2008년 4월 제주도의 왕벚나무 빗자루병 이병옆으로부터 5개의 균을 분리하여 생리학적 방법과 유전학적 방법을 이용해 동정한 결과 Taphrina wiesneri로 동정되었다. 21개의 농약을 이용하여 실내 항균력을 검정한 결과 tebuconazole, difenoconazole, propiconazole과 같은 triazole계의 농약이 우수한 항균효과를 나타내었다. Triazole계의 농약을 처리한 야외 실험 결과 $25.7{\sim}52.8%$의 빗자루병 방제효과를 나타내었다.
To evaluate the phylogenetic and taxonomic status of the phytoplasmas associated with water dropwort (Oenanthe javanica DC) disease in Korea and Japan, their 16S rDNA was analyzed. DNAs extracted from water dropworts collected in Korea (Kyongnam province) and Japan (Chiba prefecture) affected by witches' broom and yellows were subjected to PCR using phytoplasma-specific primers, which amplified a 1.4-kbp fragment that included the 16S rDNA. Phytoplasmas were characterized by RFLP analysis using AluI, HaeIII, HhaI, KpnI, MseI, and RsaI restriction enzymes and by sequence analysis of the PCR products. The mater dropwort witches'broom (WDWB) and water dropwort yellows (WDY) 16S rDNA sequences were identical and closely related to onion yellows (OY, 99.9% identity), which belong to the aster yellows (AY) 16S-subgroup. However, the KpnI RFLP analyses clearly distinguished the WDY and WDWB phytoplasmas from the OY phytoplasma. The phylogenetic analysis based on 16S rDNA showed that WDWE and WDY phytoplasmas are members of a relatively homogeneous group that evolved from a common ancestor.
빗자루병에 의하여 심각하게 이병된 제주도 5.16도로의 왕벚나무 가로수들에 대하여 피해 상황과 이병 발병 원인을 생태적으로 밝히고 그에 따른 방제 대책을 마련키 위하여 본 연구를 수행하였다. 왕벚나무 가로수 중 45년생 이상의 노거수들은 거의 모두가 심각한 정도의 빗자루병에 감염되었으며, 30년생 역시 모든 나무들이 감염되었으나 중간 정도의 발병 반응을 보이고 있었다. 그러나 수령이 23년생 미만의 왕벚나무들은 병징을 찾아볼 수 없는 건전주로 생장하고 있었다. 3년 주기로 전정 작업을 실시한 제주대학교 입구에 식재된 왕벚나무에서는 도로변 남쪽면의 나무들이 북쪽면에 비해 병 발생이 심하고 생육 또한 저조하였다. 병 발생이 심각한 산천단으로부터 견월악까지의 횡단로 좌우 인근 30m내에 자생하는 벚나무들은 수령에 따라 차이는 있지만 병 발생이 경미하였다.
Typical whiches broom symptoms caused by phytoplasma were observed in Ash (Fraxinus rhynchophylla Hence) in Korea. The symptoms were showing abnormally small leaves, short internodes, and proliferation of shoots. Fluorescence and electron microscopy of leaf midribs revealed phytoplasma positive DAPI fluorescence and numerous phytoplasma bodies localized in the phloem sieve tubes. Phytoplasma DNA of 1.8 Kb was detected consistently from all symptomatic samples by the amplification of phytoplasma DNA with the phytoplasma specific primer pair Pl/P7. But no phytoplasma DNA was detected in healthy ash seedlings. Based on sequence analyses of an amplified region, this phytoplasma is closely related to Eqilodium phyllody, Mulberry dwarf, and Aster yellows phytoplasmas with the homology of 99.95 %, 99.79 % and 99.78 %, respectively, This phylogenetic analyses indicate that ash witches broom phytoplasma but is evidently distinct from the ash yellows group 16SrⅦ and should be classified into the Aster yellows group 16SrⅥ.
Typical phytoplasma whiches' broom symptoms were observed in Ash (Fraxinus rhynchophylla Hence) in Korea. The symptoms of the disease were showing abnormally small leaves, shorted internodes and proliferation of shoots. Examination of fluorescent and electron microscopy of leaf midribs revealed numerous phytoplasma bodies localized in the phloem tube cells. The phytoplasmas were detected in all the symptomatic samples by the amplification with phytoplasma specific primer pair P1/P7 consistently, and the expected size was 1.8 kb. However, the phytoplasma DNA was not detected in healthy seedlings. Based on sequence analysis of amplified region, this phytoplasma has close homologies with eqilodium phyllody, mulberry dwarf, and aster yellow phytoplasmas, 99.95%, 99.79% and 99.78%, respectively, This phylogetic analysis indicates that ash witches' broom phytoplasma should be classified in the aster yellow group 16SrVI and clearly distinct from the ash yellow group 16SrVII.
Phytoplasmas have been associated with more than 46 plant species in Korea. Several vegetables, ornamentals, fruit trees and other crop species are affected by phytoplasma diseases. Six 16Sr groups of phytoplasmas have been identified and these phytoplasmas are associated with 63 phytoplasma diseases. Aster yellows phytoplasmas are the most prevalent group and has been associated with more than 25 diseases in Korea. Jujube witches' broom, paulownia witches' broom and mulberry dwarf diseases cause economic losses to host trees throughout the country. So far, Korean phytoplasmas belong to six species of 'Candidatus Phytoplasma'; 'Ca. P. asteris', 'Ca. P. pruni$^*$', 'Ca. P. ziziphi', 'Ca. P. trifolii', 'Ca. P. solani$^*$' and 'Ca. P. castaneae'. The diseases are distributed throughout the country and most of them were observed in Gyeongbuk and Chonbuk provinces. At least four insect vectors; Cyrtopeltis tenuis, Hishimonus sellatus, Macrosteles striifrons and Ophiola flavopicta have been identified for phytoplasma transmission.
Askari, N.;Jouzani, Gh. Salehi;Mousivand, M.;Nazari, A. Hagh;Abbasalizadeh, S.;Soheilivand, S.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권1호
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pp.81-88
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2011
The anti-phytoplasma activities of surfactin (derived from Iranian native Bacillus subtilis isolates) and tetracycline towards Candidatus "Phytoplasma aurantifolia", the agent of lime Witches' broom disease, were investigated. HPLC was used to quantify the surfactin production in four previously characterized native surfactin-producing strains, and the one producing the highest amount of surfactin (about 1,500 mg/l) was selected and cultivated following optimized production and extraction protocols. Different combinations of purified surfactin and commercial tetracycline were injected into artificially phytoplasmainfected Mexican lime seedlings using a syringe injection system. An absolute quantitative real-time PCR system was developed to monitor the phytoplasma population shifts in the lime phloem during 3 months following the injections. The results revealed that the injections of surfactin or tetracycline had a significant inhibitory effect on Candidatus "P. aurantifolia". However, the combined treatment with both surfactin and tetracycline (1:1) resulted in the highest inhibition due to a synergic effect, which suppressed the phytoplasma population from about $2{\times}10^5$ to less than 10 phytoplasma units/g plant tissue.
Dienes 염색법을 국내에 발생하는 마이코플라스마성 식물병의 진단에 적용해 보면서 본 염색법의 보다 효과적인 이용을 위한 실험에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1 Dienes 염색법을을 통한 식물 마이코플라스마병의 진단방법은 일일초와 뽕나무에서만 지정적이었고, 대추나무, 오동나무 및 붉나무에서는 부정적이었다. 2. Dienes 염색액의 $0.2\%$와 $0.4\%$ 수용액이 일일초와 뽕나무에 각각 적합했으며, 염색시간은 $5\~10$분 그리고 탈색시간은 $10\~20$분이 좋았다. 3. 정확한 현미경적 관찰이나 선명한 사진을 위해서 절편의 두께는 $50\~100{\mu}$가 적당하였다. 4. 공시식물의 각 부위중에서 줄기 정부 바로 밑의 부위가 좋은 결과를 나타냈으며, 엽병이나 중륵도 거의 동등한 결과를 나타냈다. 5. 이병식물에서 염색반응의 정도는 병세와 비례했으며, 병징발견 초기의 시료는 건전시료와 염색반응에 있어서 쉽게 구별되지 않았다. 6. 시료를 종절할 경우 대부분의 관요소들이 상처를 받지 않을 뿐만 아니라 정확한 관찰이 용역하므로 시료를 횡절할 경우보다 효과적이었다. 7. 염색된 시료를 현미경 관찰할 경우 filter를 사용하지 않고 텅스텐 적색광을 그대로 사용하면 사관요소와 도관요소 간의 색갈 대비를 증가시키며 정확한 해석에 도움을 주었다. 8. 시료를 고정액에 고정시키면 염색반응이 방해되었으며, 시료는 신선한 것일수록 염색반응이 뚜렷하였다.
In an experiment to evaluate the various aspects of symptom of witches' broom of jujube tree with two different kinds of scions, taken from diseased plant and stem- grafted upon sound stocks-one cut before wintering(stored in cellar), the other after wintering, it was observed that the disease rate of those cut before wintering(Nov.) was $\98\%$ whereas those cut after wintering(March) showed much lower rate, $3\%$ initially and gradually increased up to $39\%$. In another experiment of diseased bud grafted into healthy seedling, the finding made in the following year was that 14 stocks(only one of which salt union by callusing) were infected out of the given 23- in the initial stage only 4, yet gradually increased to the number of 14. The shoots from the ground portion of the diseased stock were in general more quickly subjected to the disease than the others. Under natural condition, the diseased trees develop at first seemingly the same leaves as healthy ones; it is not until the branches and loaves grow to a considerable degree that the symptom appears. Once appearing, tile disease grows and the symptom continues to appear as late as in Sept. and early Oct., causing tile plant to develop the extraordinary branches and leaves of extremely reduced size, the typical symptom of witches' broom. Such phenomenon can be observed in the experiments of the foregoing paragraphs. And the suckers and roots of diseased plant are bound to be infected, it was found out with no exception. Viewing from the results of the above experiments and observation, it is believed that the low temperature during winter causes the virus in the above-ground portion of diseased plant to diminish or inactivated, and subsequently the virus in the roots moves up or multiply in the sprouting season.
자낭균인 Taphrina wiesneri는 한국의 공원과 도로 주변에 주로 식재되는 왕벚나무에 빗자루병을 발생시킨다. 이 병원균은 생태적 특성이 잘 알려져 있지 않아 방제법 등을 개발하는데 어려움이 있다. 이번 연구에서는 빗자루 병원균의 월동부위를 조사하기 위해 빗자루 병징을 보이는 왕벚나무의 건전가지와 이병가지, 그리고 병징이 나타나지 않은 건전한 왕벚나무 가지에서 종 특이적 primer (TwITSF와 TwITSR)를 사용하여 월동부위를 조사하였다. 그 결과 빗자루병에 감염된 왕벚나무의 이병가지 뿐만 아니라 건전가지에서도 종 특이적인 PCR 증폭산물이 관찰되었으며, 그 이외의 건전한 왕벚나무와 감염목 주변의 다른 식물 종 샘플에서는 PCR 증폭산물이 관찰되지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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