 조사한 후 벼 잎의 생리적 손상과 항산화 효소인 superoxide dismutase (SOD)의 isoenzyme 수준에서의 유전자 발현 및 효소활성 변화와의 연관성을 조사하였다. 500 Gy의 감마선 조사는 24 h 이내에 벼 잎의 단백질, 엽록소, 그리고 카로테노이드의 함량을 유의적으로 감소시켰으며 특히 엽록소는 대조구에 비해 26% 이상 감소하였다. 반면에 SOD isoenzyme들의 유전자 발현은 감마선 조사 후 6 h부터 24 h까지는 전반적으로 대조구보다. 높게 유지되었으나 48 h부터 현저히 감소되어 72h에는 모든 isoenzyme들의 유전자 발현 이 대조구보다. 낮았다. 그러나 isoenzyme들의 효소활성은 조사구에서 일부 CuZn-SOD isoenzyme들의 경우 48 h까지 대조구보다. 약간 높았지만 72h에는 모두 현저히 감소하였다. 따라서 본 연구에 사용된 500 Gy의 고선량 감마선은 단백질, 엽록소, 그리고 카로테노이드 함량의 감소를 초래하며, 조사 후 초기단계에는 이러한 생리적 손상과 무관하게 일시 적으로 SOD isoenzyme들의 유전자 발현을 증가시키지만 72 h 이후에는 유전자 발현과 효소활성을 동시에 감소시키면서 산화스트레스에 의한 생리적 손상을 유도하는 것으로 생각된다.
유해산소제거효소는 세포내에서 생성되는 유해산소를 산소와 과산화 수소로 바꿈으로서 유해산소의 농도를 낮은 수준으로 유지하여 세포를 유해산소의 독성으로부터 보호하는 기능을 담당하고 있다. 이전의 연구에서 파낙사다이올(PD)와 진세노사이드 $Rb_2$가 전사조절인자 AP2를 유도하여 유해산소 제거효소의 전사조절부위 내의 AP2결합부위를 통해 유해산소제거효소의 함량증대를 유도함을 보고한 바 있다. 이를 토대로 본 연구에서는 인삼의 각부위에서 추출된 조사포닌으로 panaxadiol(PD)와 panaxatriol(PT)의 성분함유비가 다른 시료를 이용하여 이들이 유해산소제거효소의 발현 유도성에 미치는 영향을 조사하였다. 이를 조사하기위해 유해산소제거효소의 전사조절부위를 클로람페니콜 아세틸트란스퍼라제의 구조유전자와 융합시킨 벡터를 인간의 간세포에 도입하여 활성도를 측정하였다. 그 결과, PD 성분의 함량비증가에 비례적으로 유해산소제거효소의전사가 증대 되었다. 또한 동일한 결과로서, PD 대 PT의 함량비가 약 2.6으로 PD의 함량이 가장높은 세세미 (finely-hairy root) 추출분획에서 유해산소제거 효소의 전사촉진이 대조군에 비해 3배이상 촉진됨을 관찰할수 있었다. 이상의 결과는 PD계의 분획이 유해산소제거효소의 유도성효과를 나타냄을 시사하고 있으며, 유해산소제거효소의 유도물질로서 PD분획과 세세미 추출물이 유용하게 이용될수있음을 제시하고 있다.
Sterol regulatory element binding factor 1 (SREBF1) and fatty acid synthase (FASN) genes play an important role in the biosynthesis of fatty acids and cholesterol, and in lipid metabolism. This study used polymorphisms in the intron 5 of bovine SREBF1 and in the thioesterase (TE) domain of FASN genes to evaluate their associations with beef fatty acid composition. A previously identified 84-bp indel (L: insertion/long type and S: deletion/short type) of the SREBF1 gene in Korean cattle had significant associations with the concentration of stearic (C18:0), linoleic (C18:2) and polyunsaturated fatty acids (PUFA). The stearic acid concentration was 6.30% lower in the SS than the LL genotype (p<0.05), but the linoleic and PUFA contents were 11.06% and 12.20% higher in SS compared to LL (p<0.05). Based on the sequence analysis, five single nucleotide polymorphisms (SNPs) g.17924G>A, g.18043C>T, g.18440G>A, g.18529G>A and g.18663C>T in the TE domain of the FASN gene were identified among the different cattle breeds studied. Among these, only g.17924 G>A and g.18663C>T SNPs were segregating in the Hanwoo population. The g.17924G>A SNP is a non-synonymous mutation (thr2264ala) and was significantly associated with the contents of palmitic (C16:0) and oleic acid (C18:1). The oleic acid concentration was 3.18% and 2.79% higher in Hanwoo with the GG genotype than the AA and AG genotypes, respectively (p<0.05), whereas the GG genotype had 3.8% and 4.01% lower palmitic acid than in those cattle with genotype AA and AG, respectively (p<0.05). Tissue expression data showed that SREBFI and FASN genes were expressed in a variety of tissues though they were expressed preferentially in different muscle tissues. In conclusion, the 84-bp indel of SREBF1 and g.17924G>A SNP of the FASN gene can be used as DNA markers to select Hanwoo breeding stock for fatty acid composition.
The effects of ginseng saponins, SRbl and G-Rc on the rat liver LDH A-gene transcriptional activity was investigated during prereplicative phase of rat liver after partial hepatectomy. Changes in LDH A-mRNA levels in regenerating rat liver after intraperitoneal administrations of G-Rbl or 'G-Rc were tested by slot blot hybridization methods. The results showed that G-Rbl (1 mg/100g B.W) and G-Rc (1 mg/100g B.W) caused marked increases of LDH A-mRNA contents by respectively 1.9- and 1.5-fold in rat liver at 5-hours after partial hepatectomy Dose dependent elect of G-Rbl and G-Rc (1-25 mg/ 100g B.W) on the LDH A-mRNA levels on regenerating rat liver were also analyzed. The maximal increases of liver LDH A-mRNA levels were observed with the doses of 1 mg for G-Rbl and 5 mg for G-Rc. However, when the administration doses of G-Rbl and G-Rc were increased to 20 mg, G-Rbl caused a marked decrease of LDH A-mRNA level to 61% of those in sham-operated rat liver. In contrast, G-Rc slightly decreased the liver LDH A-mRNA contents by 30% as compared to those of the maximum value but still maintained 22% higher LDH A-mRNA levels then those of sham-operated rate liver. On the basis of these experimental results, we conclude that ginseng saponin, G-Rbl and G-Rc have stimulatory effect at the lower concentration (1 mg/ 100g B.W) and inhibitory effect at the higher concentration (20 mg/ 100g B.W) on the LDH A-gene transcription during regeneration of rat liver. Additionally we also investigated the stimulatory effects of ginsenosides on the protein and DNA sinthetic activities in hepatocyte primary cell cultures isolated from regenerating rat liver. Both of G-Rc and -Re increased the synthetic rates of hepatocytes proteins and DNA at the administration doses of 50 us and 100 $\mu\textrm{g}$/3 ml/dish respectively representing 1.3-1.6 fold increases. From these results we postulate that G-Rc and -Re may have a mitogen ehincer activity for the hepatocyte proliferation during rat liver regeneration period.
Red algae are distributed globally, and the group contains several commercially important species. Griffithsia okiensis is one of the most extensively studied red algal species. In this study, we conducted expressed sequence tag (ESTs) analysis and synonymous codon usage analysis using cultured G. okiensis samples. A total of 1,104 cDNA clones were sequenced using a cDNA library made from samples collected from Dolsan Island, on the southern coast of Korea. The clustering analysis of these sequences allowed for the identification of 1,048 unigene clusters consisting of 36 consensus and 1,012 singleton sequences. BLASTX searches generated 532 significant hits (E-value <$10^{-4}$) and via further Gene Ontology analysis, we constructed a functional classification of 434 unigenes. Our codon usage analysis showed that unigene clusters with more than three ESTs had higher GC contents (76.5%) at the third position of the codons than the singletons. Also, the majority of the optimal codons of G. okiensis and Chondrus crispus belonging to Bangiophycidae were G-ending, whereas those of Porphyra yezoensis belonging to Florideophycidae were G-ending. An orthologous gene search for the P. yezoensis EST database resulted in the identification of 39 unigenes commonly expressed in two rhodophytes, which have putative functions for structural proteins, protein degradation, signal transduction, stress response, and physiological processes. Although experiments have been conducted on a limited scale, this study provides a material basis for the development of microarrays useful for gene expression studies, as well as useful information for the comparative genomic analysis of red algae.
Park, Jeong-Won;Jung, Young-Hwan;Park, Bo-Hyun;Jeoung, Yeon-Hee;Lee, Young-Hoon
BMB Reports
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제29권3호
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pp.221-224
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1996
To examine the growth-phase dependent control of Escherichia coli rnpB gene we used a combination of Northern analysis for RNA determination and Southern analysis for plasmid DNA determination. The relative amounts of metabolically unstable transcript derived from the internally deleted rnpB gene harbored on a multicopy plasmid as well as the relative plasmid contents were measured by Northern analysis and Southern analysis, respectively, of total nucleic acids from E coli cells containing the plasmid. The relative transcription activity of the rnB was represented by a ratio of the relative amount of the transcript to that of the plasmid DNA during bacterial growth. The rnpB transcription increased rapidly with time during exponential growth, but started to decrease before the transition period of an exponential growing cell culture into the stationary phase. Although the expression pattern was similar to the changes of ${\beta}-galactosidase$ activity expressed from the lysogenic strain carrying the chromosomal rnpB-lacZ fusion which were shown in a previous work, the present data appears to represent a more actual growth-phase control of the rnpB transcription than the previous data by the ${\beta}-galactosidase$ assay. In addition the present method described for a direct analysis of both RNA and plasmid DNA provides a rapid and efficient method that can applied to an examination of transcription control by using a multicopy plasmid.
In a previous paper, the ogdH gene that encodes 2-oxoglutarat dehydrogenase was isolated from Salmonella typhimurium. The catalytic N-terminal region in the enzyme was found to be very specific for the Salmonella species. Therefore, the aim of the present study was to detect S. typhimurium in food sources using primers designed for OGDH-l and OGDH-2 which were based on the salmonella-specific region of the ogdH gene. A simple polymerase chain reaction (PCR) detection method was developed to detect low numbers of S. typhimurium in a chicken meat microbial consortium. Using the ogdH-specific primers under stringent amplification conditions and for gene probe analysis, fewer than 100 colony-forming units (CFUs) were detectable when pure cultures were employed. When the PCR assay was run on S. typhimurium-contaminated meat contents, only the positive meat samples containing as few as 200 CFUs reacted to the assay. The method employed for sample processing is simple and it was determined to provide a sensitive means of detecting trace amounts of S. typhimurium-specific sequences in the presence of mixed meat microbial populations. When compared with six representative intestinal gram-negative bacterial strains in foods, including Vibrio parahaemolyticus, V. vulnificus, Enterobacter cloacae, E. coli O157:H7, Pseudomonas aeruginosa, and Proteus sp., S. typhimurium had a unique and distinct PCR product (796 bp). In conclusion, the two OGDH primers were found to be rapid and sensitive detectors of Salmonella spp for the PCR method.
The present study were performed to analysis the hematocrit and the red blood cells content into the blood plasma of the transgenic pigs harboring recombinent human erythropoietin gene (rhEPO). Mouse whey acidic protein (mWAP) linked to rhEPO gene was microinjected into pronuclei of porcine one-cell zygotes. After delivered of offspring, PCR analyses identified one mWAP-rhEPO transgenic founder offspring(F$_{0}$). The first generation of transgenic pig (F$_{0}$) harboring mWAP-hEPO appeared to be a male, and the second generation (F$_1$) pigs were made by natural mating of F$_{0}$ with domestic swine, and male and female transgenic pigs (F$_1$) were identified by PCR. The blood samples from transgenic and normal pigs were collected for 50 days during lactation and were counted the red blood cell (RBC) numbers and Hematocrit (HCT) content into the blood. The transgenic pigs expressing rhEPO in their blood gave rise to higher RBC numbers and HCT contents than control animals. rhEPO was secreted both in the blood and milk of genetically engineered pigs harboring rhEPO gene. Therefore, this study provides a model regarding the production of transgenic pig carrying hEPO transgene for biomedical research.earch.
Two Gram-negative, nonmotile, coccobacilli, SW-$3^T$ and SW-$100^T$, were isolated from sea water of the Yellow Sea in Korea. Strains SW-$3^T$ and SW-$100^T$ contained ubiquinone-9 (Q-9) as the predominant respiratory lipoquinone and $C_{18:1}\;{\omega}9c$ and $C_{16:0}$ as the major fatty acids. The DNA G+C contents of strains SW-$3^T$ and SW- $100^T$ were 44.1 mol% and 41.9 mol%, respectively. A neighbor-joining tree based on l6S rRNA gene sequences showed that the two isolates fell within the evolutionary radiation enclosed by the genus Acinetobacter. Strains SW-$3^T$ and SW-$100^T$ exhibited a l6S rRNA gene similarity value of 95.7% and a mean DNA-DNA relatedness level of 9.2%. Strain SW-$3^T$ exhibited l6S rRNA gene sequence similarity levels of 93.5-96.9% to the validly described Acinetobacter species and fifteen Acinetobacter genomic species. Strain SW-$100^T$ exhibited l6S rRNA gene sequence similarity levels of less than 97.0% to the other Acinetobacter species except Acinetobacter towneri DSM $14962^T$ (98.0% similarity). Strains SW-$3^T$ and SW-$100^T$ exhibited mean levels of DNA-DNA relatedness of 7.3-l6.7% to the type strains of some phylogenetically related Acinetobacter species. On the basis of phenotypic, phylogenetic, and genetic data, strains SW-$3^T$ and SW-$100^T$ were classified in the genus Acinetobacter as two distinct novel species, for which the names Acinetobacter marinus sp. novo (type strain SW-$3^T$=KCTC $12259^T$=DSM $16312^T$) and Acinetobacter seohaensis sp. novo (type strain SW-$100^T$=KCTC $12260^T$=DSM $16313^T$) are proposed, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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