Green tea, which has high polyphenols amount, is thought to have hypocholesterolemic effects. The present study was performed to further examine the hypocholesterolemic action of green tea, especially (-) epigallocatechin gallate (EGCG) for its effect on diet-induced hypercholesterolemia in rats. Male Sprague-Dawley rats (n=15) were fed a green tea-free diet (control), $1.0\%$ green tea catechin (catechin) or $0.5\%$ green tea catechin EGCG for seven weeks. Hypercholesterolemia was induced by adding $1\%$ cholesterol and $0.5\%$ cholic acid to all diets. There was no difference in food intake and body weight gain among the groups. The green tea EGCG treatment led to a significant improvement in plasma levels of total cholesterol, low density lipoprotein (LDL)-cholesterol and high density lipoprotein (HDL)/LDL ratio (p<0.05). There was no significant effect on the plasma HDL-cholesterol level. The catechin treatment led to a 4.19-fold increase in the LDL-receptor mRNA level compared to the control, but the EGCG treatment did not affect the hepatic LDL-receptor mRNA level. Our results suggest that when blood cholesterol level is down-regulated by green tea EGCG, the LDL receptor gene-independent pathway may dominate the hypocholesterolemic action of EGCG.
본 연구는 녹차의 혈중 콜레스테롤 저하 효과 및 녹차 추출물인 catechin과 EGCG가 hypocholesterolemic 효과에 미치는 정도를 식이로 고콜레스테롤혈증을 유도한 흰쥐에서 평가하고자 수행하였다. 4주령의 수컷 SD계 흰쥐를 난괴법에 따라 각 군당 5마리씩 무녹차섭취군(대조군), 4% 녹차분말군(GTP), 1% 녹차 catechin군(Catechin),0.5% 녹차 EGCG군(EGCG)의 4군으로 7주간 사육을 하였다. 녹차 첨가군은 모두 0.5% EGCG를 함유하도록 녹차 첨가량을 결정하였으며 모든 식이는 고콜레스테롤혈증을 유도하기 위하여 1% cholesterol과 0.5% cholic acid를 첨가하였다. 식이섭취량은 각 군간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 혈청 총 및 LDL-콜레스테롤 수준은 Catechin군이 189.2 mg/dL, 166 mg/dL, EGCG군에서는 161.4 mg/dL, 138 mg/dL로 나타나 대조군(245 mg/dL, 222 mg/dL)에 비하여 유의적으로 감소되었고 (p<0.05), EGCG군에서 그 효과는 더욱 크게 나타났다. 혈청의 중성지방농도는 녹차섭취군이 대조군보다 낮았으며 EGCG군에서 가장 낮게 나타났다. HDL-콜레스테롤 수준은 유의적이지는 않았지만 녹차섭취군이 대조군보다 높은 경향을 보였고, HDL/LDL-콜레스테롤 비율은 대조군에 비하여 녹차섭취군에서 증가하여 EGCG군에서 가장 높았다. 이와 같은 결과는 녹차의 섭취가 혈중 콜레스테롤 및 중성지방을 감소하고, HDL-콜레스테롤은 증가시킴으로써 동맥경화 위험을 줄일 수 있는 가능성을 반영하고 있다. 간에서의 CYP7Al활성과 유전자 발현정도는 Catechin군, EGCG군이 대조군에 비하여 높게 나타났으며, EGCG군에서 가장 많이 증가하여 혈청에서의 지질수준 감소 경향과 일치하였다. 이상의 본 연구 결과들은 녹차 섭취군에서의 혈중 콜레스테롤 저하작용 특히 EGCG군에서의 현저한 hypocholesterolemic 효과는 CYP7Al 유전자 발현 및 효소의 활성증가에 따른 콜레스테롤의 담즙산으로의 배설 증가에 기인하는 것으로 추측된다.
녹차에 있어서 맛성분으로도 중요하고, 최근에는 그 약리작용의 연구과 활발히 연구되고 있는 catechin의 함량 분석을 국산 시판 녹차를 시료로 하여 시도하였다. 100mg의 시료 분말 녹차를 열수 출출한 후 $CHCl_3$를 가하여 시료 용액으로 부터 caffeine를 제거시키고 EtOAc를 가하여 catechin류를 추출 농축하여 5ml로 한 다음 $0.45\;\mu\textrm{m}$ membrane filter를 통과시킨 후 $2\;\mu\textrm{l}$을 HPLC에 주입시켰다. 4종류의 고순도 정량분석용 catechin류를 표준용액으로 한 검량선법에 의하여 시료중의 catechin 함량을 구하였다. 그 결과, EGCg의 함량(찐 1번차 : 7.54%, 볶은 1번차 : 7.88%)이 가장 많았고 EGC, ECg, EC의 순서로 그 함량이 감소하엿다. 수확시기가 늦은 2번차에서는 EGCg, ECg 와 같은 gallate는 증가하고 EGC는 약간 감소하는 경향을 나타내어 차의 맛에 영향을 주는것 같다.
시중에 유통되고 있는 녹차중의 catechin류에 대하여 열수추출 및 HPLC분석을 통하여 함량을 조사하고 이를 효율적으로 이용하기 위하여 pH조건이 녹차 catechin류의 안정성에 미치는 영향에 대하여 분석하였다. 시판 중인 전남 보성산 녹차의 catechin류 함량은 (+)-catechin>(-)-EGCg>(-)-EGC>(-)-EC>(-)-ECg순으로 추출되었고 Total catechin류의 함량은 103.72mg/g이었다. 녹차에서 분리·정제되어진 catechin류인 (+)-catechin, (-)-EC, (-)-ECg, (-)-EGCg를 pH 3∼11에 대한 안정성을 흡광도측정장치를 이용하여 측정하였다. 그 결과 catechin류의 pH에 대한 영향을 최대흡수파장 및 흡광도 변화로 보면 pH가 높을수록 (+)-catechin과 (-)-EC은 흡광도가 증가되었고 (-)-ECg와 (-)-EGCg는 최대흡수파장이 증가되었다. 또한 7일간 실온에서 저장하면서 기간에 따른 변화를 살펴본 결과에서 산성조건에서는 큰 변화가 없지만 알칼리조건에서는 흡광도가 증가되었다. (+)-catechin과 (-)-EC은 알칼리조건에서 흡수파장 400∼430 nm에서 저장기간이 길수록 흡광도가 증가되었다. 이는 녹차의 갈변과 관계가 있을 것으로 생각되었다. 이상의 결과로, 녹차 Catechin유도체의 pH 및 저장기간에 대한 영향은 ECg, EGCg에 gallic acid의 결합에 의한 것으로 생각되고, C, EC의 불안정은 중합반응으로 생각된다. 녹차 catechin류는 대부분 산성에서 저장기간이 길고 안정한 것으로 나타났으나 생리활성이 강한 (-)-EGCg는 산성에서도 불안정한 것으로 나타났다. 결론적으로 녹차의 기능성 성분을 효율적으로 이용하기 위해서는 pH를 낮게 유지하여야 할 것으로 사료되어진다.
녹차는 최근 많은 건강 식품으로 많은 관심을 받고 있는 물질이며 함암 및 항산화 효과, 면역체계 강화, 항혈전 효과, 피부암 예방, 심장병 예방 콜레스테롤 예방과 같은 효능을 지닌 카테킨 화합물을 포함하고 있다. 본 연구에서는 녹차로부터 카테킨 화합물을 회수하기 위하여 용매 추출과 분배 방법을 사용하였으며 추출 시 용매, 시간과 온도에 따른 회수율을 비교하여 최적 추출 조건을 조사하였다. 실험 결과로부터 얻은 최적추출 조건은 물 8$0^{\circ}C$에서 40분 동안 추출한후 카페인을 제거하기 위하여 클로로포름으로 분배를 실시하고 다시 에틸아세테리트로 분배를 실시하는것이다. 에틸아세테이트 층에는 EGC, EC EGCG, ECG와 같은 카테린 화합물이 분배되어 있다. 더 나아가서는 제조용 액체 크로마토그패를 이용하여 항암 및 항산화 효과가 가장 좋은 EGCG를 얻을 수 있다.
실험에 사용된 녹차는 전남 보성에서 재배된 것으로 국내시장에서 구입하였다. 녹차 5g을 순수한 물 5$0^{\circ}C$에서 추출한 후 클로로포름과 에틸아세테이트로 분배하였다. 추출액을 크로마토그래픽 컬럼 (4.6$\times$250 mm, 15$\mu\textrm{m}$, Lichrospher 100RP-18)을 이용하여 정제하였다. 정제된 추출액으로부터 $\mu$-Bondapak $C_18$(3.9$\times$300mm, 10$\mu\textrm{m}$) 컬럼을 이용하여 녹차에 포함된 카테킨 화합물을 분리하였으며, EGC(Epigallocatechin, C(catechin), EC(Epicatechin), EGCG(Epigallocatechin Gallate) and ECG(Epicatechin Gallate)의 순으로 용출되었다. 본 연구의 결과로서는 목적물질인 EGCG를 분리하기 위해 이동상의 조성은 0.1%의 아세트산이 포함된 물/아세토나이트릴, 87/13 %(v/v)이었다. 유량은 1.0 $m\ell$/min, UV 검지기는 280nm로 고정하였다. 위의 실험조건으로 5g의 전남 보성산 녹차로부터 순도 98% 이상의 121.3mg EGCG를 얻을 수 있었다.
(-)-Epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a mai or tea catechin has been shown to have many interesting biological activities. In the present study, we studied the effects of green tea catechins, EGCG metabolites, and black tea theaflavins on accumulation of EGCG in HT-29 human colon cells. Intracellular levels of [$^3H$]-EGCG were not changed significantly in the presence of other tea catechins including (-)-epicatechin, (-)-epigallocatechin, and (-)-epicatechin-3-gallate. EGCG methyl metabolites and EGCG 4"-glucuronide did not affect cellular levels of [$^3H$]-EGCG. Black tea theaflavins and theasinensin A (TsA), an EGCG oxidative dimer, however, significantly decreased cellular accumulation of EGCG in HT-29 cells by 31-56%. This decrease was more pronounced when cells were incubated in the presence of theaflavin-3',3"-digallate (TFdiG) or TsA. When EGCG was added separately from TFdiG or TsA, the accumulation of EGCG in HT-29 cells was also significantly decreased regardless of when TFdiG or TsA was added during the uptake study (p<0.01). The results suggest that theaflavins and TsA may interrupt EGCG absorption through the gastrointestinal epithelium.
녹차를 천일염과 혼합하여 발효시킨 후 항균활성을 가지고 있고 셀룰라제가 없는 균종을 첨가하여 발효시킨 실험에서 녹차만을 발효시켰을 경우보다 천일염을 첨가하여 발효시킨 모든 시료에서 카테킨류인 EGC, EC, EGCG, ECG의 추출량이 증가하였고, 발효 일에 따른 분석에서는 EGC(epigallocatechin), ECG(epicatechin gallate), EC(epicatechin), EGCG(epigallocatechin gallate)모두에서 2일째와 3일째 높은 추출량이 검출되었다. 또한 발효균을 첨가하여 발효시켰을 경우 Paenibacillus spp에서는 모든 카테킨류(EGC, EC, EGCG, ECG)의 추출량이 증가하였고, Bacillus amyloliquefaciens에서는 EGC와 EC는 감소하고 EGCG와 ECG는 증가하였으며, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis는 모든 카테킨류(EGC, EC, EGCG, ECG)에서 감소하였다. 위와 같은 실험의 결과에서 녹차에 천일염과 Paenibacillus spp를 함께 3일 동안 발효시킨 결과에서 가장 많은 카테킨류가 추출되었다.
Green tea has been recognized as a favorite beverage for centuries in Easter and Westers cultures. Recently, anti-tumor effects of green tea constituents have received increasing attention. However, the mechanism of catechin-mediated cytotoxicity against tumor cells remains to be elusive. To elucidate the mechanical insights of anti-tumor effects, (-)epigallocatechin-gallate(EGCG) of catechin was applied to human lung cancer A549 cells. (-)EGCG induced the death of A549 cells, which was revealed as apoptosis in DNA fragmentation assay. (-)EGCG induced the activation of caspase family cysteine proteases including capase-3, -8 and -9 proteases in A549 cells. Furthermore, (-)EGCG increased the phosphotransferase activity of c-Jun N-terminal kinase 1JNK 1), which further induced tole transcriptional activation of activating protein-1(AP-1) in A549 cells. We suggest that (-)EGCG-induced apotosis of A549 cells is mediated by signaling pathway involving caspase family cysteine protease, JNK1 and transcription factor, AP-1.
The present study was conducted to investigate the translocation of polyphenols, especially catechin derivatives, from mushroom medium mixed with green tea residues into fruiting body of Pleurotus eryngii. Pleurotus eryngii was grown on the media incorporated by mixing or surface-treated with dry materials including leaf petioles and young stems or leaves of green tea. The dry materials treated in medium did not affect plant height and fresh weight of Pleurotus eryngii body. From the samples of Pleurotus eryngii, the eight main catechin derivatives (-)-gallocatechin(GC), (+)-catechin (C), (-)-epicatechin (EC), (-)-epigallocatechin (EGC), (-)-epigallocatechin gallate (EGCG), (-)-gallocatechin gallate (GCG), (-)-epicatechin gallate (ECG), and (-)-catechin gallate (EGCG), and caffeine were analyzed quantitatively by HPLC. The results showed that EGC in Pleurotus eryngii was 45% more detected, when incorporated with the dry materials, than untreated control. Especially, content of EGCG was increased in surface-treated Pleurotus eryngii up to 3.2 ppm, while it was not detected or reduced in control and other treatments. Caffeine content was greatly increased regardless of treatment method, compared with control (0.1ppm), showing 44 fold-amount in Pleurotus eryngii at early growth stage when incorporated with the dry materials into medium. The results indicates that functional catechin derivatives of green tea would be partly translocated into Pleurotus eryngii throught incorporation and surface treatment with residues of green tea plants.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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