The objective of this study was to investigate the effect of bacterial contamination on elapsed time after preservation on boar semen. Known numbers of Escherichia coli (E. coli) were inoculated to freshly ejaculated semen and sperm parameters such as viability, motility, agglutination, acrosome integrity and hypo-osmotic swelling test were performed during 7 days of liquid preservation. Semen samples were prepared using antibiotic free BTS extender and 4 different levels of E. coli were treated to semen with following concentrations; 3,000, 5,000, 7,000, 10,000 CFU/ml of sperms. Semen samples were preserved at $17^{\circ}C$ for 7 days in semen storage until analyzed. Aliquots were subjected to measure the sperm viability, motility and agglutination using computer assisted sperm analysis (CASA) system, acrosome integrity was performed using chlortetracycline (CTC) staining method and hypo-osmotic swelling test was performed using hypotonic solution from day 1 (day of semen collection) to 7. Detrimental effects on sperm motility and viability were observed 3 days after preservation at the level of 5,000 CFU/ml (p<0.05). Percentage of sperm abnormality was higher (p<0.05) in over 5,000 CFU/ml groups. Sperm agglutination rate was also significantly higher (p<0.05) in groups of 5,000 and 7,000 CFU/ml. The rate of acrosome reacted sperm was higher as preservation time goes in all the samples but the pattern was clearly higher among E. coli contaminated groups (p<0.05). The sperm membrane integrity in terms of hypo-osmotic test, E. coli affects little compared to other sperm parameters. The deleterious effects observed due to the bacterial contamination in semen suggest that importance of hygiene protocol to minimize the bacterial contamination during semen collection and processing.
Rancidity changes were examined for 6 herbal medicines, namely Persicae Semen, Armeniacae Semen, Lini Semen, Trichosanthis Semen, Arecae Semen, Myristicae Semen known to have relatively high fat content. In order to reduce rancidity of herbal medicines, samples were stored at 3 different conditions of room, refrigerating and freezing temperatures, and the rancidity was measured for 10 months with every 2 month interval. Fat content was extracted by using ethyl ether, and acid values and peroxide values, which are generally accepted indicators of fat rancidity, were measured. When storing Persicae Semen, Lini Semen and Arecae Semen at room temperature, the acid values increased as the storage period increased, and it was higher than when stored in refrigeration or freezing. The measurement of peroxide value showed more significantly higher initial degree of rancidity when Persicae Semen, Trichosanthis Semen, Arecae Semen and Myristicae Semen were stored at room temperature. It was observed that storing herbal medicines in refrigeration or freezing inhibited their rancidity compared to storing them at room temperature. To investigate the quality changes according to rancidity, the analysis of aflatoxins and indicator components showed that aflatoxins B1 and B2 were detected in Armeniacae Semen, Arecae Semen and Myristicae Semen, and the amount of amygdalin was well maintained within the specification standard.
The purpose of this investigation was to confirm the effect of Nelumbinis Semen on the recovery of the cardiac muscle activity. We studied the effect of Nelumbinis Semen on the recovery of ischemic SD rat hearts perfused with Nelumbinis Semen, using a model of ex-vivo perfusion (Non-working Langendorff perfusion system) and working heart perfusion system at the same time. To explore the effect of Nelumbinis Semen at the level of proteome, two-dimensional electrophoresis and MALDI-TOF analysis were performed. We found out that the proteins increased after perfusion of Nelumbinis Semen are Mitochondrial aconitase, ATP synthase alpha chain, Lactate dehydrogenase B, Creatine kinase, Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, Alpha B-crystallin, Myosin and Heart fatty acid binding protein. Almost, all of them are concerned with ATP production in the cardiac muscle with glucose metabolism.
Many studies have been conducted to improve technology for semen cryopreservation in pigs. However, computer-assisted analysis of sperm motility and morphology is insufficient to predict the molecular function of frozen-thawed semen. More accurate expression patterns of boar sperm proteins may be derived using the isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ) technique. In this study, the iTRAQ-labeling system was coupled with liquid chromatography tandem-mass spectrometry (LC-MS/MS) analysis to identify differentially expressed CM10-fractionated proteins between fresh and frozen-thawed boar semen. A total of 76 protein types were identified to be differentially expressed, among which 9 and 67 proteins showed higher and lower expression in frozen-thawed than in fresh sperm samples, respectively. The classified functions of these proteins included oxidative phosphorylation, mitochondrial inner membrane and matrix, and pyruvate metabolic processes, which are involved in adenosine triphosphate (ATP) synthesis; and sperm flagellum and motile cilium, which are involved in sperm tail structure. These results suggest a possible network of biomarkers associated with survival after the cryopreservation of Duroc boar semen.
Epididymal biopsy has been performed without consideration of the possibility of epididymal ductal severance and obstruction which result in obstructive azoospermia. An attempt was made to study the effect of the epididymal biopsy on the obstruction of the epididymal ducts. Bilateral epididymal biopsies were done in 8 healthy rabbits (New Zealand White strain) weighing over 3 kg, and then ejaculated semens have been analyzed 5 times every other week from 1 month after biopsies. Microscopic examination of the biopsied epididymides was also done after the 5th semen analysis. The results were as follows. 1. Semen analysis: 6 out of 8 rabbits showed azoospermia from the 4th semen analysis and 2 cases showed normal number of the sperms in the 5th semen analysis. 2, Microscopic examination: 6 cases of azoospermia showed complete obstruction of the biopsied sites of the epididymides, and abscence of sperms in epididymal ducts distal to the biopsied sites of the epididymides. However, recanalization of the epididymal ducts was noted in 2 cases showing normal sperm count. Therefore, it is concluded that the epididymal biopsy should be avoided in patients who want to be fertile, because it may cause the epididymal severance and obstruction of the epididymal ducts.
The objective of this study was to determine the effect of semen extenders on the motility, viability and fertility in vitro of spermatozoa during storage of fresh boar semen diluted in different commercial extenders used for pig artificial insemination (AI). In this experiment, semen were diluted in Androhep plus, Beltsville Thawing Solution (BTS), Modena, Seminark and Vitasem LD. Five ejaculates were collected from three Duroc boars and sub-samples were diluted ($30{\times}10^6$ spermatozoa/ml) in different extenders. Semen was stored at $170^{\circ}C$ for 10 days. Sperm motility and viability was assessed using Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) and flow-cytometry on 1, 3, 5 and 10 day post collection The motility of spermatozoa stored in different extenders was gradually decreased by increasing the duration of storage of semen. However, there was not significant1y different in the sperm motility and viability among other extenders. On the other hand, the in vitro-matured oocytes were fertilized and cultured in vitro to assess the fertility of boar spermatozoa stored for 3 and 10 days in different extenders. The percentage of morula and blastocyst were taken as indicators of fertility in vitro of spermatozoa. Therefore, there were no differences in the rate of embryos developed to the molular and blastocyst stage. There were no differences in the motility and fertility in vitro among 5 kinds of commercial boar semen extenders.
Objectives : Lepidii seu Descurainiae Semen has been frequently adulterated with the seeds of several inauthentic plant species. However, the accurate identification of these plant seeds is very difficult. To develop a reliable genetic authentication tool for Lepidii seu Descurainiae Semen, we analyzed matK sequence. Methods : To obtain the matK sequences of plant materials, genomic DNA was extracted from 24 samples and PCR amplification was carried out using matK-AF/matK-8R universal primer set and matK-LDSF/matK-LDSR primer set. For identifying species-specific nucleotides and phylogenetic analysis, matK regions were sequenced and comparatively analyzed by the ClustalW and Maximum Likelihood method. Results : We developed a new primer set to amplify matK region in Lepidii seu Descurainiae Semen and closely related plant samples. From the comparative analysis of matK sequences, we identified species-specific marker nucleotides for D. sophia, L. apetalum, L. latifolium, E. cheiranthoides, E. macilentum, and D. nemorosa, respectively. Furthermore, phylogenetic analysis revealed clear classification depending on the species. These results indicated that the matK sequence obtained a new primer set in this study was useful to identify Lepidii seu Descurainiae Semen in species level. Conclusions : We developed a primer set and identified species-specific marker nucleotides enough to distinguish authentic Lepidii seu Descurainiae Semen and adulterants at the species level based on the matK sequences. These genetic tool will be useful to prevent adulteration and to standardize the quality of Lepidii seu Descurainiae Semen.
The protective effect of Carthamus tinctorius L. Semen on the carbon tetrachloride induced liver damaged rats were studied. First, methanol extract was prepared and the extract was fractionated with hexane, $CHCl_3$, BuOH and $H_2O$ respectively. Animals were divided into 6 groups and each group was treated with each fraction respectively. To investigate the hepato-protective effect of Carthamus tinctorius L. Semen AST, ALT, albumin, TP, cholesterol, TG, creatinine and total bilirubin values were measured in each treated group and compared with those of control group. GST activity was increased in BuOH group compared with the control group. In malondialdehyde levels, all fractions was decreased compared with the control group. In histopathologic examination, hexane and $H_2O$ fractions of Carthamus tinctorius L. Semen observed mild degree of ballooning degeneration. The results show the protective effect of Hexane,$CHCl_3$, BuOH and $H_2O$ fractions on hepatotoxicity of $CHl_4$ by decreasing ALT, AST, bilirubin, cholesterol, TG and BUN. It seems that the decrease of MDA are related to the recovery effect. The protective effects of Carthamus tinctorius L. Semen fractions in hepatotoxic pathogenesis by $CHl_4$ was suggested in blood chemistry analysis and histopathologic examination.
Objective: Seasonal variations in semen quality are known to occur in temperate regions, but results regarding tropical areas remain inconclusive. The aim of this study was to determine whether monthly variations in semen parameters are present among men in a tropical region. Methods: Data were retrospectively collected from semen analyses of 3,000 men over a 10-year period, from 2012 to 2022. Analysis of variance and the independent-samples t-test were employed to observe variations in semen parameters throughout the entire period and between months, respectively. Results: The mean±standard deviation sperm concentration was significantly lower in June, at 42.5±31.4 million/mL, compared to other months. The highest sperm concentration was found in March, at 57.8±42.6 million/mL, constituting a mean difference of 15.3 million/mL between the lowest and highest concentrations. The total sperm count displayed a similar pattern of monthly variation, with a difference of 47.2 million between the highest and lowest months. No significant monthly differences were observed in other parameters, such as sperm motility, morphology, and semen volume. Conclusion: Significant monthly variations in sperm concentration and total sperm count were evident in this Sri Lankan population. March, which displayed the highest sperm counts, is in the spring in temperate regions, while the month with the lowest counts, July, is part of the summer. Fluctuations in photoperiod appear to most strongly influence these variations.
본 연구에서는 닭 정액의 운동성 분석에 미치는 요인을 분석하기 위하여 희석배율에 따른 생존성을 조사하고, 신선정액의 희석 시에 필요한 조건을 확보하기 위하여 희석제에 단백질원으로서 BSA와 FAF-BSA의 첨가가 닭정자의 생존성에 미치는 영향을 관찰하였다. 최종 희석율이 1/4이 되도록 닭 정액을 희석하여 생존성을 조사하면 신선정액에서 희석율이 1/8, 1/16 및 1/32로 낮아질수록 89.9%, 69.9% 및 53.2%로 생존율이 낮아지는 것을 관찰하였으며, 단백질원으로 BSA나 FAF-BSA를 이용하면 생존율을 유의적으로 증진시킬 수 있음을 증명하였다. 또한 이러한 현상은 동결정액의 희석에도 중요한 요인으로 관찰되었는데, FAF-BSA를 이용하여 희석할 때 단백질이 없는 경우보다 양호한 생존율이 나타난다는 것을 관찰하였다(17.6% 대 34.0%). 그러나 단백질원을 활용하더라도 닭정액의 희석율이 낮아질수록 생존율이 저하하는 현상은 지속적으로 나타나고 있으며, 신선정액에 비하여 동결정액은 장수성이 낮은 것으로 추정되었다. 그러므로 본 연구에서 사용된 정자의 분석방법은 닭 정액동결을 실시하여 운동성을 분석할 때 필요한 기본 정보를 제공할 수 있을 것으로 판단되며, 닭 희석배율을 낮추어 동결정액의 효율성을 높이는 연구에 기여할 것으로 추정된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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