본 연구는 돼지 정자 동결시 taurine과 $\alpha$-tocopherol의 첨가가 융해후 정자 성상과 정자 기능 활성산소계(reactive oxygen species; ROS)의 발생 정도 및 지질 산화(lipid peroxidation, LPO)에 미치는 영향을 구명하기 위하여 시행하였다. 1차 및 2차 희석액내 taurine과 $\alpha$-tocopherol이 첨가된 돼지 동결정액의 융해 후 정자 운동성 양상, 정자 생존성, 정자 기법을 적용하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Taurine(25mM, 50mM), $\alpha$-tocopherol($500{\mu}M,\;1,000{\mu}M$ 단일처리군 그리고 taurine과 $\alpha$-tocopherol의 혼합처리군($25mM\~500{\mu}M\~1,000{\mu}M$)은 동결$\cdot$융해 후 대조군과 비해 정자 운동성과 생존성은 유의적인 차이를 나타내지 않았다. Taurine과 $\alpha$-tocopherol의 혼합처리군 $50mM\~1,000{\mu}M$에서 HOST, 점체 반응이 대조군과 비교하여 유의차는 인정되지 않았으나 다소 증가하였다. 동결$\cdot$융해 정자의 ROS 발생 억제를 위한 taurine과 $\alpha$-tocopherol의 모든 처리군은 대조군과 비교하여$\cdot\{O_2}{^-}$ 발생을 유의적으로 완화시키지 못하였다. 그러나 taurine 단일처리군(25mM), $\alpha$-tocopherol 단일처리군($50mM,\;1,000{\mu}M$)과 혼합처리군($25mM\~500mM,\;50mM\~1,000{\mu}M$은 $H_{2}O_{2}$의 발생을 대조군과 비교하여 유의적으로 완화시켰다(P<0.05). 동결$\cdot$융해 정자의 malondialdehyde의 생산은 taurine과 $\alpha$-tocopherol의 모든 처리군에서 대조군과 비교하여 유의적인 감소를 보였다(P<0.05). 이상의 결과를 종합해 보면 돼지 정액의 동결보존시 taurine와 $\alpha$-tocopherol 같은 항산화제의 처리는 ROS 발생과 LPO을 효과적으로 완화시킴에 따라 돼지 정액의 동결보존 효율을 증진시킬 수 있는 유용한 방법이라 사료된다.
의이인과 염주는 동속 근연종으로 외부형태가 유사하고 종피를 깎아 유통하기 때문에 육안으로 식별하기에는 한계가 있다. 특히, 염주는 일부 수입품에서 의이인과 비슷한 크기로 염주 종피를 깎아 유통시키고 있어 진 위 판별에 논란이 되고 있다. 본 연구에서는 의이인의 유통품을 외부 형태적 특징으로만 식별하기 어려운 문제를 해결하고자 내부형태 특성조사와 정색반응, RAPD등을 이용하여 감별을 위한 기초자료로 이용하고자 한다. 1. 의이인의 과피는 석세포로 구성된 층과 대보강세포와 섬유상 보강세포로 이루어진 2층 구조로 구분되는 반면, 염주의 과피는 외과피와 내과피는 석세포로 이루어져 있고 중앙의 중과피는 대보강세포와 섬유상 보강세포로 구성되어 뚜렷한 3층의 구조로 이루어진다. 2. TLC를 이용한 확인시험에서 Hexane : EtoAc = 10 : 1의 조건으로 전개하였을때 중국산 염주에서는 Rf가 0.2에서만 밴드가 형성되었다. 3. 중국의 "상용중약감정대전(常用中藥鑑定大典)"에서 제시된 요오드반응법에 의한 의이인과 염주의 정색반응은 구별이 어려웠다. 4. RAPD 분석에서 8개 primer에서 품종간 다형성 밴드가 관찰되었고, UBC primer 355와 362에서 중국 염주와 의성 염주의 특이 밴드(500bp, 1300bp)가 관찰되었다.
Objective: To determine whether characteristics of sperm motility obtained by computer-assisted sperm analysis (CASA) could predict pregnancy after intrauterine insemination (IUI) in couples with unexplained infertility. Methods: Three hundred eighty-three cycles of intrauterine insemination with superovulation were retrospectively analyzed. Semen analysis was performed with CASA before and after swim-up and the parameters were compared between pregnant and non-pregnant women. Results: The pregnancy rate per cycle was 14.1%. Pregnant and non-pregnant women were comparable in terms of age, infertility duration, the number of dominant follicles. While sperm concentration, motility, and parameters such as average path velocity (VAP) and percentage rapid (RAPID) before semen preparation were significantly different between the pregnancy and non-pregnancy groups, there were no differences in sperm parameters when comparing the two groups after preparation. Using a receiver operating characteristic curve to measure sensitivity and specificity, the optimal threshold value for the predictors of pregnancy was revealed to be a concentration of ${\geq}111{\times}10^6/mL$, a motility of ${\geq}$ 51.4%, and RAPID ${\geq}$ 30.1% before preparation for IUI. Conclusion: Sperm parameters including concentration, motility, and RAPID before sperm preparation could have predictive value for pregnancy outcome after intrauterine insemination with superovulation in couples with unexplained infertility, and would be helpful when counseling patients before they make the decision to proceed with IVF/ICSI-ET.
본 연구는 체세포를 이용하여 생산된 복제 한우 수소의 번식능력을 검토하기 위해 실시하였다. 복제 한우 수소(C-38 및 C-39) 또는 일반 한우 종모우로부터 정액을 채취하여 정자의 수 및 동결 전 후의 생존성 등을 살펴보았으며, 정자의 운동성 등은 computer assisted sperm analysis(CASA)를 이용하여 측정하였다. 또한, 이들의 수정 능력을 확인하기 위하여 체외수정과 인공수정을 각각 실시하였다. 정액 성상에서는 복제 수소들과 일반 종모우 간에 정액의 양, 정자의 농도 및 동결융해 후의 생존성 등에서 차이가 나타나지 않았다. CASA를 이용한 분석에서 운동성, 곡선 운동 속도(VCL), 직선운동 속도(VSL) 및 평균 진행 속도(VAP) 등은 복제 수소의 정액이 일반 종모우의 정액에 비하여 유의적으로 높았다 (p<0.05).체외수정에 따른 수정란의 분화율 및 배반포로의 발달율은 복제 수소와 일반종모우 간에 차이가 나타나지 않았다. 복제소 정액(C-38)을 이용하여 인공수정을 한 5두의 체세포 복제 대리모에서 암 수 각각 한 두씩의 건강한 복제 후대 송아지 2두를 생산하였다. 이상의 결과를 종합하여 보면, 실험에 공시된 복제 수소 개체간의 차이가 나타나기는 하였지만, 복제 수소는 정액 성상과 정자의 운동성 등에서 일반 종모우와 차이가 없었으며, 또한 인공수정을 통해 송아지를 생산함으로써 정상적인 번식능력이 있음을 확인하였다.
Clomiphene citrate. antiestrogen, was given to 39 infertile males whose spermatogenesis were disturbed and the efficacy of the drug was evaluated at the Department of Urology in 1980. (Table 1). Patients were divided into 3 clinical observation groups such as group I composed of 19 cases of idiopathic azoospermia, group II consisted of 15 cases of oligospermia following the vasovasostomy, and group III comprised 5 cases of testicular azoospermia. (Table 2). Clinical characteristics of these patients were as follows: Age of the patients ranged from 26 to 43 years old with mean of 34, and that of their wives ranged from 24 to 41 years old with mean of 31. Duration of marital life ranged from 1 to 21 years with mean of 5 years. Sizes of testis ranged from 6 to 25 ml with mean of 16 ml. Coital frequency ranged from 0.5 to 6 per week with mean of 2.4 per week. Levels of plasma FSH ranged from 3.15 to 23.06 lU/1 with mean of 8.15 lU/1, those of LH ranged from 2.98 to 19.89 lU/1 with mean of 8.18 lU/1 and those of testosterone ranged from 3.09 to 9.97 ng/ml with mean of 6.48 ng/ml. (Table 3). Clomiphene citrate was given in dosage of 50 mg per day (in d.) orally to 31 patients for 3 to 9 months and in dosage of 100 mg per day (b.i.d.) orally to 8 patients for 3 to 9 months. (Table 8). Semen samples were analysed monthly on each patient by routine analysis techniques. For the assessment of the efficacy of Clomiphene citrate on faulty spermatogenesis following empirical criteria were used: For semen quality: Improvement (I) represents that semen parameter increased more than 25% from basal level after the treatment, Unchange (U) expresses that semen parameter increased less than 25% of basal level or not changed after the treatment and Deterioration (D) means that semen parameter decreased from basal level after the treatment. For fertility unit (total counts ${\times}$ motility ${\times}$ morphology ${\div}10^6$): Improvement (I) represents that fertility unit increased more than 10 units after the treatment, Unchange (U) expresses that fertility unit increased less than 10 units or not changed after the treatment, and Deterioration (D) means that fertility unit decreased after the treatment. (Table 4). Results obtained from the Clomiphene therapy were as follows: Changes of spermiograme before and after the Oomiphene therapy shown in the Table 5. Sperm counts increased from 23 to 31 ${\times}10^6$/ml in group I, from 17 to 29 ${\times}10^6$/ml in group II. Other parameters of spermiogramme were not changed significantly after the treatment. Fertility units increased from 14 to 18 units after the treatment in group I, and from 16 to 18 units after the treatment in group II. Effectiveness of Clomiphene citrate on spermatogenesis was summarised in the Tables 6 and 7. After the treatment, sperm count increased in 11 patients, motility increased in 6 patients, morphology increased in 4 patients and fertility units increased in 9 patients. No sperm could be produced by Clomiphene citrate in group III of testicular azoospermia. Dosage of 50 mg of Clomiphene citrate per day for 3 to 6 months was proved to be the most effective in the present series. (Table 8). Pregnancy occurred in 2 patients after the treatment. No particular side effects were noted by the treatment. Pharmacologic compounds used for male infertility were shown in the Table 9. Reported results of Clomiphene citrate were shown in the Table 10.
대구근교 외식업체 25곳의 고객에게 제공되고 있는 음용수의 위생실태를 조사한 결과 약 60%가 총균수의 허용한도는 100 CFU/mL를 초과하였으며, 외식업체를 경영하는 CEO 50명을 대상으로 음용수에 관한 설문조사를 한 결과 음용수에 대한 위생의식은 매우 부족하였다. 보리차, 결명차, 옥수수, 메밀, 둥굴레, 캐모마일, 현미녹차, 페파민트를 사용하여 제조한 음용수의 색, 맛, 향, 종합적기호도는 생수에 비해 전반적으로 기호성이 증가하였으며, 종합적 기호도는 둥굴레차가 가장 좋았으며, 옥수수차, 결명자 차, 보리차 순으로 양호하였다. 시판 현미녹차, 둥굴레차, 보리차, 결명차, 옥수수차를 이용하여 음용수를 제조하여 플라스틱 물병에 분주하여 $10^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에 저장하면서 총균수의 변화를 검토한 결과 $10^{\circ}C$에서 대조구는 저장 4일 이후 $10^2 CFU/mL$이상을 나타내어 음용수로서 부적절하였으며, 현미녹차, 둥굴레차, 결명차, 옥수수차는 저장기간 동안 미생물의 증가 현상이 거의 나타나지 않았다. $25^{\circ}C$에 저장한 경우 대조구는 저장 2일 이후 $10^2 CFU/mL$이상을 나타내었으며. 옥수수차, 둥굴레차, 보리차, 결명차에서 오히려 미생물의 성장이 촉진되는 현상을 나타내었으나, 현미녹차의 경우 전 저장기간 동안 생균수의 증가현상은 나타나지 않았다.
The purpose of this study was undertaken to evaluate of cryopreservation efficiency in ${\alpha}$ 1,3-galactosyltransferase knock-out(GalT KO) cloned miniature pig sperm. To compare ability of frozen-thawed sperm characteristics, three different pig strains (GalT KO) cloned miniature pig, PWG miniature pig and Duroc were used. The ejaculated semen from the three pig species was diluted with same volume extender and added to LEY solution for freezing. The diluted semen was placed in 0.5 ml straws, and freezing was initiated by exposing the straws to liquid nitrogen ($LN_2$) vapours for 10 min before placing them into $LN_2$ for cryopreservation. After thawing, the sperm ability were assessed for viability (SYBR-14/PI staining), abnormality (Rose Bengal staining), and acrosome status (intactness, intensity and capacitation) (chlorotetracycline, CTC staining). The viability of frozen-thawed GalT KO pig sperm had no significant difference as compared with Duroc and PWG miniature pig sperm. However, The CTC pattern of frozen-thawed GalT KO cloned miniature pig spermatozoa showed significantly lower rates in F pattern and AR pattern (p<0.05) and significantly higher rates in B pattern than Duroc and PWG miniature pig (p<0.05). The abnormality of GalT KO cloned miniature pig sperm was significantly lower as compared to Duroc and PWG miniature pig sperm (p<0.05). In conclusion, GalT KO cloned miniature pig semen can be cryopreserved successfully and used for artificial insemination reasonably.
웅성 생쥐에 자기장을 15일 동안 1일 5시간씩 60G의 강도로 노출시킨 결과, 정자농도는 대조구와 자기장 15일 처리구가 각각 25.1$\pm$6.5$\times$$10^{6}$$m\ell$와 15.7$\pm$5.3$\times$$10^{6}$$m\ell$로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다(P<0.05). 생존율은 대조구와 자기장 15일 처리구가 각각 34.4%와 29.3%로서 처리구가 대조구에 비하여 낮게 나타났지만 유의적인 차이는 인정되지 않았다(P〉0.05). 기형율은 대조구와 자기장 15일 처리구가 각각 11.7%와 18.0%로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 높은 성적을 나타냈다(P〉0.05). 체중과 번식기관 무게는 대조구와 자기장 처리구간에 차이가 인정되지 않았다. 장기무게중 간, 신장은 대조구와 자기장 처리구간에 차이가 인정되지 않았으나, 비장은 대조구와 자기장 15일 처 리구가 각각 0.116g과 0.227g으로서 처리구가 대조구에 비하여 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05).
본 연구는 0.5ml straw를 이용한 정자 동결융해 시 응해 온도가 동결정자의 성상에 미치는 영향을 파악하고 미니 돼지의 동결정액에 최적화된 적정 응해 조건을 찾기 위하여 실시하였다. 정액동결 straw를 37, 50 및 $70^{\circ}C$에서 각각 5초, 10초 및 45초간 융해하여 생존율(SYBR-14/PI staining), 정자원형질막기능검사 (Hypoosmotic Swelling Test) 및 첨체반응율(CTC : chlorotetracycline staining)을 검사 한 결과, $70^{\circ}C$에서 5초간 융해한 정자의 생존율과 CTC 결과가 $37^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$에서 10초 및 45초간 융해한 처리구보다 유의적(p<0.05)으로 높은 생존율과 낮은 비율의 첨체 반응율을 얻었다. 따라서 미니돼지의 동결 정액은 고온에서 단시간 융해를 하는 것이 정자의 성상에 유리한 것으로 사료된다.
Objective: Correlations between semen parameters and sperm DNA fragmentation index (DFI) were investigated to identify characteristics of sperm without DNA damage that could be used in selecting sperm for intracytoplasmic sperm injection (ICSI). Pregnancy outcomes were compared to determine whether in vitro fertilization (IVF) or ICSI is a better choice for patients who have sperm with a high-DFI. Methods: Semen analysis was carried out in 388 patients who visited our IVF center for the first time to investigate correlations between sperm DFI and semen parameters. In addition, 1,102 IVF cycles in 867 patients were carried out in the present study; 921 cycles in the low-DFI group (DFI < 30%) and 181 cycles in the high-DFI group ($DFI{\geq}30%$). Both the low- and high-DFI groups were subdivided into IVF and ICSI cycle groups. Results: Sperm DFI showed significant inverse correlations with sperm motility (r = -0.435, p< 0.001) and morphology (r = -0.153, p< 0.05). Sperm DFI also showed significant correlations with rapid motility (r = -0.436, p< 0.001), and the kinetic parameters of average-path velocity (r = -0.403) and linearity (r = -0.412). Although there was no significant difference in the pregnancy rates between IVF (48.6%) and ICSI (44.8%) in the low-DFI group, the pregnancy rate of ICSI cycles (44.8%, p< 0.05) was significantly higher than IVF cycles (25.0%) in the high-DFI group. No significant difference was observed in the abortion rates between the low-DFI (52 of 921, 5.6%) and high-DFI groups (7 of 181, 3.8%). Conclusion: ICSI is a better choice than IVF for improving the pregnancy outcomes of patients who have sperm with a high DFI.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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