Although previous studies have demonstrated that BMP9 is highly capable of inducing osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells, the molecular mechanism involved remains to be fully elucidated. In this study, we showed that BMP9 simultaneously promotes the activation of Smad1/5/8, p38 and ERK1/2 in C3H10T1/2 cells. Knockdown of Smad4 with RNA interference reduced nuclear translocation of Smad1/5/8, and disrupted BMP9-induced osteogenic differentiation. BMP9-induced osteogenic differentiation was blocked by p38 inhibitor SB203580, whereas enhanced by ERK1/2 inhibitor PD98059. SB203580 decreased BMP9-activated Smads singling, and yet PD98059 stimulated Smads singling in C3H10T1/2 cells. The effects of inhibitor were reproduced with adenovirus expressing siRNA targeted p38 and ERK1/2, respectively. Taken together, our findings revealed that Smads, p38 and ERK1/2 are involved in BMP9-induced osteogenic differentiation. Also, it is noteworthy that p38 and ERK1/2 may play opposing regulatory roles in mediating BMP9-induced osteogenic differentiation of C3H10T1/2 cells.
Nocardiopsis species produce bioactive compounds, such as antimicrobial and anti-cancer agents and toxins. However, no reports have described their anti-inflammatory and anti-fibrotic effects during nasal polyp (NP) formation. In this study, we investigated whether marine-derived bacterial Nocardiopsis sp. 13G027 exerts anti-inflammatory and anti-fibrotic effects on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 macrophages and transforming growth factor (TGF)-β1-induced NP-derived fibroblasts (NPDFs). Nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) levels were analyzed. Extract from Nocardiopsis sp. 13G027 significantly inhibited the upregulation of NO and PGE2 in LPS-activated RAW 264.7 macrophages. The expression of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and protein kinase B (Akt/PKB) in LPS-induced RAW 264.7 macrophages was evaluated; smooth muscle alpha-actin (α-SMA), collagen type I (Col-1), and fibronectin also phosphorylated small mothers against decapentaplegic (SMAD) 2 and 3 in TGF-β1-stimulated NPDFs. The Nocardiopsis sp. 13G027 extract suppressed the phosphorylation of MAPKs and Akt and the DNA-binding activity of activator protein 1 (AP-1). The expression of pro-fibrotic components such as α-SMA, Col-1, fibronectin, and SMAD2/3 was inhibited in TGF-β1-exposed NPDFs. These findings suggest that Nocardiopsis sp. 13G027 has the potential to treat inflammatory disorders, such as NP formation.
The present study was designed to determine the influence of all-trans retinoic acid (ATRA) on adipogenesis-related gene regulation in bovine intramuscular (IM) and subcutaneous (SC) adipose cells during differentiation. Bovine IM and SC adipocytes were isolated from three 19-mo-old, crossbred steers. Adipogenic differentiation was induced upon cultured IM and SC preadipocytes with various doses (0, 0.001, 0.01, 0.1, 1 µM) of ATRA. After 96 h of incubation, cells were harvested and used to measure the gene expression of CCAAT/Enhancer binding protein β (C/EBPβ), peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) γ, glucose transporter 4 (GLUT4), stearoyl CoA desaturase (SCD), and Smad transcription factor 3 (Smad3) relative to the quantity of ribosomal protein subunit 9 (RPS 9). Retinoic acid receptor (RAR) antagonist also tested to identify the effect of ATRA on PPARγ -RAR related gene expression in IM cells. The addition of ATRA to bovine IM decreased (p < 0.05) expression of PPARγ. The expression of PPARγ was also tended to be downregulated (p < 0.1) in high levels (10 µM) of ATRA treatment in SC cells. The treatment of RAR antagonist increased the expression of PPARγ in IM cells. Expression of C/EBPβ decreased (p < 0.05) in SC, but no change was observed in IM (p > 0.05). Increasing levels of ATRA may block adipogenic differentiation via transcriptional regulation of PPARγ. The efficacy of ATRA treatment in adipose cells may vary depending on the location.
So Yeon Oh;Sung Chun Kim;Ho Bong Hyun;Hyejin Hyeon;Boram Go;Yong-Hwan Jung;Young-Min Ham
Journal of Applied Biological Chemistry
/
v.65
no.4
/
pp.277-286
/
2022
Schizophragma hydrangeoides (S. hydrangeoides) is a vine endogenous to Jeju Island and Ulleungdo, where it grows attached to the foothills and rock surfaces. Previous research has mostly focused on the whitening effect of S. hydrangeoides leaf extract. In this study, we investigated S. hydrangeoides leaf extract further, and detected four phytochemicals in the extract: chlorogenic acid, quercetin-3-O-glucosyl-(1-2)-rhamnoside, quercetin-3-O-xylosyl-(1-2)-rhamnoside, and quercitrin. We pretreated human dermal fibroblast (HDFn) cells with previously established concentrations of the four compounds for 1 h before ultraviolet A (UVA) irradiation. Among the four compounds, quercetin-3-O-glucosyl-(1-2)-rhamnoside (Q-3-GR) best inhibited matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) levels. Thus, we investigated the protective effects of Q-3-GR on photoaging and its underlying mechanisms. Q-3-GR significantly reduced MMP-1 production and inhibited MMP-1 protein expression in UVA-irradiated HDFn cells. Furthermore, Q-3-GR increased procollagen type I production and protein expression. Q-3-GR exerted its anti-photoaging effects by downregulating the mitogen-activated protein kinase/ activator protein-1 signaling pathway, and upregulating the transforming growth factor-β/Smad signaling pathway. Thus, S. hydrangeoides leaf-derived Q-3-GR is a potential potent cosmetic ingredient for UV-induced skin aging.
Jun activation domain-binding protein 1 (Jab1) is involved in various cellular mechanisms including development in Drosophila and mouse, cell cycle control and signal transduction pathways. Recent studies also determined that Jab1 functions as a nuclear exporter and inducer of cytoplasmic degradation for several proteins including p53, p27, capsid of West Nile virus, and Smad4/7 proteins. In particular, p53 is shown to bind to and to be exported into the cytoplasm by Jab1, which helps to maintain low levels of p53 under normal conditions. This review was undertaken in an effort to understand the biological significance of the homeostasis of p53 as maintained in the presence of Jab1. Based on our observations, we have provided potential mechanistic hypotheses for the nuclear export of p53 in coordination with Jab1 and the role of other factors in these processes.
Yoo, Han-Seok;Chung, Kang-Hyun;Lee, Kwon-Jai;Kim, Dong-Hee;An, Jeung Hee
Nutrition Research and Practice
/
v.11
no.3
/
pp.190-197
/
2017
BACKGROUND/OBJECTIVES: Gallus gallus domesticus (GD) is a natural mutant breed of chicken in Korea with an atypical characterization of melanin in its tissue. This study investigated the effects of melanin extracts of GD on osteoblast differentiation and inhibition of osteoclast formation. MATERIALS/METHODS: The effects of the melanin extract of GD on human osteoblast MG-63 cell differentiation were examined by evaluating cell viability, osteoblast differentiation, and expression of osteoblast-specific transcription factors such as bone morphogenetic protein 2 (BMP-2), small mothers against decapentaplegic homologs 5 (SMAD5), runt-related transcription factor 2 (RUNX2), osteocalcin and type 1 collagen (COL-1) by reverse transcription-polymerase chain reaction and western blotting analysis. We investigated the inhibitory effect of melanin on the osteoclasts formation through tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) activity and TRAP stains in Raw 264.7 cell. RESULTS: The melanin extract of GD was not cytotoxic to MG-63 cells at concentrations of $50-250{\mu}g/mL$. Alkaline phosphatase (ALP) activity and bone mineralization of melanin extract-treated cells increased in a dose-dependent manner from 50 to $250{\mu}g/mL$ and were 149% and 129% at $250{\mu}g/mL$ concentration, respectively (P < 0.05). The levels of BMP-2, osteocalcin, and COL-1 gene expression were significantly upregulated by 1.72-, 4.44-, and 2.12-fold in melanin-treated cells than in the control cells (P < 0.05). The levels of RUNX2 and SMAD5 proteins were higher in melanin-treated cells than in control vehicle-treated cells. The melanin extract attenuated the formation of receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand-induced TRAP-positive multinucleated RAW 264.7 cells by 22%, and was 77% cytotoxic to RAW 264.7 macrophages at a concentration of $500{\mu}g/mL$. CONCLUSIONS: This study provides evidence that the melanin extract promoted osteoblast differentiation by activating BMP/SMADs/RUNX2 signaling and regulating transcription of osteogenic genes such as ALP, type I collagen, and osteocalcin. These results suggest that the effective osteoblastic differentiation induced by melanin extract from GD makes it potentially useful in maintaining bone health.
Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive and devastating disease whose pathogenesis is associated with a phenotypic switch of pulmonary arterial vascular smooth muscle cells (PASMCs). Bone morphogenetic protein (BMP) signaling and potassium two pore domain channel subfamily K member 3 (KCNK3) play crucial roles in PAH pathogenesis. However, the relationship between BMP signaling and KCNK3 expression in the PASMC phenotypic switching process has not been studied. In this study, we explored the effect of BMPs on KCNK3 expression and the role of KCNK3 in the BMP-mediated PASMC phenotypic switch. Expression levels of BMP receptor 2 (BMPR2) and KCNK3 were downregulated in PASMCs of rats with PAH compared to those in normal controls, implying a possible association between BMP/BMPR2 signaling and KCNK3 expression in the pulmonary vasculature. Treatment with BMP2, BMP4, and BMP7 significantly increased KCNK3 expression in primary human PASMCs (HPASMCs). BMPR2 knockdown and treatment with Smad1/5 signaling inhibitor substantially abrogated the BMP-induced increase in KCNK3 expression, suggesting that KCNK3 expression in HPASMCs is regulated by the canonical BMP-BMPR2-Smad1/5 signaling pathway. Furthermore, KCNK3 knockdown and treatment with a KCNK3 channel blocker completely blocked BMP-mediated anti-proliferation and expression of contractile marker genes in HPAMSCs, suggesting that the expression and functional activity of KCNK3 are required for BMP-mediated acquisition of the quiescent PASMC phenotype. Overall, our findings show a crosstalk between BMP signaling and KCNK3 in regulating the PASMC phenotype, wherein BMPs upregulate KCNK3 expression and KCNK3 then mediates BMP-induced phenotypic switching of PASMCs. Our results indicate that the dysfunction and/or downregulation of BMPR2 and KCNK3 observed in PAH work together to induce aberrant changes in the PASMC phenotype, providing insights into the complex molecular pathogenesis of PAH.
Objectives : Effects of Bogijetong-tang (BJT) on peripheral nerve regeneration have been reported in a previous study on BJT but additional study on a damaged peripheral neuropathy where its damage level is physically and chemically more severe was needed. Plus, this study was conducted because there haven't been any studies for BJT on central nerve regeneration. Methods : In order to check the effect on central nerve regeneration, the study on cerebellum cells was started and the sciatic nerve was used to observe the effects on a peripheral nerve which was severely damaged both physically and chemically. Nerve recovery effects were observed by analyzing target proteins such as phospho-extracellular signal-regulated kinase, ${\beta}1$ integrin, neurofilament 200, growth-associated protein-43, cyclin-dependent kinase 1, phospho-vimentin, phospho-Smad, and caspase 3. Results : The significant changes of target protein in cerebellum neurons have been observed. The changes of index protein on the axon regeneration and the nerve recovery in the sciatic nerve have been observed and the effects on cell protection were observed, as well. Conclusions : This study confirmed that BJT made a significant influence on nerve protection and recovery of a damaged peripheral neuropathy and it also made a possibility of its regeneration in a damaged central nerve injury.
The brain is the most common metastatic site of lung adenocarcinoma; however, the mechanism of this selective metastasis remains unclear. We aimed to verify the hypothesis that exposure of tumor cells to the brain microenvironment leads to changes in their gene expression, which promotes their oriented transfer to the brain. A549 and H1299 lung adenocarcinoma cells were exposed to human astrocyte-conditioned medium to simulate the brain microenvironment. Microarray analysis was used to identify differentially expressed genes, which were confirmed by quantitative real-time PCR and western blotting. Knockdown experiments using microRNAs and the overexpression of genes by cell transfection were performed in addition to migration and invasion assays. In vitro findings were confirmed in clinical specimens using immunohistochemistry. We found and confirmed a significant increase in insulin-like growth factor binding protein-3 (IGFBP3) levels. Our results also showed that the up-regulation of IGFBP3 promoted A549 cell epithelial-mesenchymal transition, migration, and invasion, while the knockdown of IGFBP3 resulted in decreased cell motility. We also found that Transforming growth factor-${\beta}$ (TGF-${\beta}$)/Mothers against decapentaplegic homolog 4 (Smad4)-induced epithelial-mesenchymal transition was likely IGFBP3-dependent in A549 cells. Finally, expression of IGFBP3 was significantly elevated in pulmonary cancer tissues and intracranial metastatic tissues. Our data indicate that up-regulation of IGFBP3 might mediate brain metastasis in lung adenocarcinoma, which makes it a potential therapeutic target.
Purpose: The balance between synthesis and degradation of proteins plays a critical role in the maintenance of skeletal muscle mass. Mitochondrial dysfunction has been closely associated with skeletal muscle atrophy caused by aging, cancer, and chemotherapy. Polygalacin D is a saponin derivative isolated from Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC. This study aimed to investigate the effects of polygalacin D on myoblast differentiation and muscle atrophy in association with mitochondrial function in in vitro and in zebrafish models in vivo. Methods: C2C12 myoblasts were cultured in differentiation media containing different concentrations of polygalacin D, followed by the immunostaining of the myotubes with myosin heavy chain (MHC). The mRNA expression of markers related to myogenesis, muscle atrophy, and mitochondrial function was determined by real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. Wild type AB* zebrafish (Danio rerio) embryos were treated with 5-fluorouracil, leucovorin, and irinotecan (FOLFIRI) with or without polygalacin D, and immunostained to detect slow and fast types of muscle fibers. The Tg(Xla.Eef1a1:mitoEGFP) zebrafish expressing mitochondria-targeted green fluorescent protein was used to monitor mitochondrial morphology. Results: The exposure of C2C12 myotubes to 0.1 ng/mL of polygalacin D increased the formation of MHC-positive multinucleated myotubes (≥ 8 nuclei) compared with the control. Polygalacin D significantly increased the expression of MHC isoforms (Myh1, Myh2, Myh4, and Myh7) involved in myoblast differentiation while it decreased the expression of atrophic markers including muscle RING-finger protein-1 (MuRF1), mothers against decapentaplegic homolog (Smad)2, and Smad3. In addition, polygalacin D promoted peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator (Pgc1α) expression and reduced the level of mitochondrial fission regulators such as dynamin-1-like protein (Drp1) and mitochondrial fission 1 (Fis1). In a zebrafish model of FOLFIRI-induced muscle atrophy, polygalacin D improved not only mitochondrial dysfunction but also slow and fast muscle fiber atrophy. Conclusion: These results demonstrated that polygalacin D promotes myogenesis and alleviates chemotherapy-induced muscle atrophy by improving mitochondrial function. Thus, polygalacin D could be useful as nutrition support to prevent and ameliorate muscle wasting and weakness.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.