• 한국어병학회지
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• 제14권2호
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• pp.91-95
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• 2001

1999년 10월에서 11월 사이에 남해안 일대의 홍민어 종묘 생산장에서 20~30열령의 치어가 척추만곡 및 이상유영을 하며 대량 폐사하였다. 병어는 특이 외부 증상이 없었고, 높은 누적폐사량이 바이러스 질병으로 의심되어, 조직학적 및 분자생물학적인 검사를 행하여 폐사원인을 확인하였다. 폐사개체의 조직을 H-E 염색하여 관찰한 결과 뇌와 안구의 신경세포에서 공포와 괴사가 관찰되었고, 전자현미경 관찰에서는 안구와 뇌에서 바이러스 입자가 관찰되었다. RT-PCR 결과에서는 ${\fallingdotseq}426$ bp의 DNA 단편을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 홍민어에서 발생한 대량폐사는 바이러스성 신경괴사증(VNN)으로 진단되었다.

• 한국양식학회지
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• 제15권1호
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• pp.7-13
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• 2002

Since 1993, the White Spot Syndrome Virus (WSSV) disease occurred in China among cultured shrimps resulting in mass mortality. Epizootiological surveys undertaken during the outbreak period of 1993-1994 indicated that all stages of Penaeus chinensis, P. japonicus and P. monodon were infected. Consequent to the transport of contaminated shrimp seedlings and seawater, the disease spread all over the farms of China. The disease was more rapidly transmitted at temperatures above $25^{\circ}C$. Challenge experiments showed the causative agent was highly virulent. White spots appeared on the carapace of both span-taneous and experimentally infected shrimps. Moribund shrimps contained turbid hemolymph, hypertrophied Iymphoid organ and a necrotic mid-gut gland. Electron microscopy showed the presence of viral particles in the gills, stomach, lymphoid organ, and epidermal tissue of the infected shrimp. The visions were slightly ovoid with an envelope and averaged 350 $\times$ 150 nm; nucleocapsids measured 375 $\times$ 157 nm. With discontinuous sucrose gradient of 35, 50 and 60% (w/v), the virus was separated from hemolymph of the infected shrimp. The estimated molecular weight of genomic DNA was 237 Kb with EcoR I, 247 Kb with Hind III and 241kb with Pst I. A total of 9 hybridoma colones secreting monoclonal antibodies (MAbs) were produced from mouse myeloma and spleen cells immunized with WSSV. The immunofluorescence assay of gill tissue showed that the MAbs reacted with diseased but not with healthy shrimp. The MAbs belonged to IgGl, IgG2b subclass and IgM class, all with kappa light Immune-electron-microscopy with colloidal gold marker showed the presence of 5 MAbs epitopes on the envelope and one on the capsid of the virus. Baculoviral mid-gut gland necrosis showed the specificity of the MAbs produced. For diagnosis 5 different methods were selected. Using Kimura primers for PCR, or MAbs for immunoblot, ELISA or FAT method, in situ hybridization was carried out to show the gene. All these methods detected WSSV in the organ samples of the diseased shrimp but not in healthy one.

• 한국어병학회지
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• 제34권2호
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• pp.149-159
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• 2021

Genus Megalocytivirus cause red sea bream iridoviral disease (RSIVD) and scale drop disease (SDD). Based on the phylogeny of the major capsid protein (MCP) and adenosine triphosphatase (ATPase) genes, megalocytiviruses except for SDD virus (SDDV) could be three different genotypes, red sea bream iridovirus (RSIV), infectious spleen and kidney necrosis (ISKNV), and turbot reddish body iridovirus (TRBIV). In this study, primary cells derived from the caudal fin of rock bream (Oplegnathus fasciatus) grew at 25℃ in Leibovitz's medium supplemented with 10% (v/v) fetal bovine serum and primocin (100 ㎍/mL). Rock bream fin (RBF) cells exhibited susceptibility to infections by different genotypes of megalocytiviruses (RSIV, ISKNV and TRBIV) with the appearance of cytopathic effects with an increase in the viral genome copy number. Furthermore, compared to grunt fin (GF) cells, even though 10 times lower number of RSIV genome copies were inoculated in RBF cells, viral genome copy number produced on RBF cells were 44 times higher than that of GF cells at 7 d post-inoculation. As the isolated RBF cells are sensitive to different genotypes of megalocytiviruses (RSIV, ISKNV and TRBIV), they can be used for future studies regarding in vitro viral infection and subsequent diagnosis.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제22권7호
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• pp.1021-1028
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• 2012

In this study, a reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay was developed for the rapid, sensitive, and inexpensive detection of nervous necrosis virus (NNV) in olive flounder, Paralichthys olivaceus, in Korea. A set of six specific primers was designed to target the RNA 2 gene encoding the coat protein of Korean NNV strains. The RT-LAMP reaction successfully detected NNV after 30 min at $65^{\circ}C$. When the sensitivities among RT-LAMP, RT-PCR, and nested RTPCR were compared, the RT-LAMP was shown to be able to detect the RNA template at $2.58{\times}10^{-2}\;TCID_{50}/ml$, whereas the RT-PCR and nested RT-PCR were only able to detect the RNA template at $2.58{\times}10^2\;TCID_{50}/ml$ and $2.58TCID_{50}/ml$, respectively. Thus, the sensitivity of the RT-LAMP assay was higher than those of the RT-PCR assays. In the specificity test of the RT-LAMP, 2 genotypes of NNVs (SJNNV and RGNNV) were positive; however, no other fish viruses were positive with the primers, indicating that the RT-LAMP assay is only specific to NNV. A total of 102 olive flounder were collected from hatcheries between 2009 and 2011. The occurrence of NNV in olive flounder was determined to be 53.9% (55/102) by the RT-LAMP. On the other hand, the prevalence based on the nested RT-PCR and RT-PCR results was 33.8% (34/102) and 20.6% (21/102), respectively. This result indicates that the RT-LAMP assay developed in this study is suitable for early field diagnosis of NNV with high sensitivity.

• 한국어류학회지
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• 제29권3호
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• pp.157-164
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• 2017

2015년 겨울, 우리나라 남해안 소재 육상 양식장에서 사육 중이던 능성어의 약 30%가 폐사하였다. 수온 $9{\sim}12^{\circ}C$의 겨울철에 발생한 능성어 폐사는 신경괴사성바이러스 (NNV) 감염에 의한 바이러스성뇌망망증 (VER)으로 밝혀졌다. 시험어는 비정상적인 유영, 배를 위로한 채 수면을 떠 다니는 현상, 체색흑화, 안구백탁 및 부레의 과도한 팽창 소견을 보였다. 원인 바이러스는 일반적으로 고수온기 능성어에 감염되는 RGNNV genotype이 아닌, 냉수성 어류에서 분리되는 BFNNV genotype으로 밝혀졌으며, NNV 가장 근연관계가 높은 Pacific cod betanodavirus (PCNNV)와 99.7~100% 상동성을 보였다. 병리조직학적 관찰 결과, 바이러스성뇌망망증 (VER)의 특징적인 병변인 뇌조직의 공포화 및 괴사를 수반하였다. 이 연구는 수온 $12^{\circ}C$ 이하의 겨울철에 능성어에 감염된 BFNNV genotype에 대한 첫 보고이다.

• 생명과학회지
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• 제30권4호
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• pp.402-409
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• 2020

신경괴사증바이러스(NNV)는 25 nm의 작은 입자 크기에 RNA1 (3.4 kb, RdRp), RNA2 (1.4 kb, capsid protein) 두 가닥의 RNA를 유전정보를 가진다. NNV는 1980년대 말 처음 보고된 이후 전 세계적으로 120여종의 어류에 감염을 일으키며 심각한 피해를 일으키고 있는 바이러스이다. NNV 감염에 의한 피해를 최소화하고 효율적인 백신들을 개발하기 위해서는 무엇보다 NNV 감염에 따른 세포내 신호전달체계를 이해할 필요가 있다. NNV는 세포내 감염 이후 숙주가 가진 바이러스 복제에 필요한 요소들을 이용할 수 있도록 숙주세포의 cell cycle arrest 등의 기작을 이용하는 것으로 알려졌다. 반면에 숙주 세포는 NNV와 감염된 세포를 제어하기 위해 RIG-1-like receptor signaling pathway 등을 통해 NNV 감염을 인지한 다음 IFN signaling pathway를 통해 항바이러스 작용에 필요한 ISG들을 발현시킨다. 또한 감염된 세포들을 사멸시키기 위해 ER stress를 통한 unfolded protein response (UPR), mitochondria-mediated cell death 작용을 통해 감염된 세포의 apoptosis를 유발한다. NNV 감염 기작에 대한 세포신호전달연구는 아직 초기단계이며 검증해야 할 pathway들이 아직도 많이 남아있는 상황이다. 따라서 NNV 감염과 연관된 다양한 세포신호전달체계를 탐색하고 질병 특이적인 세포신호전달체계를 이해함으로써 신속하고 정확한 진단법 및 백신 개발에 많은 도움이 될 것으로 생각된다.

• 한국어병학회지
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• 제11권1호
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• pp.61-67
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• 1998

PCR을 사용하여 양식 해산어에 iridovirus 감염 여부를 신속히 진단하고자 하였다. 먼저 폐사를 유발하는 iridovirus의 genomic DNA를 pUC19 vector에 cloning한 후 이 clone들의 염기 서열을 GenBank의 염기 서열과 비교 분석하였다. 이들의 염기 서열을 기초로 하여 PCR primer를 제조한 후 PCR을 수행하였다. 정상적인 어류 세포에서는 DNA의 증폭이 일어나지 않았으나 iridovirus에 감염된 세포와 순수 분리된 iridovirus에서는 DNA의 증폭이 일어났다. 이로부터 짧은 시간 내에 폐사를 유발하는 iridovirus를 신속히 진단할 수 있음이 확인되었으며 이러한 PCR을 이용한 진단은 iridovirus의 감염을 확인할 수 있는 간단하고도 정확한 방법을 제공해준다.

• 한국어류학회지
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• 제30권4호
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• pp.185-193
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• 2018

2017~2018년에 거쳐 인천 및 경기지역 뱀장어 양식장 4개소를 대상으로 질병 예찰 및 모니터링을 실시한 결과, 특징적으로 아가미울혈증상을 동반한 질병이 빈번히 발생하였다. 이 질병은 크기에 상관없이 발생하지만 입식 후 3개월 이내의 당년생 뱀장어에서 감염 빈도와 누적 폐사율이 높게 나타났다. 감염어는 새변의 중심정맥동(CVS)의 심한 울혈과 팽창, 간과 신장 조직의 출혈 등과 같은 병리조직학적 감염 특성을 보였다. 또한 아가미 혈관내피세포의 핵과 세포질에서 정이십면체 구조를 가진 직경 70 nm 전후의 바이러스 입자가 관찰되었다. PCR에 의한 분자생물학적 진단법과 유전자 분석을 통해 이 질병의 원인 병원체는 일본에서 주로 보고한 뱀장어바이러스성내피세포괴사증(VECNE)의 원인체인 JEECV로 밝혀졌다. 본 연구는 국내 뱀장어 양식장에서 JEECV 및 VECNE 감염특성을 밝힌 첫 보고이다.