• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제14권10호
• /
• pp.5849-5854
• /
• 2013

Background: Apoptosis may be induced after Bcl-2 expression is inhibited in proliferative cancer cells. This study focused on the effect of autophagy activation by ABT737 on anti-tumor effects of epirubicin. Methods: Cytotoxic effects of ABT737 on the HepG2 liver cancer cell line were assessed by MTT assay and cell apoptosis through flow cytometry. Mitochondrial membrane potential was measured by fluorescence microscopy. Monodansylcadaverin (MDC) staining was used to detect activation of autophagy. Expression of p53, p62, LC3, and Beclin1, apoptotic or autophagy related proteins, was detected by Western blotting. Results: ABT737 and epirubicin induced growth inhibition in HepG2 cells in a dose- and time-dependent manner. Both ABT737 and epirubicin alone could induce cell apoptosis with a reduction in mitochondrial membrane potential as well as increased apoptotic protein expression. Further increase of apoptosis was detected when HepG2 cells were co-treated with ABT373 and epirubicin. Furthermore, our results demonstrated that ABT373 or epirubicin ccould activate cell autophagy with elevated autophagosome formation, increased expression of autophagy related proteins and LC3 fluorescent puncta. Conclusions: ABT737 influences cancer cells through both apoptotic and autophagic mechanisms, and ABT737 may enhance the effects of epirubicin on HepG2 cells by activating autophagy and inducing apoptosis.

• The Plant Pathology Journal
• /
• 제29권1호
• /
• pp.17-30
• /
• 2013

Barley stripe mosaic virus (BSMV) induces massive actin filament thickening at the infection front of infected Nicotiana benthamiana leaves. To determine the mechanisms leading to actin remodeling, fluorescent protein fusions of the BSMV triple gene block (TGB) proteins were coexpressed in cells with the actin marker DsRed: Talin. TGB ectopic expression experiments revealed that TGB3 is a major elicitor of filament thickening, that TGB2 resulted in formation of intermediate DsRed:Talin filaments, and that TGB1 alone had no obvious effects on actin filament structure. Latrunculin B (LatB) treat-ments retarded BSMV cell-to-cell movement, disrupted actin filament organization, and dramatically decreased the proportion of paired TGB3 foci appearing at the cell wall (CW). BSMV infection of transgenic plants tagged with GFP-KDEL exhibited membrane proliferation and vesicle formation that were especially evident around the nucleus. Similar membrane proliferation occurred in plants expressing TGB2 and/or TGB3, and DsRed: Talin fluorescence in these plants colocalized with the ER vesicles. TGB3 also associated with the Golgi apparatus and overlapped with cortical vesicles appearing at the cell periphery. Brefeldin A treatments disrupted Golgi and also altered vesicles at the CW, but failed to interfere with TGB CW localization. Our results indicate that actin cytoskeleton interactions are important in BSMV cell-to-cell movement and for CW localization of TGB3.

• 한국정보통신학회:학술대회논문집
• /
• 한국정보통신학회 2018년도 추계학술대회
• /
• pp.444-447
• /
• 2018

Baculovirus 발현 시스템은 박테리아 발현 시스템, 특히 복잡한 번역 후 변형을 필요로 하는 것과 비교하여 다량의 재조합 단백질을 생성하는 빠르고 비용 효율적인 방법을 포함하는 많은 알려진 장점을 갖는다. 특히 재조합 baculovirus는 광범위한 포유류 세포 유형에서 벡터를 전달하고 재조합 단백질을 발현 할 수 있다. 본 연구에서는 pcDNA3.1로부터 재구성된 baculovirus 벡터를 사용하였는데 이 벡터는 cytomegalovirus (CMV) 프로모터, uroplakin II promoter, polyhedron promoter, 수포 구내염 바이러스 G (VSVG), 녹색 형광 단백질 (EGFP), 단백질 전달 도메인 (PTD) 유전자 등 다양한 유전자들로 재조합 되어 개발되었다. 이러한 재구성 된 벡터를 다양한 세포 및 세포주에 감염시켰다. 이렇게 개발된 baculovirus 벡터는 재조합된 유전자들의 전이성 및 발현성을 기존의 일반적인 벡터와 비교하여 분석하였다. 본 연구결과로 이렇게 개발된 baculovirus 벡터는 기존의 대조군 벡터보다 전이성 및 발현성면에서 더 높은 효율을 갖는다는 것을 확인하였다.

• 한국잠사곤충학회지
• /
• 제52권1호
• /
• pp.25-32
• /
• 2014

본 연구의 목적은 누에형질전환 기술과 피브로인 재조합단백질 발현시스템을 이용하여 청색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결코돈이 없는 EBFP 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 청색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 $3{\times}P3$ promoter와 DsRed2를 이용하여 선발하였고, 300개의 누에알에 microinjection하여 F1 세대에서 5 bloods의 형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 DsRed2 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 EGFP 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2 세대의 누에형질전환체 중에서 5령 3일 유충을 해부하여 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부 견사선에서 청색형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 F2 세대의 고치와 저온에서 정련한 실크에서도 청색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었고, Western blot 분석에서도 EBFP 재조합 단백질이 피브로인 H-chain과 융합된 형태로 존재하는 것이 확인되었다. 이상의 결과에서 청색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었고 이러한 결과를 토대로 새로운 산업소재로서 실크를 활용할 수 있을 것으로 기대한다.

• 한국잠사곤충학회지
• /
• 제52권2호
• /
• pp.102-109
• /
• 2014

본 연구의 목적은 누에형질전환 기술과 피브로인 재조합 단백질 발현시스템을 이용하여 황색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합 단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결코돈이 없는 EYFP 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 황색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 3,060개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 8 bloods의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 EYFP 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2세대의 누에형질전환체중에서 5령 3일 유충의 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부 견사선에서 황색형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 F2 세대의 고치와 저온에서 정련한 실크에서도 황색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었고, Western blot 분석에서도 EYFP 재조합 단백질이 피브로인 H-chain과 융합된 형태로 존재하는 것이 확인되었다. 이상의 결과에서 황색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었다.

• 한국전기전자재료학회논문지
• /
• 제28권5호
• /
• pp.277-284
• /
• 2015

The humans are under attack involving the hazardous environment and pathogen/biotoxin aerosol that is realistic concerned. A portable, fast, reliable, and cheap Pathogen and Biotoxin Aerosol threat Detection(PBAD) trigger is an important technology for detect-to-protect and detect-to-treat system because the man-made biological terror is a fast and lethal infection. The ultraviolet C(UVC) wavelengths light source is key issue for PBAD that is sensitive because of strong fluorescence cross section from fluorescent amino acids in proteins such as tryptophan and tyrosine. The UVC-light emitting diode(LED) is emerging light source technology as alternative to laser or lamps as they offer several advantages. This paper discussed about the design consideration of UVC-LED for the PBAD system. The UVC-LED and PBAD technology, currently available or in development, are also discussed.

• Molecules and Cells
• /
• 제38권9호
• /
• pp.789-795
• /
• 2015

A chromosome territory is composed of chromosomal subdomains. The internal structure of chromosomal subdomains provides a structural framework for many genomic activities such as replication and DNA repair, and thus is key to determining the basis of their mechanisms. However, the internal structure and regulating proteins of a chromosomal subdomain remains elusive. Previously, we showed that the chromosome territory expanded after BAF53 knockdown. Because the integrity of chromosomal subdomains is a deciding factor of the volume of a chromosome territory, we examined here the effect of BAF53 knockdown on chromosomal subdomains. We found that BAF53 knockdown led to the disintegration of histone H2B-GFP-visualized chromosomal subdomains and BrdU-labeled replication foci. In addition, the size of DNA loops measured by the maximum fluorescent halo technique increased and became irregular after BAF53 knockdown, indicating DNA loops were released from the residual nuclear structure. These data can be accounted for by the model that BAF53 is prerequisite for maintaining the structural integrity of chromosomal subdomains.

• 한국정보통신학회:학술대회논문집
• /
• 한국정보통신학회 2012년도 춘계학술대회
• /
• pp.916-919
• /
• 2012

분자 수준의 크기인 세포 내에서 일어나는 현상들을 영상화하는 바이오 이미징 분야는 단백질이나 DNA 등에서 일어나는 현상까지도 공초점 형광현미경을 이용하여 영상으로 또렷이 관찰할 수 있는 수준으로 발전하였다. 따라서 생체 형광 이미징 분야는 진단과 치료를 위해 의료 임상 분야에서 필수적으로 사용되고 있다. 본 논문에서는 시공간의 제약을 받지 않고 형광 이미지를 분석할 수 있는 모바일용 형광이미지 분석통합 관리 시스템을 개발하였다. 개발된 시스템은 서버 클라이언트 기반이며 형광이미지의 강도 값을 분석하고 통합 관리하기 위한 기능을 제공한다. 본 시스템은 의료인이 언제 어디에서나 응급환자의 형광이미지 사진을 분석하여 진단을 내릴 수 있도록 돕기 때문에 유비쿼터스 헬스를 구현하기 위한 수단이 된다.

• KSBB Journal
• /
• 제30권6호
• /
• pp.296-301
• /
• 2015

Eggshell-based biocomposites have become attractive due to their exquisite nanostructure and biological properties, which are mainly composed of highly organized calcium carbonate crystals controlled by organic macromolecules such as proteins and polysaccharides. Here, we designed the recombinant fusion protein of a putative eggshell matrix protein named as GG1234 and a fluorescent reporter protein of DsRed. The protein was successfully over-expressed in E. coli and purified by Ni-NTA affinity chromatography. In vitro calcium carbonate crystallization was conducted in the presence of the fusion protein, and morphological change was investigated. The protein inhibited the calcite growth in vitro, and spherical calcium carbonate micro-particles with the diameter of about $20-30{\mu}m$ were obtained. We expect that this study would be helpful for better understanding of eggshell-based biomineralization.

• BMB Reports
• /
• 제40권4호
• /
• pp.532-538
• /
• 2007

Mouse ficolin A is a plasma protein with lectin activity, and plays a role in host defense by binding carbohydrates, especially GlcNAc, on microorganisms. The ficolin A subunit consists of an N-terminal signal peptide, a collagen-like domain, and a C-terminal fibrinogen-like domain. In this study, we show that ficolin A can be synthesized and oligomerized in a cell and secreted into culture medium. We also identify a functionally relevant signal peptide of ficolin A by using MS/MS analysis to determine the N-terminal sequence of secreted ficolin A. When the signal peptide of mouse ficolin A was fused with enhanced green fluorescent protein (EGFP), EGFP was released into HEK 293 cell medium, suggesting that the signal peptide can efficiently direct ficolin A secretion. Moreover, our results suggest that the signal peptide of ficolin A has potential application for the production of useful secretory proteins.