• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제30권1호
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• pp.93-100
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• 2020

A bacterial strain inhibiting the growth of Vibrio anguillarum, the causative agent of vibriosis, was isolated from fish intestines. The isolated strain HS36 was identified as Aerococcus urinaeequi based on the characteristics of the genus according to Bergey's Manual of Systematic Bacteriology and by 16S rRNA sequencing. The growth rate and antibacterial activity of strain HS36 in shaking culture were higher than those in static culture, while the optimal pH and temperature for antibacterial activity were 7.0 and 30℃, respectively. The active antibacterial substance was purified from a culture broth of A. urinaeequi HS36 by Sephadex G-75 gel chromatography, Sephadex G-25 gel chromatography, and reverse-phase high-performance liquid chromatography. Its molecular weight, as estimated by Tricine SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, was approximately 1,000 Da. The antibacterial substance produced by strain HS36 was stable after incubation for 1 h at 100℃. Although its antibacterial activity was optimal at pH 6-8, activity was retained at a pH range from 2 to 11. The purified antibacterial substance was inactivated by proteinase K, papain, and β-amylase treatment. The newly purified antibacterial substance, classified as a class II bacteriocin, inhibited the growth of Klebsiella pneumoniae, Salmonella enterica, and Vibrio alginolyticus.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권2호
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• pp.129-134
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• 2003

본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 어병세균인 Gram 음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 혹은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20종의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 등에서 분리하여 어류병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, 그리고 Streptococcus sp.에 대해 항균활성이 있는 7종의 균주를 1차 선발을 하였다. pH 및 항생제 내성능을 검토하여 probiotic 균주를 분리하였다. 분리된 후보 균중 창란젓에서 분리된 BK19에서 가장 큰 항균 spectrum과 pH 내성 그리고 항생제에 대한 내성이 확인되어 최종적으로 본 실험의 공시균주로 선발하여 생화학적, 형태학적 특성 및 16S rRNA 분석을 통하여 Lactobacillus sakei BK19로 동정하였다.

• 생명과학회지
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• 제18권6호
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• pp.789-795
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• 2008

어류 질병 치료를 위한 probiont의 개발에 목적을 두고 어병균 Vibrio anguillarum NCMB1의 생육에 저해물질을 생산하는 Bacillus amyloliquefaciens H41균주를 분리하고 이 물질의 특성을 규명하기 위하여 정제를 시행하였다. 분리 균을 배양한 배양 상등액을 70% 염석, 투석하여 조 효소액으로 제작하고 조 효소액을 DEAE-sephadex, A-50 ion exchange chromatography, sephadex G-200 gel filtration column chromatography을 통하여 정제하고 SDS-PAGE 를 통하여 단일밴드를 확인하고 최종 회수율 2.9%을 얻을 수 있었으며 40.8배의 정제된 V. anguillarum NCMB1 생육저해물질을 얻을 수 있었다. 정제된 저해물질은 저해정도에 따라 단위를 설정하여 활성을 측정하였으며, 분자량은 48 kDa 로 확인되었으며 정제물질의 활성을 위한 최적 반응 pH와 온도는 pH 7.5와 $30^{\circ}C$로 확인되었다. 금속이온의 효과에 있어서는 $CoCl_2$, $HgCl_2$, $ZnSO_4$, $AgNo_3$에서는 완전히 저해되는 양상을 나타내었고 $MgSO_4$, $MnSO_4$에서 미미한 효소활성의 증가를 나타내었다. 그리고 염에 관한 안정성은 일반 해수의 농도인 3%의 농도에서도 활성을 나타내는 것으로 확인되었다. 정제된 저해물질을 현재 상업적으로 사용하고 있는 화학처리제나 항생제와 함께 효율성을 비교 해 보았을 때 저해물질은 약 78%의 저해 활성을 나타내는 것을 알 수 있었고 항생제보다는 효율성이 낮았으나 독성검사를 위해 정제물질을 살아있는 어류에 투여하였으나 어떤 해수어도 폐사하지 않는 것으로 보아 어류 자체엔 독성을 나타내지 않는 물질로 나타났다. 따라서 B. amyloliquefaciens H41 균주가 생산하는 정제 물질이 V. anguillarum 생육에 저해물질로 작용하는 것으로 밝혀졌으며 친환경적인 특성을 가진 물질로 밝혀졌다.

• 한국어병학회지
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• 제13권1호
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• pp.45-51
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• 2000

최근 육상의 넙치 양식장에서는 두 가지의 서로 다른 특성을 가지는 세균성질병이 같이 감염되는 혼합감염증이 빈번하게 발생하고 있는데, 혼합감염증은 서로 다른 원인균의 특성 때문에 단일 종류의 약제만으로는 치료효과를 거두기가 어려운 실정이다. 그러므로 본 연구는 약제의 병용 투여에 의해 이들의 상승작용을 이용함으로써 합병증에 대한 치료효과를 높이기 위한 기초자료를 얻고자 실시하였다. 어류 세균성질병의 원인세균인 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Staphylococcus epidermidis을 선정하여 병용 항균제의 시험관내 활성을 평가하는 대표적 방법인 Checkerboard법을 적용하여 fractional inhibitory concentration (FIC)지수를 구하여 상승효과를 나타내는 병용 항균제를 찾아내었다. (OTC+LM), (TC+FF), (OTC+FF)의 병용 항균제는 V. anguillarum에 대하여, (SNF+FF), (TC+FF), (SNF+OXA), (OTC+FF)의 병용 항균제는 E. tarda에 대하여, (CFX+OL), (OTC+OL), (TC+OL), (OTC+LM), (OTC+SPM), (OTC+EM), (DOXY+OL), (TC+SPM)의 병용 항균제는 Streptococcus sp.에 대하여, (CFX+EM), (FF+EM), (DOXY+OL), (CFX+OL)의 병용 항균제는 S. epidermidis에 대하여 시험관내 상승적 상호작용을 나타내었다.

• 생명과학회지
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• 제17권10호
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• pp.1434-1440
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• 2007

본 연구는 넙치의 면역반응에서 버섯균사체 (상황버섯, 운지버섯) 혼합배양추출물의 효과에 대해서 연구하였다. 혼합배양추출물은 넙치에 대해서 성장, 혈액, 라이소자임활성, 백혈구, 식세포활성 및 Vibrio anguillarum에 대한 질병저항성에 관해서 평가되었다. 성장에 있어서 버섯균사체 혼합 배양 추출물을 섭이한 그룹의 체중은 52 g 전장은 2.1 cm가 대조구보다도 증가하였다. 혈액학적으로 버섯균사체 혼합 배양추출물을 경구투여 했을 때 글루코오스의 양이 증가하였다. 그러나 각 그룹에 대한 COT (glutamic oxaloacetic transaminase), GPT (glutamlc pyruvic transamlnase), TG, TP, LDH (lactate dehydronase)의 유의적인 차이는 없었다. 라이소자임 활성은 대조구 보다 실험구에서 80%의 높은 결과를 얻을 수 있었으며, 식세포 활성은 실험구에서 대조구 보다 60% 높은 활성을 보였다. 라이소자임 활성과 식세포 활성의 결과 경우에는 12주후에 다소 감소하는 양상을 보였지만, 대조구 보다는 높은 활성을 보였다. 그리고 $7{\times}10^8\;CFU$ 농도로 어류 병원성 세균인 Vibrio anguillarum를 어류 당 투여하여 병원성 테스트를 한 결과 누적 폐사율을 대조구와 비교해 보았을 때 25%의 높은 생존율을 보였다.

• 한국어병학회지
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• 제22권2호
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• pp.115-124
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• 2009

넙치 병어에서 Photobacterium damselae subsp. damselae와 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii)를 분리한 후 in vivo에서 병원성을 비교하였다. 분리균을 인위감염 한 결과, 폐사율, 혈청의 ALT, AST, cortisol 농도가 vibrio 감염구에 비하여 P. damselae 감염구에서 높게 나타났다. 또한, P. damselae 감염구에서 비특이적 면역반응인 식세포의 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응과 혈청의 라이소자임 활성이 유의적으로 낮게 나타났다. 따라서, P. damselae는 특이적 효소인 damselysin의 분비로 높은 용혈능과 phospholipase 활성, 감염 시 내부 장기의 손상에 의한 ALT와 AST 상승, cortisol 농도의 증가로 인한 면역기능 저하가 높은 병원성을 나타낸 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제27권10호
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• pp.1161-1167
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• 2017

본 연구는 양식업에 막대한 경제적인 손실을 야기시키는 세균성 어류질병인 Vibrio anguillarum을 예방하고 억제하기 위한 목적을 두고, 제주 연안에 서식하는 군소 알로부터 특징적인 균주를 분리 하였다. 이를 16S rRNA 염기서열 분석, 형태학적 특성을 통해 균을 동정하여 Phaeobacter inhibens KJ-2로 명명하였다. Phaeobacter inhibens KJ-2 균주는 Vibrio sp.에 대해 강한 항균 활성을 갖고 있으며, 항균물질의 생산특성을 배양조건에 따라 검토하였으며, 그 결과 진탕 배양의 경우 $20^{\circ}C$에서 24시간 배양 후, 정치 배양의 경우 96시간 배양 후 항균 활성이 가장 높게 나타났다. 진탕 배양 및 정치 배양 모두 4시간 후부터 생육도는 낮았으나 항균 물질 생산을 시작하였다. 생육도가 거의 없는데도 불구하고 항균물질이 생산이 이루어졌는데, 이는 QS (Quorum Sensing)의 신호 물질인 AHLs과 관련이 있다고 사료되며, AHLs의 생성능은 항균 활성과 거의 일치함을 알 수 있었다. 이런 배양특성을 바탕으로 항균 활성을 검토한 결과 V. anguillarum외 다른 Vibrio sp.에 대해서도 항균활성을 나타내었다. 특히 Vibrio vulnificus, Vibrio campbellii, Vibrio mimicus에 대해 높은 저해능을 나타내었다.

• 한국어병학회지
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• 제20권1호
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• pp.71-81
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• 2007

넙치, Paralichthys olivaceus 병어에서 분리된 Photobacterium damselae subsp. damselae와 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii)의 병원성을 in vitro에서 조사하였다. Extracellular products (ECPs)의 성상은 효소 활성, 양과 넙치 적혈구에 대한 용혈능과 cell-line에 대한 세포 독성을 조사하였다. 그리고 세균의 internalization에서 signal transduction pathways를 signal transduction inhibitor를 이용하여 조사하였다.P. damselae는 phospholipase 활성, 넙치 적혈구에 대한 용혈능, 세포독성이 높게 나타났으며, 분리된 vibrios 균주에 비하여 internalization에서 다양한 경로를 나타내었다. 따라서 이러한 활성은 P. damselae의 병원성과 관련이 있을 것으로 생각된다.

• 한국생명과학회:학술대회논문집
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• 한국생명과학회 2003년도 제40회 국제학술심포지움
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• pp.103-103
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• 2003

• 한국양식학회지
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• 제19권4호
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• pp.231-235
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• 2006

본 연구는 항암, 항균, 항산화 활성이 뛰어나다고 보고되고 있는 버섯균사체를 사료첨가제 이용 가능성을 확인하기 위하여 실험을 실시하였다. 일반 시중에서 판매중인 배합사료에 상황버섯 균사체와 운지버섯 균사체를 혼합배양한 배양액 1개와, 상황버섯 균사체와 운지버섯균사체를 각각 단독으로 배양한 배양액 2개로 총 3종류의 배양액을 가지고 배합사료와 혼합하여 12주 동안 넙치에게 급이 하여 성장률, GPT측정 및 V. anguillarum을 이용하여 공격 실험한 결과 대조구에 비해 균사체배양액이 첨가된 실험구에서 좋은 효과를 보였다. 성장률인 경우 대조구에 비해 실험구가 $12{\sim}20%$ 가량 어체중이 증가와 어체의 평균 전장이 길이도 전체적으로 증가하는 양상을 나타내었다. 또한 10주에서는 운지버섯(CV)과 상황버섯(PL) 균사체 혼합 배양액을 첨가한 사료의 실험구가 다른 실험구에 비해 높은 체중을 나타냈다. 넙치의 간수치를 실험한 결과 GPT 측정 Karamen unit 수치가 사육기간이 지날수록 지속적으로 낮아졌으며, 실험구들 또한 대조구와 비교해보았을 때 전체적으로 수치가 낮은 것을 확인할 수가 있었다. 인위적인 세균 공격실험의 경우 전체적으로 실험구가 대조구에 비해 $20{\sim}40%$ 정도의 높은 생존율의 차이를 보였으며, 특히 혼합배양액을 첨가한 실험구의 경우 가장 높은 40%의 생존율을 나타냈다. 그러므로 버섯 균사체 배양액을 일반 사료에 사료첨가제로서의 이용가능성이 매우 크다고 사료된다.