$\beta$-Glucuronidases (E.C. 3.2.1.31) from Escherichia coli, Helix pomatia, and bovine liver activity have been investigated on 7-O-glucuronides (baicalin, wogonoside, and luteolin-7-O-glucuronide) and 3-O-glucuronides (quercetin-3-O-glucuronide and kaempferol-3-O-glucuronide). Bovine liver enzyme was not active on any of these substrates. E. coli and H. pomatia enzymes were active on 7-O-glucuronides, however, 3-O-glucuronides were resistant to $\beta$-glucuronidase hydrolysis. These results suggest that glucuronic acid at 7-position is more susceptible to E. coli and H. pomatia $\beta$-glucuronidases than that at 3-position. In addition, the subtle difference of aglycone structure on 7-O-glucuronides affected the preference of enzyme. E. coli enzyme was favorable for the hydrolysis of baicalin, however, H. pomatia enzyme was found to be efficient for the hydrolysis of wogonoside. Both enzymes showed the similar hydrolytic activity towards luteolin-7-O-glucuronide. When the Scutellaria baicalensis crude extract was subjected to enzymatic hydrolysis, baicalin and wogonoside were successfully converted to their aglycone counterparts with H. pomatia at 50 mM sodium bicarbonate buffer pH 4.0. Accordingly, the enzymatic transformation of glycosides may be quite useful in preparing aglycones under mild conditions.
항균활성, 항산화성 등 다양한 생리활성이 있는 황금 에탄올 추출물의 두부 저장성 증진 효과를 검토하기 위하여 황금에탄올 추출물을 0.05%, 0.1%를 첨가하고, Bacillus sp. KN-4포자를 접종한 두부를 $25^{\circ}C$에서 저장하면서 품질변화를 측정한 결과, 총균수가 $10^7 CFU/mL$에 도달하는 시간이 대조구는 24시간, 황금 에탄을 추출물 0.05% 첨가구는 36시간, 0.1% 첨가구는 48시간이 소요되었다. pH와 산도는 12시간까지는 큰 차이를 보이지 않았으나, 저장 24시간 이후의 대조구에서는 pH가 급격하게 감소되었고, 산도는 증가하였다. Strength, hardness는 저장초기 대조구보다 황금 에탄올 추출물 첨가구가 높게 나타났으며, 대조구는 저장 초기부터, 0.05% 첨가구는 24시간부터 다소 낮아지는 경향을 나타내었으나, 0.1% 첨가구는 저장기간 중 뚜렷한 변화가 관찰되지 않았다. 관능적인 평가는 대조구에 비해 조직감은 첨가구가, 맛은 대조구가 높았으며, 그 외 색상, 풍미 등에서는 첨가구와 대조구간의 유의적인 차이를 나타내지 않았다.
황금추출물의 간장기능 회복능을 알아보기 위하여, $CCl_4$로 간중독을 유도한 쥐에게 황금추출물을 급여한 후, 혈액성상, 혈액 내 효소활성치 및 간장 내 전염증성 cytokines의 농도변화를 검토했다. RBC, Hb 및 PCV의 값은 처리군간에 유의한 차이를 나타내지 않았다. 백혈구 총수는 대조군과 비교하여 황금 처리군 모두가 낮은 수치를 나타내었으며, 황금추출물 첨가량이 증가함에 따라 neutrophils 및 eosinophile의 비율이 감소하고, lymphocytes 및 monocytes의 비율이 증가하였다. basophils의 구성비는 처리군 별 유의한 차이를 나타내지 않았다. Total protein 농도 및 albumin 농도는 처리군 간에 유의한 차이를 나타내지 않았다. 그러나 albumin/globulin 농도 비율은 대조군보다 황금추출물 처리군에서 높았다. GOT, GPT 및 LDH의 효소활성치들은 모두가 대조군보다 황금추출물 처리군에서 낮은 수치를 나타내었으며, 황금추출물 첨가량이 증가함에 따라 하락하는 경향을 보였다. 간장 내 IL-$1{\beta}$, IL-6 및 TNF-$\alpha$의 농도는 대조군보다 황금추출물 처리군 모두가 낮은 값을 나타내었으며, IL-10의 농도는 대조군보다 황금추출물 처리군 모두가 높은 값을 나타내었다. 이상의 결과를 종합해 보면 황금추출물은 간장기능회복에 효과를 나타내는 기능성 물질을 내재하고 있음을 시사해 준다.
본 연구는 염증을 개선하고 소화에 도움을 주는 최적 혼합물 개발을 위한 소재 발굴을 위해 11종류 식물 추출물을 이용하여 항염증, 트립신 활성 및 항산화 효과를 알아보았다. LPS로 염증이 유도된 RAW 264.7 대식세포에서 대추(ZJ), 익모초(LJ), 황금(SB), 도라지 그리고 참취 추출물은 과분비 되는 NO와 TNF-α 함량을 감소시켜 뛰어난 항염증 효과가 있었다. 11개의 시료 중 맥아(MA), 배(PP), 무 그리고 도라지 추출물은 트립신 활성이 높았다. DPPH 라디칼 소거작용으로 항산화 효과를 알아본 결과 SB, PP, ZJ 그리고 MA 추출물이 높은 항산화 효과가 있었다. 따라서 염증을 개선하면서 소화에 도움을 주는 최적 혼합물 개발을 위해 배, 맥아, 대추, 익모초 그리고 황금을 선택하였다. LPS로 자극한 RAW 264.7 대식세포에서 PP, MA, ZJ, LJ 및 SB(1:1:2:1:2, w/w)을 함유하는 혼합물의 추출물은 각각의 PP, MA, ZJ, LJ 및 SB의 추출물보다 NO 생산을 현저하게 억제하였다. 혼합물 추출물의 DPPH 라디칼 소거작용은 PP, MA, ZJ 및 LJ의 각각의 추출물보다 현저하게 높았다.
화학방부제는 항균활성은 좋지만 많은 부작용이 보고되고 있어 최근에는 인체에 해가 없으며 방부 기능과 자체 효능이 있는 천연방부제의 개발이 활발하다. 또한 천연물의 흡수율을 높이기 위한 방법으로 분자량이 커서 인체에 잘 흡수되지 않아 저분자화를 시키기 위한 방법으로 균주를 이용하여 발효하는 것도 늘어나고 있는 추세이다. 이에 천연방부제가 방부 효과는 지속되어야 하고 첨가했을 때 품질에 손상을 주지 않아야 하며, 향, 색과 성분에 영향을 끼치지 않아야 한다는 요건들을 충족시켜야 한다. 따라서 본 연구는 인체에 해가 없으며 항균활성이 좋은 황금, 단삼, 관중을 선정하였다. 식물은 모두 에탄올로 추출하였고, 발효균주로는 B. subtilis, L. casei, S. cerevisiae와 누룩에서 분리한 Asp. oryzae로 액체와 고체발효를 하여 발효 전과 발효 후의 유효성분의 함량을 비교하였다. 항균활성을 알아보기 위해 C. albicans, S. aureus, P. aeruginosa 세균 3종과 진균은 E. coli로 억제력을 탐색하였다. 천연방부제 개발로 사용하기 위해서는 항균활성이 있고 이러한 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 원산지, 굵기와 용매에 따른 수율은 황금은 중국산이며 굵기는 2,800㎛로 50% ethyl alcohol 추출물에서 21.88%, 단삼은 국내산으로 굵기는 2,800㎛이며 50% ethyl alcohol 추출물에서 25.62%, 관중은 중국산으로 굵기는 2,800㎛, 70% ethyl alcohol 추출물에서 6.50%의 수율을 얻었다. 2. L. casei로 1일 액체 발효했을 때 수율은 황금 66.8%, 단삼 84.8%, 관중 73.0%였다. B. subtilis로 고체발효한 황금과 단삼은 24.40%, 39.30%, 관중은 L. casei로 발효 했을 때 11.10%의 수율을 얻었다. 3. 액체발효 후 황금에서 S. aureus 균주에 대하여 9mm 정도의 clear zone이 확인되었고, 단삼과 관중 발효에서는 항균력이 확인되지 않았다. 4. 황금을 L. casei로 고체발효 했을 때 C. albicans와 S. aureus에서 높은 항균활성을 보였다. 단삼은 S. cerevisiae로 고체발효 했을 때 S. aureus에서 항균활성을 보였다. 관중은 L. casei, S. cerevisiae로 고체발효 했을 때 E. coli와 S. aureus에서 항균활성이 높게 나타났다. 발효하지 않았을 때보다 발효 후의 항균활성이 매우 높았다. 5. 유효성분의 변화는 고체발효하지 않은 황금에서는 baicalin 101.57, baicalein 28.26, wogonin 5.33mg/g이었고, S. cerevisiae로 고체발효 했을 때는 baicalin 94.31, baicalein 30.41, wogonin 3.57mg/g로 baicalein의 함량은 증가된 것으로 확인되었다. 발효하지 않은 단삼에서는 salvianolic acid A가 1.82mg/g 이었으며, S. cerevisiae로 고체발효했을 때는 5.70mg/g으로 증가하였다. 관중의 유효성분은 flavaspidic acid AP, flavaspidic acid PB, flavaspidic acid AB, flavaspidic acid BB로 나타났다.
약용식물 67종의 생리활성 부위를 대상으로 열수 추출물이 in vitro에서 xanthine oxidase의 활성에 미치는 효과를 확인하였다. 약용식물 중에서 황금, 지각, 하수오, 갈근, 청피, 복분자, 녹차 및 지실 추출물은 xanthine oxidase의 활성을 강력하게 저해하여 항통풍 천연소재로서의 활용 가능성이 높게 나타났다. 하수오 뿌리 추출물은 열과 pH에 대한 안정성이 우수하였고, 농도에 비례하여 xanthine oxidase의 활성을 저해하였다. 하수오 추출물은 2.0 mg/0.1 mL의 농도에서 xanthine oxidase에 대해 73.8%의 저해 효과를 나타내었다.
Objectives : The biological activities and compound contents of herbal medicine vary depending on manufacturing processes. In this study, we compared anti-inflammatory effects and compound contents of three kinds of multi-herbal extract HT008 produced by different manufacturing processes in order to determine chemical and biological equivalence. Methods : HT008 was produced by three different manufacturing methods: 1. Freeze dried extract of Eleutherococcus senticosus, Scutellaria baicalensis and Angelica sinensis (HT008 FD), 2. Spray dried extract of E. senticosus and S. baicalensis combined with reflux extract of A. sinensis (HT008 SD), 3. Spray dried extract of E. senticosus and S. baicalensis combined with supercritial fluid extract of A. sinensis (HT008 SF). Anti-inflammatory effects were evaluated using acetic acid induced pain model and ${\lambda}$-carageenan induced paw edema model. Compound contents were evaluated by HPLC quantitative analysis of standard compounds of HT008, eleutheroside E, baicalin, z-ligustilide. Results : HT008 FD, HT008 SD and HT008 SF significantly decreased acetic acid induced pain index and ${\lambda}$-carrageenan induced paw edema volume compared with that of control group. There was no significant difference in efficacy among the HT008 FD, HT008 SD and HT008 SF. Standard compound contents of HT008 FD, HT008 SD and HT008 SF were quantified within the range of Korean pharmacopoeia or other research. Conclusions : Three different manufacturing methods of multi-herbal extracts have been developed without noticeable difference in the efficacy or compound contents. The results might be used to establish manufacturing process and industrialization of herbal extracts.
The various oriental herbal medicines, which have usually been used for treatment of reducing fever, purging intense heat and detoxication, were screened to determine the antibacterial activity and the minimal inhibitory concentration against antibiotics-resistant Staphylococcus aureus. The results obtained were as follows: 1. Among the 23 oriental medicines tested, the water-soluble extract of Coptis japonica showed very excellent antibacterial activity against antibiotics-sensitive and -resistant S. aureus. A little activity was found in the extracts of Scutellaria baicalensis, Eriobotrya japonica and Prunus mume against antibiotics-sensitive S. aureus and in that extracts of P. mume, Schizandra chinensis and S. baicalensis against antibiotics-resistant S. aureus. When C japonica was used, the high antibacterial activity was shown against Bacillus subtilis and other extracts showed a little or no antibacterial activity against B. subtilis and E. coli as a control. 2. The highest antibacterial activities against antibiotics-resistant S. aureus were found in the ethanol-soluble extract of C japonica. Other ethanol-soluble extracts of S, baicalensis, S. chinensis and P. mume showed a little activity against both antibiotics-sensitive and antibiotics-resistant S. aureus. 3. Among the medicinal herbs tested, the water- and ethanol extracts of C. japonica showed very excellent antibacterial activity against the pathogenic S. aureus and both Escherichia coli and Bacillus subtilis used as a control. 4. When the water-soluble extracts of C. japonica and S. baicalensis, minimal inhibitory concentrations (MICs) against antibiotics-sensitive S. aureus were $20mg/m{\ell}\;and\;30mg/m{\ell}$, respectively. The MICs of the ethanol-soluble extracts of C. japonica and P. scabriosaefolia were $7.5mg/m{\ell}\;and\;12mg/m{\ell}$, respectively. 5. For the MICs against antibiotics-resistant S. aureus, the water-soluble extracts of C. japonica and P. mume showed $15mg/m{\ell}\;and\;10mg/m{\ell}$, respectively. The MICs of the ethanol-soluble extracts of C. japonica and P. mume were $13mg/m{\ell}\;and\;20mg/m{\ell}$, respectively. As a result, the highest antibacterial activity was found in both water- and ethanol-soluble extracts of C. japonica against antibiotics-resistant S. aureus. And the water- and ethanol-soluble extracts of S. baicalensis, S. chinensis and P. mume showed comparatively high antibacterial activities against both antibiotics-sensitive and -resistant S. aureus.
본 연구는 당 함량이 높고 ($12{\pm}0.1%$) pH가 낮아($3.0{\pm}0.1$) 세균보다는 효모에 의한 변패가 문제시 되고 있은 가능성 음료의 저장성을 향상시키고자 주요 천연항균제 8종의 항균력을 평가하였다. 이에 따라 대표적인 효모균주 Saccharomyces cerevisiae, Zygosaccharomyces bailii, Pichia membranaefciens, Candida albicans, Pichia anomala 5종을 대상으로 $\varepsilon$-Polylysine, 유카추출물, vitamin $B_1$ derivative, scutellaria baicalensis extract, 키토올리고당, allyl Isothiocyanate, 자당지방산에스테르, 올리고당 등 8가지 주요 항균력을 test 하여 최소저해농도 (Minimal Inhibitory Concerntration, MIC)로 나타내었다. S. cerevisiae와 Z. bailii는 올리고당 용액 10 ppm, 자당지방산에스테르 10 ppm, P. membranaefaciens와 C. albicans는 allyl isothiocyanate 10 ppm, P. anomala는 Allyl isothiocyanate 10 ppm, 올리고당 용액 10 ppm 사용 시 가징 높은 항균력을 나타냈다. 0.015% 이상의 안식향산나트륨 참가 가능성 음료에서는 다섯 효모균 모두 증식이 관찰되지 않았다. 종합적으로 S. cerevisiae, Z. bailii, P. anomala의 저항성이 P. membranaefaciens, C. albicans 보다 낮았으며, 균주별 차이는 보였으나 allyl isothiocyanate, 올리고당, 자당지방산에스테르가 큰 항균력을 보였다. 본 연구결과는 기능성 음료의 합성 보존료를 대체할 수 있는 천연항균제의 개발 및 이용에 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다.
넙치 사료에 열수 추출한 황금을 0, 0.05, 0.1, 1% 흡습시켜 12주동안 사육하는 동안 어류의 비특이면역의 증진 및 질병저항성에 대한 효과를 알아보았다. 황금을 첨가한 사료에서 성장의 유의적인 증가는 없었으나, 초기 4주간 증가하는 경향은 있었다. 혈액학적인 조사 결과에서도 황금 첨가로 인한 넙치의 생리 생태에 부정적인 영향을 나타내지 않았다. 혈청 및 각 조직의 라이소자임 활성은 0.05%의 황금 농도로 흡습시킨 사료 그룹에서 유의적으로 라이소자임 활성이 증가되었다. 백혈구의 식활성을 측정하였을시에 0.05%의 황금 농도로 흡습시킨 사료 그룹에서 유의적으로 백혈구의 식활성이 증가되었다. 병리조직학적 결과에 따르면 넙치 사료에 열수 추출한 황금을 1% 이상 흡습시켜 투여시에는 간 조직에서 괴사가 진행됨을 알 수 있었다. 어류병원세균의 인위감염에 대한 넙치의 질병저항성은 0.05%의 황금 농도로 흡습시킨 사료 그룹에서 E. tarda (GY-01)균에 대하여 상대생존율이 높게 나타났다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 황금 열수 추출물의 넙치에 대한 면역능 향상과 어류 질병의 저항성 증강에 효과가 있는 것으로 사료되나, 1% 이상 첨가시에는 어류생리학적으로 부정적인 영향이 나타나므로 0.05%이하로 투여하여야 할 것으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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