Gradual mortality of look down fish (Selene vomer) was observed in a private aquarium in Seoul, showing abnormal swimming behavior and lethargy. A bacterial pathogen from kidney was cultured, identified, and confirmed as Vibrio harveyi using Vitek System 2 and 16S rRNA gene sequencing. A predominant bacterial strain, SNUVh-LW2 was proved to be most closely related to isolates from China by phylogenetic analysis with minimum evolution method. Also, tetracycline was considered as the most sensitive antibiotic agent via antibiotic susceptibility test. The group of fish was treated according to the diagnostic result and no more mortality was observed.
넙치 병어에서 Photobacterium damselae subsp. damselae와 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii)를 분리한 후 in vivo에서 병원성을 비교하였다. 분리균을 인위감염 한 결과, 폐사율, 혈청의 ALT, AST, cortisol 농도가 vibrio 감염구에 비하여 P. damselae 감염구에서 높게 나타났다. 또한, P. damselae 감염구에서 비특이적 면역반응인 식세포의 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응과 혈청의 라이소자임 활성이 유의적으로 낮게 나타났다. 따라서, P. damselae는 특이적 효소인 damselysin의 분비로 높은 용혈능과 phospholipase 활성, 감염 시 내부 장기의 손상에 의한 ALT와 AST 상승, cortisol 농도의 증가로 인한 면역기능 저하가 높은 병원성을 나타낸 것으로 사료된다.
이 연구의 목적은 코리네형 균주(Corynebacterium glutamicum)에 존재하는 acyltransferase 유전인자의 발현에 관여하는 autoinducer에 대한 정보를 얻기 위해 다양한 종류의 균주에서 얻은 세포배양액(cell-free culture fluids)을 처리하여 발현에 미치는 효과를 조사하는 것이다. 다양한 배양시간동안 얻은 Agrobacterium tumefaciens의 세포배양액은 acyltransferase의 발현을 전혀 증가시키지 못하는 것으로 관찰되었다. 반면 AI-1과 AI-2를 분비하는 것으로 알려진 Vibrio harveyi BB120($AI-1^+$, $AI-2^+$)을 지수성장기까지 배양시켜 얻은 세포배양액은 acyltransferase의 발현을 증가시키는 것으로 관찰되었다. 이들 autoinducer가 미치는 효과를 조사하기 위하여 돌연변이 균주인 MM77 ($AI-1^-$, $AI-2^-$)과 BB152 ($AI-1^-$, $AI-2^+$)를 사용하여 조사한 결과, 이들 균주에서 얻은 세포배양액은 BB120와는 달리 acyltransferase의 발현을 증가시키지 않는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 보아 acyltransferase의 발현은 AI-1에 의한 효과로 보이며, 이를 확인하기 위해 V. harveyi BB152와 같이 AI-2만을 분비하는 것으로 알려진 Escherichia coli ($AI-1^-$, $AI-2^+$)를 사용하였다. 하지만 E. coli 세포배양액은 acyltransferase의 발현을 증가시키는 것으로 관찰되었다. 이들 결과는 코리네형 균주에 존재하는 autoinducer는 기존에 알려진 형태의 신호분자와 차이가 있을 것이며, 코리네형 균주외에 V. harveyi와 E. coli에도 존재하여 종간 상호작용(interspecies communication)에 관여할 것으로 보인다.
넙치, Paralichthys olivaceus 병어에서 분리된 Photobacterium damselae subsp. damselae와 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii)의 병원성을 in vitro에서 조사하였다. Extracellular products (ECPs)의 성상은 효소 활성, 양과 넙치 적혈구에 대한 용혈능과 cell-line에 대한 세포 독성을 조사하였다. 그리고 세균의 internalization에서 signal transduction pathways를 signal transduction inhibitor를 이용하여 조사하였다.P. damselae는 phospholipase 활성, 넙치 적혈구에 대한 용혈능, 세포독성이 높게 나타났으며, 분리된 vibrios 균주에 비하여 internalization에서 다양한 경로를 나타내었다. 따라서 이러한 활성은 P. damselae의 병원성과 관련이 있을 것으로 생각된다.
A bioluminescent assay method for detecting the activity of phospholipase C(PLC; phosphatidyl choline cholinephosphohydrolase, EC 3.1.4.3) was developed using bioluminescent marine bacteria. Phospholipase C from Bacillus cereus and sn-1,2- dimyristoyl glycerol was further hydrolyzed with lipase from Candida ecylidracea. The hydrolyzed myristic acid was quantified using a dark mutant of Vibrio harveyi (designated as M-17). The in vivo light intensity of which was stimulated specifically up to one thousand fold in the presence of myristic acid. The rates of the hdrolysis of the DMPC substrate by the phospholipase measured by the luminescence method were linear with time and the were estalished to detect as little as 0.1 mUnit of phospholipase C and 5 nM of myristic acid production.
본 연구에서는 2002년에서 2004년간 우리 나라 해수 어류 양식장에서 분리되는 세균 중 비브리오 속에 속하는 세균의 종 조성을 조사하였다. 질병의 증상을 보이는 어류로부터 166개의 비브리오속 세균 균주를 수집하였으며, 이들 균주는 넙치 (133 균주), 조피볼락 (8 균주), 참돔 (6 균주), 대하 (5 균주), 감성돔 (4 균주), 전복 (3 균주) 및 기타 해수 어류 (7 균주) 등에서 분리한 균주를 대상으로 하였다. 모든 분리 균주에 대하여 각종 생화학적 성상을 조사하고 그 특성에 따라 분리 균주를 구분하였다. 각 생화화적 성상 group에서 대표 균주를 선정하여 16S rRNA 및 16S-23S rRNA 유전자 서열을 분석하고 이들 결과를 종합하여 분리 균주을 동정하였다. 그 결과 14종 이상의 비브리오 종으로 동정할 수 있었으며, 그 종 조성은 V. ichthyoenteri (45 strains), V. alginolyticus (34 strains), V. harveyi (32 strains), Ph. damselae subsp. damselae (Formerly V. damsela, 10 strains), V. campbellii (6 strains), V. costicola-like (6 strains), V. fisheri (5 stains), V. fluvialis (4 strains) 및 Vibrio spp. (24 strains) 등이었다.
최근 2년간 동해안 지역 넙치 양식장의 양식 넙치에 피해를 일으키는 P. damselae 균을 분리하였으며, 분리된 P. damselae의 16s rRNA 염기 서열은 P. damselae subsp. damselae ATCC 33539와 99%의 상동성을 나타내었다. 분리 균주는 Pedersen et al.(1997)의 biotype과 비교한 결과, biotype No 8과 동일하게 나타났으며, P. damselae subsp. damselae ATCC 33539의 LPS와 동일한 단백질 패턴을 나타내었다. 넙치의 병어로부터 P. damselae와 Vibrio 속 세균의 감염 상태를 조사한 결과, P. damselae가 가장 높은 감염율을 나타내었고, 그 다음으로 V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi와 V. ordalii순으로 감염율이 나타났다.
Microbiologically influenced corrosion (MIC) of metal is common in the natural environment and sulfate reducing bacteria are representative microorganisms for MIC. We found that biofilm fomlation by SRB on the metal surface might be controlled by quorum sensing, which is a cell density dependent regulation of cell metabolism. As cell free culture fluids (spent media) of Desulfovibrio vulgaris and D. desulfuricans were tested for quontrn sensing related test strains, it was found that spent media of two SRB induced increased luminescence of Vibrio harveyi BB886 (sensor 1+, sensor 2-) and BB170 (sensor 1-, sensor 2+). Quorum activities of D. vulgaris and D. desulfuricans appeared to be parallel to growth patterns, i.e., it was low in the lag phase, highly increased in the exponential phase, and reached maximum in the stationary phase. Interestingly, however, luminescence of V. harveyi BB886 and BB170 induced by a unit cell mass of the SHB showed a maximal peak in the late lag phase. Hence, it was suspected that quorum sensing of these two SHB play unknown roles in shifting cells from dormant to growth stages.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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