대표적인 스핑고지질인 글리코실세라미드의 생리적 기능을 조사하기 위하여 쌀겨 추출물로부터 cerebroside를 분리하였다. 정제하지 않은 글리코실세라미드를 flash system 칼럼으로 분리한 후 ELSD를 검출기로 사용하여 순상 HPLC로 정제하였다. 클로로포름 : 메탄올 : 증류수(99:11:1, v/v/v)을 용출용매로 사용하여 주요 cerebroside를 얻을 수 있었고, MALDI/TOF-MS, FAB-MS, GC, 600MHz $^1$H-NMR로 구조를 분석하였다. 구성당은 글루코오스였고 cerebroside의 구성 지방산은 2-hydroxy-arachidic산이었다. 장쇄 염기는 sphinga-4,8-dienine이었다.
Chae, Jong Pyo;Pajarillo, Edward Alain;Hwang, In-Chan;Kang, Dae-Kyung
한국축산식품학회지
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제39권1호
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pp.13-22
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2019
This study aimed to develop a bile-responsive expression system for lactobacilli. The promoters of four genes, encoding phosphoenolpyruvate-dependent sugar phosphotransferase (mannose-specific), L-lactate dehydrogenase (LDH), HPr kinase, and D-alanine-D-alanine ligase, respectively, which were highly expressed by bile addition in Lactobacillus johnsonii PF01, were chosen. Each promoter was amplified by polymerase chain reaction and fused upstream of the ${\beta}$-glucuronidase gene as a reporter, respectively. Then, these constructs were cloned into E. coli-Lactobacillus shuttle vector pULP2, which was generated by the fusion of pUC19 with the L. plantarum plasmid pLP27. Finally, the constructed vectors were introduced into L. plantarum for a promoter activity assay. The LDH promoter showed the highest activity and its activity increased 1.8-fold by bile addition. The constructed vector maintained in L. plantarum until 80 generations without selection pressure. A bile-responsive expression vector, $pULP3-P_{LDH}$, for Lactobacillus spp. can be an effective tool for the bile-inducible expression of bioactive proteins in intestine after intake in the form of fermented dairy foods.
The formation of macrophage foam cells stimulated by oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) is deemed an important cause of atherosclerosis. Transcription factor Yin Yang 1 (YY1), which is a universally expressed multifunctional protein, is closely related to cell metabolism disorders such as lipid metabolism, sugar metabolism, and bile acid metabolism. However, whether YY1 is involved in macrophage inflammation and lipid accumulation still remains unknown. After mouse macrophage cell line RAW264.7 cells were induced by ox-LDL, YY1 and proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) expressions were found to be increased while low-density lipoprotein receptor (LDLR) expression was lowly expressed. Subsequently, through reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR), Western blot analysis, Oil Red O staining and cholesterol quantification, it turned out that silencing of YY1 attenuated the inflammatory response and lipid accumulation in RAW264.7 cells caused by ox-LDL. Moreover, results from the JASPAR database, chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay, luciferase reporter assay and Western blot analysis suggested that YY1 activated PCSK9 by binding to PCSK9 promoter and modulated the expression of LDLR in the downstream of PCSK9. In addition, the results of functional experiments demonstrated that the inhibitory effects of YY1 interference on ox-LDL-mediated macrophage inflammation and lipid accumulation were reversed by PCSK9 overexpression. To sum up, YY1 depletion inhibited its activation of PCSK9, thereby reducing cellular inflammatory response, cholesterol homeostasis imbalance, and lipid accumulation caused by ox-LDL.
Objective: The study was conducted to determine the effects of body weight (BW) and fiber sources on nutrient digestibility, fiber fermentation and short chain fatty acids (SCFA) concentration in different intestinal segments of growing pigs fed high-fiber diets. Methods: Nine barrows with initial BW of 25.17±0.73 kg and 9 barrows with initial BW of 63.47±2.18 kg were allotted to a duplicate 9×2 Youden Square design with 3 dietary treatments and 2 periods. The dietary treatments were formulated with 3 different high-fiber ingredients: corn bran, sugar beet pulp, and soybean hulls, respectively. Each diet was fed to 3 barrows with different stage of BW in each period. Results: There were no differences in the apparent ileal digestibility (AID) of most nutrients between pigs at different BW stages. Pigs at 60 kg had greater (p<0.05) apparent total tract digestibility (ATTD) of total dietary fiber (TDF), soluble dietary fiber (SDF) and insoluble dietary fiber (IDF), and had greater (p<0.05) hindgut disappearance of IDF and cellulose than pigs at 25 kg. The acetate, propionate and total SCFA concentrations in ileal digesta and feces of pigs at 60 kg were greater (p<0.05) than those of pigs at 25 kg. In addition, fiber sources affected (p<0.05) the AID of gross energy (GE), organic matter (OM), ether extract (EE), crude protein, SDF and hemicellulose, the hindgut disappearance and ATTD of dietary fiber components, the lactate and propionate concentrations in ileal digesta and the butyrate, valerate and total SCFA concentrations in feces. There were interactions (p<0.05) between BW and fiber sources on the AID of GE, OM, EE, SDF, hemicellulose, the ATTD of EE, TDF, and IDF, and the hindgut disappearance of SDF and hemicellulose. Conclusion: Increasing BW mainly improved the digestibility of dietary fiber fractions, and the dietary fiber sources influenced the digestibility of almost all the dietary nutrients in growing pigs.
The aim of this study was to evaluate the effect of replacing corn grain for sugar cane molasses (MO) or glucose syrup (GS) in the starter concentrate on performance and metabolism of dairy calves. Thirty-six individually housed Holstein male calves were blocked according to weight and date of birth and assigned to one of the starter feed treatments, during an 8 week study: i) starter containing 65% corn with no MO or GS (0MO); ii) starter containing 60% corn and 5% MO (5MO); iii) starter containing 55% corn and 10% MO (10MO); and iv) starter containing 60% corn and 5% GS (5GS). Animals received 4 L of milk replacer daily (20 crude protein, 16 ether extract, 12.5% solids), divided in two meals (0700 and 1700 h). Starter and water were provided ad libitum. Starter intake and fecal score were monitored daily until animals were eight weeks old. Body weight and measurements (withers height, hip width and heart girth) were measured weekly before the morning feeding. From the second week of age, blood samples were collected weekly, 2 h after the morning feeding, for glucose, ${\beta}$-hydroxybutyrate and lactate determination. Ruminal fluid was collected at 4, 6, and 8 weeks of age using an oro-ruminal probe and a suction pump for determination of pH and short-chain fatty acids (SCFA). At the end of the eighth week, animals were harvested to evaluate development of the proximal digestive tract. The composition of the starter did not affect (p>0.05) concentrate intake, weight gain, fecal score, blood parameters, and rumen development. However, treatment 5MO showed higher (p<0.05) total concentration of SCFAs, acetate and propionate than 0MO, and these treatments did not differ from 10MO and 5GS (p>0.05). Thus, it can be concluded that the replacement of corn by 5% or 10% sugar cane molasses or 5% GS on starter concentrate did not impact performance, however it has some positive effects on rumen fermentation which may be beneficial for calves with a developing rumen.
Methylobacterium organophilum을 이용하여 메탄올로부터 유가식 배양법으로 고점도 다당류인 메틸란(methylan)의 생산시, 메틸란 배양액의 점성특성과 산소전달속도와 메틸란 생산 수율과의 관계를 조사하였다. 균체 농도의 증가는 배양액의 점성에 거의 영향을 주지 않았으나 배양시간의 경과에 따른 메틸란의 축적은 배양액의 점성특성을 비뉴톤성으로 변화시키며 동시에 급격한 점도 증가를 보였다. 배양시간의 경과에 따른 같은 농도하에서 메틸란의 점도를 측정한 결과 배양시간이 증가함에 따라, 점도가 현저하게 증가 하였고 pseudoplasticity 정도는 약간 증가하였다. 그 원인을 조사하기 위하여 메틸란 구성 성분의 화학조성을 분석 하였다. 구성성분 중의 유기산(pyruvic acid, uronic acid, acetic acid)의 함량이 메틸란 생성 초기인 34시간에 10%에서 배양말기인 72시간에서는 17%로 증가하였다. 즉, (-)전하를 띠는 산의 함량이 증가함으로 인하여 메틸란 분자네 chain간의 전기적 반발로 인하여 수용액 상태에서 메틸란 분자의 hydrodynamic domain의 증가로 추측되었다. 이와같이 메틸란의 농도 증가에 따른 점도의 증가는 배양도중 산소전달속도($k_La$)의 급격한 감소를 초래하여 균체증식과 메틸란의 생산을 감소시켰다. 그러나 균체의 메틸란 생산능력에는 큰변화가 없어 단위 균체당 메틸란 수율(P/X)은 큰 차이가 없었다. 산소전달속도를 증가시키기 위하여 교반속도를 증가시킨 결과 메틸란의 농도, 비생산 속도 및 생산 수율이 거의 비례적으로 증가됨을 확인하였다.
최근 전통 식품에 대한 관심이 증가함에 따라서 우리 나라 고유의 술인 막걸리 소비가 국내에서뿐만 아니라 해외 수출량도 급증하고 있다. 그러나 막걸리의 유통 및 저장 안정성을 증가시킬 수 있는 방법으로는 미생물 제어 기술로서 냉장 유통과 가온 살균에 제한되어 표준화된 기술이 부족한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 막걸리 유통기간 연장 방법의 하나로 막걸리를 급속동결(Quick Freezing, QF) 및 완만동결(Slow Freezing, SF)을 하였으며 이에 따른 품질 변화를 실험하였다. 즉, 동결 방법에 따라서 40일간 저장하면서 저장기간 10일 간격으로 시료를 취하여 $10^{\circ}C$에서 24시간 해동시킨 후 이화학 분석 및 미생물 실험을 실시하였다. 그 결과 모든 시료군에 대해서 환원당은 저장 10일째 급격히 증가한 후 저장기간에 따라 지속적으로 증가하였으나, 그 증가폭은 크지 않았다. 산도 및 색도 경우 저장기간에 따라 유의적 차이를 나타내지 않았다. 미생물의 경우 젖산균 및 효모 모두 저장기간이 증가할수록 감소하는 경향을 나타내었다. 젖산균의 경우 초기 젖산균이 $4.1{\times}10^7$ CFU/mL에서 저장 20일째 QF는 $3.6{\times}10^6$ CFU/mL, SF는 $1.8{\times}10^4$ CFU/mL로 나타나 QF 경우보다 SF경우 저장 중 젖산균에 대한 변화가 크게 나타났다. 효모의 경우에서도 동일한 변화를 나타내었다 이러한 결과 냉동 방법과 기간에 따라 막걸리 내 미생물의 생육을 제어하는 가능성을 알아볼 수 있었다.
폴리젖산(poly-lactic acid, PLA)은 옥수수 분말이나 sugar beets와 같은 천연 재료로부터 얻어지는 생분해성 및 생체적 합성을 가진 친환경적인 재료로 각광받고 있으며, 특히 적층가공에서 흔히 사용되는 석유로부터 추출된 ABS (acrylonitrile butadiene styrene)의 대체재로 주목받고 있다. 그러나, PLA의 유리 전이 온도는 60 ℃로 비교적 낮아 열 저항성이 떨어질 뿐만 아니라 PLA는 취성이 강해 충격이 가해졌을 때 부러지는 현상이 발생한다는 단점이 있다. 따라서 PLA의 결정화도 및 연성을 증가시켜 단점을 보완하기 위해 젖산에 조핵제 또는 가소제 등을 첨가하는 연구가 활발히 진행되어 왔다. PEG (polyethylene glycol)은 PLA 사슬에 유동성을 주기 위해 가장 많이 연구된 가소제이나, PLA와 혼화되었을 때 자체적인 결정화가 진행되어 상온에서도 혼화물이 불안정해지며 상분리가 일어나게 된다. 따라서 PLA-PEG의 최적의 혼화 비율을 찾는 것이 필수적이다. 이번 연구에서는 가소제인 PEG를 첨가하였을 때 예측되는 두 물질 간의 혼화도를 Materials Studio 프로그램의 Molecular Dynamics를 이용하여 분석하였다. 특히, 젖산과 PEG의 함량 변화에 따른 혼화도와 젖산의 거울상 이성질체인 L-lactic acid 및 D-lactic acid의 함량에 따른 혼화도를 거시적인 관점에서 예측하였다.
본 연구에서는 상지에 배양한 상황버섯 균사체 유래 다당류의 기능성 식품 소재로의 활용 가능성을 확인하기 위해 조다당류의 분리 및 정제를 통해 분획을 얻었으며, 다양한 면역증강 효과를 확인하였다. 건조된 조다당류를 DEAE-sepharose CL-6B를 이용하여 크로마토그래피한 후 340 nm에서의 흡광도, 단백질, 당 및 uronic acid 함량을 분석한 결과, 증류수로 용출되는 비흡착 분획(PF-1, 분획번호 3~15)과 흡착된 후 NaCl 용액에 의해 용출되는 분획(PF-2, 분획번호 24~33)을 얻었다. 분획물 PF-1 및 PF-2의 유용성분 함량으로 총당 함량은 각각 75.51%, 52.38%, 총단백질 함량은 1.63%, 8.41%, uronic acid 함량은 17.53%, 15.04% 및 ${\beta}-glucan$ 함량은 28.33%, 25.04%로 나타났다. PF-1 및 PF-2에 대해 대식세포주에 처리하여 세포생존율을 확인한 결과 $100{\mu}g/mL$ 농도까지 유의적으로 세포사멸이 나타나지 않아 세포독성이 없음을 확인할 수 있었다. Nitric oxide 생성량은 PF-1 $100{\mu}g/mL$에서는 nitric oxide 생성량이 $23.11{\mu}M$로 나타나 양성대조군으로 사용된 LPS 100 ng/mL 처리군($30.30{\mu}M$)의 약 76%의 효과가 있는 것으로 확인되었으며, cytokine 생성량($TNF-{\alpha}$ 및 IL-6) 또한 무처리군에 비하여 높은 생성량을 나타내었다. Polymerase chain reaction을 통한 면역 관련 유전자 발현분석 결과, iNOS, COX-2, $TNF-{\alpha}$, IL-6에서 PF-1 분획에서 높은 발현량을 나타내어 면역 증강을 목적으로 한 기능성 식품 개발에 활용 가능하다고 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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