The cell wall material from fruiting bodies of Laetporus sulphureus has been suggested as a new alternative to mutan for the mutanase induction in Trichoderma harzianum. Structural analyses revealed that the cell wall fraction from this polypore fungus contained 56.3% of (1$\rightarrow$3)-linked $\alpha$-glucans. When the strain T. harzianum F-340 was grown on a cell wall preparation from L. sulphureus, the maximal enzyme productivity obtained after 3 days of cultivation was 0.71 U/ml. This yield was about 1.8-fold higher than that achieved on mutan, known so far as the best, but expensive and inaccessible, inducer of mutanase production. Cell-wall-induced mutanase showed a high hydrolytic potential in reaction with a dextranase-pretreated mutan, where maximal degrees of saccharification and solubilization of this biopolymer (80% and 100%, respectively) were reached in 3 h at 45$^{\circ}C$. The mutanase preparation was also effective in degradation of streptococcal mutan and its removal from oral biofilms, especially in a mixture with dextranase.
인간의 장내 상재 세균이며 인간에게 다양한 건강 증진 효과를 부여하는 것으로 알려진 Bifidobacterium속을 유아의 분변으로부터 분리하여 세포질, 세포벽 및 배양액의 고분자 획분을 대상으로 in vitro에서 장관면역계를 경유한 골수세포 증식활성을 검토하였다 분리한 6종의 Bifidobacterium속 중에서 Bifidobacterium SL-21의 세포벽 성분(CWP)이 농도 의존적으로 가장 높은 골수세포의 증식을 나타내었다. 한편, 골수세포 증식은 Peyer's patch를 매개로 일어나는 반응이므로 Peyer's patch에 의해 생성되는 cytokine류의 활성을 측정하였다. B. bifidum SL-21의 세포벽 성분과의 반응에 의해 GM-CSF, IL-2 및 IL-6 등의 cytokine류의 생산 증가가 확인되었으며 cytokine의 생산은 반응한 세포벽 성분에 농도 의존적 경향을 보였고 골수세포 증식이 증가할수록 높은 cytokine 생산 증가를 나타냈다. 불용성인 B. bifidum SL-21 세포벽을 lysozyme 처리하여 수용화시켜 분자량에 따른 활성을 검토한 결과, 분자량 30-50 kDa의 획분에서 가장 높은 골수세포 증식활성이 측정되었다. 이와 같은 결과를 토대로 하여 B. bifidum SL-21 세포벽 성분이 Peyer's patch의 림프구를 활성화시키고 이들 활성화된 림프구에서 생성되는 cytokine류에 의해 골수세포 증식이 이루어짐을 확인할 수 있었다. 또한 이들 활성화된 면역세포는 CM-CSF, IL-2 및 IL-6 등의 전신순환 면역계의 증강에 중요한 역할을 갖는 cytokine류를 생산하였다.
Ha Chang-Hoon;Yun Cheol-Won;Paik Hyun-Dong;Kim Seung-Wook;Kang Chang-Won;Hwang Han-Joon;Chang Hyo-Ihl
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제16권2호
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pp.247-255
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2006
Yeast cell wall matrix particles are composed entirely of mannoprotein and ${\beta}-glucan$. The mannoproteins of yeast cell wall can systemically enhance the immune system. We previously purified and analyzed alkali-soluble ${\beta}-glucans$ [${\beta}$-(1,3)- and ${\beta}$-(1,6)-glucans] [10]. In the present study, a wild-type strain was first mutagenized with ultraviolet light, and the cell wall mutants were then selected by treatment with 1.0 mg/ml laminarinase (endo-${\beta}$-(1,3)-D-glucanase). Mannoproteins of Saccharomyces cerevisiae were released by laminarinase, purified by concanavalin-A affinity and ion-exchange chromatography. The results indicated that the mutants yielded 3-fold more mannoprotein than the wild-type. The mannoprotein mass of mutant K48L3 was 2.25 mg/100 mg of yeast cell dry mass. Carbohydrate analysis revealed that they contained mannose, glucose, and N-acetylglucosamine. Saccharomyces cerevisiae cell wall components, mannoproteins, are known to interact with macrophages through receptors, thereby inducing release of tumor necrosis factor alpha ($TNF-{\alpha}$) and nitric oxide. Mannoprotein tractions in the present study had a higher macrophage activity of secretion of $TNF-{\alpha}$ and nitric oxide and direct phagocytosis than positive control ($1{\mu}g$ of lipopolysaccharide). In particular, F1 and F3 fractions in mannoproteins of K48L3 enhanced and upregulated the activity of nitric oxide secretion and macrophage phagocytosis by approximately two- and four-fold, respectively.
효모세포벽 용해효소의 일종인 Zymolyase$(endo-{\beta}-1\;,3-glucanase)$와 더불어 Arthrobacter luteus로 부터 생산되었고, 또한 Zymolyase의 조효소중에서 발견된 바 있는 염기성 AL-protease의 효모세포벽 용해작용을 S. sake의 생세포와 그 세포벽 표품(標品)을 사용하여 조사하였다. AL-protease의 효모 생세포에 대한 용해활성은 그 단독작용만으로는 지극히 미약하였으나, Zymolyase와의 복합작용에 의해서 용해활성은 고도로 상승하였다. 효모생세포를 AL-protease와 Zymolyase로써 단계적인 처리를 할 경우, 효모세포는 AL-protease로 전처리된 뒤에 Zymolyase로 처리되는 처리 순서에 한하여 효과적으로 용해되었다. 이러한 AL-protease의 촉진적 작용은 AL-protease처럼 염기성이고 serine protease로 알려진 몇가지 시판의 효소들 중에서는 발견되지 않았으며, 또한 AL-protease의 이러한 작용은 실험에 사용된 효모들의 배양조건 및 균종에 따라서 커다란 영향을 받는 것으로 밝혀졌다. AL-protease는 효모세포벽 표품(標品)으로부터 일정량의 peptide와 상당량의 당을 유리시키고 있으나, 그 세포벽을 66% 이상은 용해시키지 못하였다. 반면에, Zymolyase는 그 단독작용으로도 효모세포벽을 거의 완전히 용해시킬 수 있었다. 이상의 실험결과를 기초로 하여, S. sake 세포벽의 용해에 있어서 AL-protease의 효소적 작용은, 먼저 AL-protease가 mannan과 단백질로 구성되는 세포벽 표층부에 결합하고, 이어서 그들의 구조를 변화시킴으로써, Zymolyase를 세포벽의 외부로 부터 알카리 불용성 glucan으로 구축되고 있는 세포벽 내부의 골격구조로까지의 침투를 촉진시키는 것으로 추론되었다.
새로운 probiotic 유산균으로써의 잠재적 이용가능성을 평가할 목적으로, 김치로부터 분리한 Lactobacillus brevis FSB-1을 대상으로 각종 면역증진활성의 특성이 조사되었다. L. brevis FSB-1을 전균체, 세포벽, 세포질 및 균체외 획분으로 각각 분리하고 장관면역 활성을 측정한 결과, Peyer's patch 세포를 매개로 한 골수세포 증식활성의 경우, 세포벽 및 세포질 획분에서 상대적으로 높은 활성을 농도 의존적으로 보인 반면, 직접적인 골수세포 증식활성은 나타내지 않았다. 마크로파지의 활성화능은 전균체, 세포벽 및 세포질 획분에서 상대적으로 높은 활성을 보였으며, splenocyte mitogen 활성의 경우, 이들 획분에서 공히 대조군의 약 200%이상의 활성 증가가 관찰되었다. 그러나 양성대조군인 LPS의 활성에는 다소 미치지 못하였다. 한편 보체계 활성화능을 검토한 결과, 균체외 획분을 제외한 모든 획분에서 높은 활성을 보였으며, 특히 세포질 획분에서 농도 의존적으로 매우 강력한 활성을 나타냈다. 또한 세포질 획분에 의한 보체계 활성화는 anti-human C3를 이용한 2차원 면역전기영동에 의해 classical 및 alternative pathway 양 경로를 경유함을 확인할 수 있었다.
떫은감 둥시를 이용한 감장아찌 제조 중 과육의 세포벽 성분과 연화효소의 변화를 조사한 결과, 알콜불용성 물질 및 세포벽 성분의 함량은 감장아찌 제조 시 간장 및 된장 침지 모두 침지 시간이 길어질수록 감소하는 경향을 나타내었으며, 침지 20일째까지는 완만하게 감소하였으나 30일 이후부터 급격한 감소가 발생하였다. 수용성 물질의 함량은 간장 및 된장 침지 모두 침지 기간이 증가할수록 점차 증가하는 경향을 나타내었다. Lignin, pectin 질 및 산 가용성 hemicellulose의 함량은 간장 및 된장 침지 장아찌 모두 침지 기간이 경과하여 숙성이 진행될수록 감소하였으나, 알칼리 가용성 hemicellulose는 침지시간이 길어질수록 증가하는 양상을 나타내었다. Cellulose의 함량은 간장 및 된장 침지 각각 침지초기의 $6.07{\pm}0.09\;mg/g$과 $6.18{\pm}0.13\;mg/g$에서 침지 50일째 $6.09{\pm}0.17\;mg/g$와 $6.28{\pm}0.32\;mg/g$으로 큰 변화를 나타내지 않았다. 감장아찌의 경도는 간장 및 된장 침지 모두 침지 30일째까지는 증가하다가 그 이후에는 감소하는 경향을 나타내었다. Polygalacturonase와 pectinesterase는 간장 및 된장 침지 모두 침지 10일째부터 효소활성이 증가하기 시작하였으며 침지 기간이 경과할수록 효소활성은 높아지는 것을 알 수 있었다. ${\beta}-Galactosidase$의 경우도 간장 및 된장 침지 모두 침지 10일째부터 효소활성이 증가하기 시작하여 침지 30일째까지 완만한 상승을 나타내다가 침지 40일째부터 급격한 효소활성의 증대가 관찰되었다.
This study was carried out to investigate on the morphology, distribution and stainability of the mast cells in the Korean Native goat. For the study, the experimental animals were anesthetized with pentobarbital sodium and opened the anterior abdomianl wall to remove immediately the specimens with a minimum of mechanical effects. The mesenteries were fixed in 10% neutral formalin, 4% basic lead acetate, absolute alcohol and ethlene glycol monoethyl ether. Following 24 hours of fixation, the toto preparation stained with 0.4% toluidine blue, 1% methylene blue, 1.5% bismark brown, saturated thionine and thionlne-methylene blue complex solution. The preparation were observed from 10 microscopic field with 450 magnification. The results were as follows: 1. The form of the mesenteric mast cell was found 2 types. One was spindle form in larger number around vessels, the other was ovoid or spherical form in connective tissue far from blood vessels. 2. The average size was $18.63{\pm}5.75{\mu}m$ in length, $10.61{\pm}3.39{\mu}m$ in width and number was $105.50{\pm}18.45$. 3. Ethylene glycol monoethyl ether was particularly useful in preserving the mast cell granules. 4. Thione-methylene blue complex solution might be recommended to stain of granules.
This study was performed to find out the types of linkage of carbohydrates in wood cell walls. To study the structure of linkage of carbohydrates in wood cell walls, we have attempted to find out the method holocellulose preparation and optimum condition of enzyme hydrolysis in holocellulose, and fractionate oligosaccharide with products that hydrolized partly by acetolysis and deacetylation in holocellulose. We have achieved four results. These results as follow; 1. At first. we reacted in wood meal $NaClO_2$ 1g per lignin lg for one hour and then the same of quantity $NaClO_2$ for four hours. Through these experiments, we have developed new holocellulose preparation method which had low loss of carbohydrates and high effect of the delignification. 2. The optimum condition of enzyme hydrolysis of holocellulose which had lignin was 0.005M sodium acetate buffer (pH 5.0). We have achieved 7.2% reducing sugar through the procedure that reactioned 0.01g holocellulose putting enzyme 0.03g for 72 hours. It may be supposed that 5.5% of lignin contained in holocellulose prevented enzyme contaction from holocellulose and so this lignin has resulted in the low efficiency of enzyme hydrolysis. 3. We did not fractionated from oligosaccharides which were preparated by the method of acetolysis and deacetylation in holocellulose. The reason is that holocellulose having a lot of lignin prevented prefectly partial hydrolysis from the method of acetolysis and deacetylation. 4. We attempted analysis of six standard substances through HPLC apparatus having sugar pak 1 column which we have changed flow rate and the column temperature variably. These six standard substances were D-glucose, D-mannose, D-xylose, D-galactose and L-rhamnose, L-arabinose, But sugar pak 1 column was not fitted analysis of four substances because D-galactose, D-mannose, D-xylose, L-rhamnose were agreement with elution time. And so, we could not analize four standard substances with sugar pak 1 column.
The attachment of 2-aminobenzamide to carboxylated multi-wall carbon nanotubes (MWCNTs)-COOH was achieved through the formation of amide bonds. Then, the functionalized MWCNTs, MWCNT-amide, were treated by phosphoryl chloride to produce MWCNT-quin. The products were characterized by Fourier transform infrared spectroscopy, Raman spectroscopy, scanning electron microscopy, thermogravimetric analysis, derivative thermogravimetric, steady-state fluorescence spectroscopy, and solubility testing. MWCNT-quin showed photo-electronic properties, which is due to the attachment of the 4-hydroxyquinazoline groups to them as proved by steady-state fluorescence spectroscopy. This suggests intramolecular interactions between the tubes and the attached 4-hydroxyquinazoline. The toxicity of the samples was evaluated in human embryonic kidney HEK293 and human breast cancer SKBR3 cell lines, and the viable cell numbers were measured by 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) after the cells were cultured for 24 h. Cellular investigations showed that the modified MWCNTs, particularly MWCNT-quin, have considerably significant toxic impact on SKBR3 as compared to HEK293 at the concentration of 5 µg/mL.
The effects of yeast on the fermentation of kimchi were investigated. The treatments were divided into two groups; yeast treatment during salting of Chinese cabbage(YS) and yeast treatment added in kimchi preparation(YF kimchi). The edible periods of the kimchi after yeast treatment during salting (YS kimchi) was extended 4~5 days by the results of pH, acidity, sensory quality. The activities of amylase, polygalacturonase and galactosidase of YS kimchi were retained at low levels compared to non treated condition throughout all fermentation periods, whereas protease activity was not significant different from the non treated condition. In addition, the contents of total hexose and uronic acid did not show remarkable change throughout fermentation, but total pentose was decreased by more than 7% at the early middle stage of fermentation(7~14 day after soaking). The change of free amino acid content was decreased by 16~44% than the non treated condition. In contrast, in the YF kimchi, the sensory quality was not good. The activities of amylase, protease, polygalacturonase and gal actosidase were appreciably higher than that of the non treated condition. Meanwhile, the contents of total hexose, total pentose and uronic acid, as products of degradation of cell wall constituents by the above enzymes, were decreased by 18~68% throughout fermentation than the non treated con dition, and total free amino acids were higher than the YS kimchi. Thus, yeast treatment during salting was found to be more effective to extend the edible periods of the kimchi.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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