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갓김치에서 분리된 Pediococcus pentosaceus MLK67의 담즙산 분해능 및 콜레스테롤 동화능 (Bile Salts Degradation and Cholesterol Assimilation Ability of Pediococcus pentosaceus MLK67 Isolated from Mustard Leaf Kimchi)

  • 임성미
    • 미생물학회지
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    • 제47권3호
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    • pp.231-240
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    • 2011
  • 숙성된 갓김치에서 분리된 유산균을 pH 2.5에서 2시간 반응시킨 후 0.3% oxgall 존재 하에서 3시간 배양시킨 결과 MLK11, MLK22, MLK27, MLK41 및 MLK67 균주들은 $10^5$ CFU/ml 이상의 균수를 유지하여 높은 저항성을 보인 반면, MLK53 균주는 대부분의 균수가 사멸되어 매우 민감한 것으로 나타났다. 담즙산에 대한 내성이 강한 균주들 대부분은 복합 담즙산의 탈포합능이 있었으며, MLK22와 MLK67 균주는 sodium glycocholate로부터 3.5 mM 이상의 cholic acid을 유리시켜 가장 높은 탈포합능을 보인 반면, MLK13과 MLK41은 각각 1.35와 1.16 mM 정도 낮은 양의 cholic acid를 유리시켰다. 특히, MLK22와 MLK67의 탈포합능은 sodium taurocholate 혹은 포합담즙산 혼합물 보다는 sodium glycoholate 존재 하에서 더 높게 나타났다. 게다가 sodium glycocholate와 sodium taurocholate으로부터 MLK22와 MLK67이 생산하는 bile salt hydrolase (BSH)의 활성은 정지기 초기에 최대를 이르렀고 MLK67 보다는 MLK22의 BSH 활성이 다소 높았다. 한편, 실험 균주들의 콜레스테롤 제거능은 5.22-39.16 ${\mu}g$/ml로 균주별 유의적인 차이가 있었으며(p<0.05), 그 중에서 MLK67 균주는 0.3% oxgall, cholic acid 및 taurocholic acid로부터 가장 높은 콜레스테롤 동화능을 나타내었다. 따라서 실험 균주 중 높은 내산성과 내담즙성을 가지며, 담즙산 탈포합능 및 콜레스테롤 동화능이 유의하게 높은 MLK67 균주는 probiotic 균주로서의 가능성이 있는 것으로 간주되어 이를 생화학적 특성과 당분해능 및 염기서열 분석에 의해 동정한 결과 Pediococcus pentosaceus MLK67로 확인되었다.

Epstein-Barr Virus-infected Akata Cells Are Sensitive to Histone Deacetylase Inhibitor TSA-provoked Apoptosis

  • Kook, Sung-Ho;Son, Young-Ok;Han, Seong-Kyu;Lee, Hyung-Soon;Kim, Beom-Tae;Jang, Yong-Suk;Choi, Ki-Choon;Lee, Keun-Soo;Kim, So-Soon;Lim, Ji-Young;Jeon, Young-Mi;Kim, Jong-Ghee;Lee, Jeong-Chae
    • BMB Reports
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    • 제38권6호
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    • pp.755-762
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    • 2005
  • Epstein-Barr virus (EBV) infects more than 90% of the world's population and has a potential oncogenic nature. A histone deacetylase (HDAC) inhibitor, trichostatin A (TSA), has shown potential ability in cancer chemoprevention and treatment, but its effect on EBV-infected Akata cells has not been examined. This study investigated the effect of TSA on the proliferation and apoptosis of the cells. TSA inhibited cell growth and induced cytotoxicity in the EBV infected Akata cells. TSA treatment sensitively induced apoptosis in the cell, which was demonstrated by the increased number of positively stained cells in the TUNEL assay, the migration of many cells to the sub-$G_0/G_1$ phase in flow cytometric analysis, and the ladder formation of genomic DNA. Western blot analysis showed that caspase-dependent pathways are involved in the TSA-induced apoptosis of EBV-infected Akata cells. Overall, this study shows that EBV-infected B lymphomas are quite sensitive to TSA-provoked apoptosis.

털목이 신품종 '건이' (Characterization of a new variety Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.'Geoni')

  • 김길자;이숙재;김명석;안호섭;김동관;권오도;박흥규
    • 한국버섯학회지
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    • 제14권4호
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    • pp.211-214
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    • 2016
  • '건이'는 2012년 전남농업기술원에서 육성한 털목이 품종으로 2009년 JNM-Mi-21008과 JNM-Mi-21014의 단포자 교배를 통하여 2010년 1차 선발하였다. 2011년부터 2012년까지 특성 및 생산력 검정을 실시한 결과 갓색이 연갈색으로 우수하고 병해충에 강한 계통번호 JNMMI249를 우수균주로 선발하였고 이 계통을 2013년 '건이'라는 이름으로 품종보호출원하여 2016년 등록하였다(제109호: 2016. 6.9.). 건이의 갓은 연갈색으로 매끈하여 기호성이 높으며 씹힘성이 좋고 식이섬유 함량이 높다. 원균배양에 알맞은 배지는 MCM, 맥아, PDA배지이다. 톱밥 봉지재배시 자실체 특성으로 갓색은 연갈색이며 유효경수는 39개/0.9 kg로 많았고 갓 직경 6.9 cm, 갓 폭 8.7 cm로 갓 크기는 작은 경향이다. 배양기간은 $20^{\circ}C$에서 40~54일이며 발이 및 생육기간은 20일로 기존품종보다 다소 긴 편이며 수량은 0.9 kg 봉지당 291 g 정도이다. 또한 병해충에 강하며 2차 균사발생, 부패 등 불량환경조건에서도 우수한 경향을 보였다. 교배모본 및 대조구와의 대치선이 형성되었으며 RAPD를 이용한 유전적 다형성 검정 결과 모균주와 유의적 구별성을 보였다. 또한 식이섬유 함량이 높고 씹힘성이 우수한 특성을 갖고 있는 것으로 나타났다.

Novel SIRT Inhibitor, MHY2256, Induces Cell Cycle Arrest, Apoptosis, and Autophagic Cell Death in HCT116 Human Colorectal Cancer Cells

  • Kim, Min Jeong;Kang, Young Jung;Sung, Bokyung;Jang, Jung Yoon;Ahn, Yu Ra;Oh, Hye Jin;Choi, Heejeong;Choi, Inkyu;Im, Eunok;Moon, Hyung Ryong;Chung, Hae Young;Kim, Nam Deuk
    • Biomolecules & Therapeutics
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    • 제28권6호
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    • pp.561-568
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    • 2020
  • We examined the anticancer effects of a novel sirtuin inhibitor, MHY2256, on HCT116 human colorectal cancer cells to investigate its underlying molecular mechanisms. MHY2256 significantly suppressed the activity of sirtuin 1 and expression levels of sirtuin 1/2 and stimulated acetylation of forkhead box O1, which is a target protein of sirtuin 1. Treatment with MHY2256 inhibited the growth of the HCT116 (TP53 wild-type), HT-29 (TP53 mutant), and DLD-1 (TP53 mutant) human colorectal cancer cell lines. In addition, MHY2256 induced G0/G1 phase arrest of the cell cycle progression, which was accompanied by the reduction of cyclin D1 and cyclin E and the decrease of cyclin-dependent kinase 2, cyclin-dependent kinase 4, cyclin-dependent kinase 6, phosphorylated retinoblastoma protein, and E2F transcription factor 1. Apoptosis induction was shown by DNA fragmentation and increase in late apoptosis, which were detected using flow cytometric analysis. MHY2256 downregulated expression levels of procaspase-8, -9, and -3 and led to subsequent poly(ADP-ribose) polymerase cleavage. MHY2256-induced apoptosis was involved in the activation of caspase-8, -9, and -3 and was prevented by pretreatment with Z-VAD-FMK, a pan-caspase inhibitor. Furthermore, the autophagic effects of MHY2256 were observed as cytoplasmic vacuolation, green fluorescent protein-light-chain 3 punctate dots, accumulation of acidic vesicular organelles, and upregulated expression level of light-chain 3-II. Taken together, these results suggest that MHY2256 could be a potential novel sirtuin inhibitor for the chemoprevention or treatment of colorectal cancer or both.

RAPD 및 ITS 염기서열 분석을 이용한 곰취 속(Ligularia) 식물의 유연관계 분석 (Phylogenetic Relationship of Ligularia Species Based on RAPD and ITS Sequences Analyses)

  • 안순영;조광수;유기억;서종택
    • 원예과학기술지
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    • 제28권4호
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    • pp.638-647
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    • 2010
  • RAPD와 ITS 염기서열 분석을 통하여 $Ligularia$ 속 식물 5종류의 유연관계를 밝혔다. RAPD 분석에서는 총 196개의 random primer를 사용하여 밴드수가 많고 선명한 63개의 primer를 선발하였다. 다형성을 나타낸 밴드는 141개(31.8%)이었으며, 증폭된 크기는 0.2-1.6kb로 다양하였다. 유집 분석 결과, 유사도 값은 0.54-0.95의 범위로 나타났고, 0.77을 기준으로 크게 5그룹으로 나누었다. ITS 영역의 염기서열 분석 결과, ITS 1과 ITS 2 지역은 각각 248-256bp와, 220-222bp로 구성되어 있으며, 5.8S 부분은 164bp로 나타났다. ITS 1과 ITS 2 지역의 총 478개의 염기 중 49(10.2%)군데에서 변이가 있었으며, 구아닌(G)과 시토신(C)의 비율은 ITS 1 지역에서 49.4%, ITS 2에서는 53.5%로 나타났다. 염기서열 분석결과 5종류는 단계통을 형성하였으며, 갯취는 군외군으로 부터 가장 먼저 분계조를 형성하였다. 한대리곰취와 어리곤달비는 79%의 지지율을 가지고 유집되었으며, 곰취와 곤달비도 함께 유집되었지만 지지도는 52%로 낮았다. 이상의 결과에서 두 데이터는 일치하는 결과를 보였지만 한 대리 곰취의 분류학적 위치는 RAPD와 ITS 분석결과가 일치하지 않았다.

서해안 해수로부터 분리한 한천분해 해양미생물 Pseudoalteromonas sp. H9의 동정 및 특성 연구 (Isolation and Characterization of an Agar-hydrolyzing Marine Bacterium, Pseudoalteromonas sp. H9, from the Coastal Seawater of the West Sea, South Korea)

  • 지원재;윤영상;김종희;홍순광
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제43권2호
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    • pp.134-141
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    • 2015
  • 대한민국 대천 해수로부터 agarase를 생산하는 균주 H9을 분리하였다. 본 균주는 16S rRNA 염기 염기서열 분석결과로부터 Pseudoalteromonas espejiana NCIMB2127T (98.98%), Pseudoalteromonas carrageenovora ATCC12662T (98.78%), Pseudoalteromonas atlantica IAM12927T (98.64%), Pseudoalteromonas issachenkonii KMM3549T (98.63%) 등과 높은 상동성을 보였다. 균주 H9은 genomic DNA 내 G+C 농도가 41.56%이고 주요 퀴논으로 quinone-8을 포함하고 있다. 균주 H9의 주요 지방산으로 C16:1ω7c (34.3%), C16:0 (23.72%), C18:1ω7c (13.64%) 등이 포함되었다. 이러한 유전적, 생리적 특성에 따라 균주 H9은 Pseudoalteromonas 속의 균으로 분류하여 Pseudoalteromonas sp. H9으로 명명하였다. 균주 H9이 세포외부로 분비하는 총 agarase는 40-45℃와 pH 7.0-8.0의 조건에서 높은 효소 활성을 갖으며, agarose를 분해하여 (neo)agarotetraose와 (neo)agarohexaose를 생산하였다. 균주 H9은 한천분해를 위해 유용하게 사용될 수 있으며, 다양한 생리활성을 갖는 (neo)agarooligosaccharide는 기능성 식품, 화장품 등의 산업에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

Multiplex PCR을 이용한 생물방제균 Bacillus subtilis AH18의 토양내 Genetic Monitoring (Genetic Monitoring of Plant Growth Promoting Rhizobacterium (PGPR), Bacillus subtilis AH18 using Multiplex PCR in Field Soil)

  • 우상민;임종희;정희영;김상달
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제37권1호
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    • pp.1-9
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    • 2009
  • 식물성장촉진물질인 auxin을 비롯한 식물병원성진균을 방제하는 siderophore 그리고 식물병원성 진균의 세포벽을 분해하는 cellulase를 동시에 생산하는 생물방제균주 B. subtilis AH18의 토양내 monitoring을 위하여 각 생산물질에 관여하는 유전자를 기초로 primer(sid, aec, cel)를 제작하였다. Single PCR 및 multiplex PCR을 수행하여 800-bp(sid), 1000-bp(air), 1600-bp(cel)의 DNA fragment를 확인하였으며, 각각의 fragment는 siderophore의 생합성 key enzyme인 2,3-dihydro-2,3-dihydroxy benzoate dehydrogenase[EC : 1. 3. 1, 28]gene (sid-794bp)이며, auxin efflux carrier gene (aec - 1052 bp), 그리고 cellulase gene(cel - 1582 bp)임을 확인하고, NCBI Genbank에 등록하였다(Genbank accession sid: No. EF408238, aec: No. EF408239, cel: No. EF070194). 또한 B. subtilis AH18을 처리한 일반 경작지 토양에서 multiplex PCR을 통하여 3종의 유전자에서 증폭된 triple band를 확인하였으며, 고추를 실제 토양을 이용해 Pot에 이식 후 고추의 rhizosphere와 non-rhizosphere에서 B. subtilis AH18의 존재를 확인할 수 있다. 뿐만아니라 본 균주를 고추가 이식된 Pot의 토양에 처리 후 monitoring시 민감도는 $1.8\times10^5$ cfu/g이었고, monitoring 가능한 기간은 3주이상 확인 할 수 있었다.

Cellulose Digestibility Increased with CelD Transgenic Pigs

  • Park, J.K.;Lee, Y.K.;Lee, P.Y.;Kim, S.W.;Kim, S.J.;Lee, H.G.;Han, J.H.;Chung, H.K.;Park, C.G.;Chung, Y.H.;Lee, C.H.;Lee, H.T.;Chang, W.K.
    • 한국가축번식학회지
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    • 제27권4호
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    • pp.325-331
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    • 2003
  • This study was performed to test the cellulose digestibility using the transgenic pigs harboring cellulose degradation gene D (CelD). After delivered offsprings between normal pig and transgenic swine, DNA was isolated from piglets tail for PCR analysis. In first generation, five out of 65 piglets showed CelD positive. Unfortunately, four CelD-positive pigs were died during growing, but one survived pig was used as a transgenic founder to produce F$_1$ descendents. Among 3 F$_1$ transgenic pigs produced, one died and the remaining two pigs were used to test the fiber digest efficiency. An assorted feed was composite of 5% fiber with other ingredients. The feed of 3 kg per day was provided to the pigs including transgenic founders and littermate controls. The manure quantity was measured daily for a month, and all manures were dried for three days to analysis nitrogen, phosphate and fiber concentrations. The fiber digestion efficiencies of the transgenic F$_1$ pigs showed approximately 10% higher than those of control pigs. Fiber digestion was not greatly improved in transgenic pigs as it had been expected approximately 30%. Nitrogen concentration of transgenic pig's manure was slowly decreased compare to the control pigs. Because there were only two transgenic pigs tested, a large number of transgenic pigs may be necessary to obtain more reliable data. Breeding of animals to obtain sufficient transgenic pigs subjected for a further study is on progress. Taken together, this study demonstrated successful production of transgenic pigs with increase of cellulose digestibility in the porcine feed.

Differential Influences in Sizes and Cell Cycle Stages of Donor Blastomeres on the Development of Cloned Rabbit Embryos

  • Ju, Jyh-Cherng;Yang, Jyh-Shyu;Liu, Chien-Tsung;Chen, Chien-Hong;Tseng, Jung-Kai;Chou, Po-Chien;Cheng, San-Pao
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제16권1호
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    • pp.15-22
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    • 2003
  • Experiments were conducted to evaluate the effect of blastomere diameters and cell cycle stages on the subsequent development of nuclear transplant rabbit embryos (NT-embryos) using nuclei derived from the 16- or 32-cell stage embryos. All blastomeres and NT-embryos were cultured individually in modified Ham's F-10 medium supplemented with 10% rabbit serum (RS) at $38^{\circ}C$ and 5% $CO_2$ in air. The diameter of blastomeres from 16-cell stage embryos was found twice of those from 32-cell stage (51 vs 27 ${\mu}m$). Significant differences were observed in cleavage rates ($\geq$3 divisions) in the isolated single blastomeres (54 vs 48 for 16-cell; 28 vs 14 for 32-cell, p<0.05), but the fusion rates of oocytes with transferred nuclei were similar between small and large single blastomeres derived from either 16-cell or 32-cell stage embryos. When 16-cell stage blastomeres were used as nuclear donors, cleavage rates ($\geq$3 divisions) of the NT-embryos were greater in the small nuclear donors than in the large donors (73 vs 55%, p<0.05). On the contrary, significantly higher cleavage (43 vs 6%, p<0.05) and developmental rates (14 vs 0%, p<0.05) were observed in the large blastomere nuclear donor group of the 32-cell stage embryos. When the cell cycle stages were controlled by a microtubule polymerization inhibitor (Demicolcine, DEM) or the combined treatment of DEM and Aphidicolin (APH), a DNA polymerase inhibitor, fusion rates were 88-96% for the 16-cell donor group (without DEM treatment), which were greater than the 32-cell donor group (54-58%). Cleavage rates were also greater in the transplants derived from G1 nuclear donor group (93-95%) than those from the DEM and APH combined treatment (73%) for the 16-cell donor group (p<0.05). No significant difference was detected in the morula/blastocyst rates in either donor cell stage (p>0.05). In conclusion, it appeared that no difference in the developmental competence between large and small isolated blastomeres was observed. When smaller 16-cell stage blastomeres were used as nuclear donor, the cleavage rate or development of NT-embryos was improved and was compromised when 32-cell stage blastomeres were used. Therefore, control nuclear stage of the donor cell at $G_1$ phase in preactivated nuclear recipients seemed to be beneficial for the cleavage rate of the reconstructed embryo in the 16-cell transplant, but not for subsequent morula or blastocyst development.

Brevundimonas diminuta를 이용한 돈분뇨에서 발생되는 황화합물의 저감 (Reduction of Sulfur Compounds Produced from Swine Manure, Using Brevundimonas diminuta)

  • 오민환;이은영
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제45권3호
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    • pp.257-264
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    • 2017
  • 혼합유박은 황화물, 암모니아 그리고 아민이 발생하는 것으로 알려져 있다. 악취 저감 미생물을 선별하기 위해 물과 혼합유박이 포함된 바이얼을 농화 배양하였다. 황화물 저감 미생물의 분리를 위해 황화수소 및 메틸메르캅탄 저감 활성실험을 수행하였다. 대조군에는 100 ml 바이알에 혼합유박(0.25 g)과 증류수(10 ml)를 넣어 악취를 발생시켰으며 실험군에는 대조군 바이알과 같은 상태에서 분리균주를 접종하였다. 분리균주 중에서 황화합물의 저감효율이 가장 높은 균주를 일반적인 동정 방법인 16S rRNA sequence 분석으로 동정 결과 Brevundimonas diminuta로 동정되었으며 KCTC에 기탁하여 기탁번호 KCTC11724BP를 부여받았다. B. diminuta는 황화수소 표준가스를 200 ppmv까지 24시간내에 모두 제거하였다. 또한, 황화수소와 메틸머캅탄의 최대 제거 효율은 바이알 실험에서 453 ppmv과 98 ppmv에서 각각 100% 효율을 나타냈다. 또한 돈분을 이용한 악취발생반응기에서는 접종량 20% (v/weight of swine manure)일 때 황화물 95% 이상 제거 효율을 나타냈다.