The baculovirus/insect cell expression system is of great value for the large-scale production of normal and mutant mammalian passive glucose-transport proteins heterologously for structural and functional studies. In most mammalian cells that express HepG2, this transporter isoform is predominantly located at the cell surface. However, it had been reported that heterologous expression of other membrane proteins using the baculovirus system induced highly vacuolated cytoplasmic membranes. Therefore, how a cell responds to the synthesis of large amounts of a glycoprotein could be an interesting area for investigation. In order to examine the subcellular location of the human HepG2 transport proteins when expressed in insect cells, immunofluorescence studies were carried out. Insect cells were infected with the recombinant baculovirus AcNPVHIS-GT or with wild-type virus at a MOI of 5, or were not exposed to viral infection. A high level of fluorescence displayed in cells infected with the recombinant virus indicated that transporters are expressed abundantly and present on the surface of infected Sf21 cells. The evidence for the specificity of the immunostaining was strengthened by the negative results shown in the negative controls. Distribution of the transporter protein expressed in insect cells was further revealed by making a series of optical sections through an AcNPVHIS-GT-infected cell using a confocal microscope, which permits optical sectioning of cell sample. These sections displayed intense cytoplasmic immunofluorecence surrounding the region occupied by the enlarged nucleus, indicating that the expressed protein was present not only at the cell surface but also throughout the cytoplasmic membranous structures.
실험실 규모의 배양기에서 곤충세포의 배양을 수행하였다. 회분식 배양에서의 곤충 세포의 성장은 serum의 농도, 다른 영양소, 초기 정종 농도, 기계적인 교반파 같은 변수에 의해 영향을 받는 것으로 나타났다. Lactate와 ammonium은 회분식 배양에서의 말기에 관찰되는 농도에서는 세포의 성장을 저해하는 원인은 아닌것 같았다. 또한. redox potential은 공충세포의 배양 용존산소를 측정할 수 있는 좋은 index 임을 알 수 있었다. 아울러 유전공학적으로 재조합된 baculovirus를 곤충세포에 감염시켜 재조합 단백질의 생산을 시도하였으며 dilution rate 가 $0.006\;hr^{-1}$일때 반응기당 최대 2800 units 의 beta-galactosidase 가 생산되었다.
깍지벌레는 농작물과 도심 및 산림의 수목에 심각한 피해를 주는 해충이다. 본 연구는 이러한 깍지벌레류의 환경친화적 대체방제법을 강구하기 위하여 수행하였는데 기존의 연구에서 솔껍질깍지벌레(Matsucoccus thunbergianae)에 대하여 온수추출물이 효과가 있었던 사군자(Quisqualis indica)를 이용하여 수행하였다. 사군자 열매 메탄올 추출물을 헥산과 클로르포름, 에칠아세테이트, 부탄올, 물층으로 분획하여 귤가루깍지벌레(Planococcus citri)와 주머니깍지벌레(Eriococcus lagerstroemiae), 거북밀깍지벌레(Ceroplastes japonicus), 소나무가루깍지벌레(Crisicoccus pini) 약충을 대상으로 살충활성을 검정한 결과 헥산층의 살충 활성이 가장 높았다. 헥산층에서 활성물질을 탐색한 결과 alpha-pinene, methyl palmitate, eugenol, methyl myristate, phthalic acid mono (2-ethylhexyl)ester와 palmitic acid가 확인 되었으며 그들 물질들 중 ${\alpha}$-pinene의 주머니깍지벌레 2령충에 대한 반수치사농도($LC_{50}$)는 0.0114 ppm이었다. 사군자 추출물은 깍지벌레류의 대체 방제제로 활용할 수 있을 것으로 생각된다.
The objective of this study was to evaluate the beneficial effects of the short-term application of insect-based diet in canine allergic dermatitis. Total 19 atopic dogs with concurrent cutaneous adverse food reactions were enrolled and classified into 3 groups. The treatment group (n = 7) was fed insect-based diet, the positive control group (n = 6) was fed salmon-based diet, and the negative control group (n = 6) was fed commercial or homemade diet for 12 weeks. The degree of skin lesions was evaluated based on canine atopic dermatitis extent and severity index (CADESI-4). Additionally, transepidermal water loss (TEWL) and pruritus visual analog scale were evaluated. All indices were evaluated every 4 weeks after the initial administration of hypoallergenic diets. In the treatment group, significant decrease in the CADESI-4 score was observed at 8 weeks compared to the baseline score (p = 0.031). There were significant differences in the CADESI-4 score between the groups at 8 weeks (p = 0.008), 12 weeks (p = 0.012), and TEWL at 12 weeks (p = 0.022). This preliminary result demonstrates the potential hypoallergenicity of an insect-based diet through features that diminish cutaneous lesions and skin barrier dysfunction.
본 연구는 대규모 GMO 격리포장에서 비타민 A 영양성분이 강화된 황금벼의 안정성 평가에 대한 가이드라인 및 프로토콜을 개발하고자 모본으로 사용된 '낙동'을 대조로하여 수행하였다. 경북대학교 농업생명과학대학 GMO 실습격리포장 에서 총 사용면적 4,700 $m^2$에서 황금벼와 모품종인 '낙동'에 대해 거미류를 포함한 곤충류 다양성을 조사하였다. 조사기간 동안 채집된 개체들은 기능별로 해충군, 천적군, 거미군으로 크게 구분하여 계수하였으며, 조사된 개체군의 해충군, 천적군, 거미류 등의 밀도는 기능군 별로 황금벼와 '낙동'간에 유의성을 보이지 않았다. 해충의 발생양상을 비교 분석한 결과 전반적으로 '낙동'에서 발생량이 다소 많은 경향으로 나타났으며, 일부 시기를 제외하고는 대부분의 시기별 평균 간의 차이는 없는 것으로 나타나 황금벼와 '낙동'과의 해충 발생양상에는 유의성을 찾기가 어렵다고 판단된다. 또한 천적류 발생 양상은 해충과는 달리 황금벼에서 발생량이 다소 많은 경향으로 나타났으나, 시기별 평균 간 차이는 없는 것으로 분석되어 천적 발생양상에는 특이한 유의성을 없다고 판단된다. 따라서 비타민 A 영양성분이 강화된 황금벼에서의 해충 및 천적의 개체군 밀도 및 발생양상은 모본인 '낙동'에서와 차이가 없는 것으로 조사되었다.
Kim, Jae-Su;Choi, Jae-Young;Roh, Jong-Yul;Lee, Han-Young;Jang, Seung-Sik;Je, Yeon-Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권5호
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pp.739-744
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2007
Insect cell lines and the control of infection for obtaining the maximum amount of polyhedrin-Cry1Ac-polyhedrin fusion protein from Bactrus in monolayer and suspension culture systems were tested. Growth rates of the Trichoplusia ni(High-Five) cell line in both culture systems were better than the other insect cell lines, Spodoptera frugiferda(Sf-9, Sf-21), Trichoplusia ni(Tn5), and Spodoptera exigua(Se301). The expression of the fusion protein in a monolayer culture showed that Se301 cells were 2.3-4.8 times more productive on a per cell basis than the other cell lines. However, in suspension culture, only High-Five cells were productive. High-Five cells infected with Bactrus at a multiplicity of infection(MOI) of 5 and a cell density of $3.0{\times}10^5$ cells per ml were more productive than the other infection condition in a suspension culture suitable for a large-scale production of baculovirus. In conclusion, for the large-scale production of Bactrus in vitro, High-Five cells showing good growth and high productivity are suitable.
This study aimed to investigate the characteristics of 3 pre-treatment of mealworm(Tenebrio molitor), and offer basic research data through appropriate pre-treatment method based on the component analysis result. This study was preparing the control group sample No.0(not contain mealworm), and the other sample (Sample No.1,2,3) was using the mealworm prepared in each of the three methods. By using the sample, this study conducted an inspection for component analysis, mineral contents, pH, color value, total amount polyphenols, DPPH radical scavenging activity, reducing power, acceptance test. Each experiments are three times repeated and validated following the one-way ANOVA analysis to verify a significant difference. Acceptance test conducted by 50 consumers indicate consumption decision for sunsik. using the seven point scale, assessment for appearance, flavor, taste, texture, overall acceptance. The research findings showed that sample containing sauted mealworm(SE2) is higher preference and significant in antioxidant activity(total amount polyphenols, DPPH radical scavenging activity, reducing power). Therefore, it is better to use sauted. The result of this study suggest that sauted mealworm is good ingredient for consumer acceptability and functionality of sunsik. According to results of the study, it is suggested to make better use of food, and provide food developer with meaningful date for market targeting. In addition, this study also provides the information for improving awareness of edible insect.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제28권2호
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pp.25-31
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2014
Protaetia brevitarsis seulensis (Kolbe) is widely used in Korea, as a protein-rich, alternate, functional food with pharmacological benefits. In addition to anti-oxidant properties, the larvae of P. b. seulensis also show positive effects against hepatic disorder and diabetes; therefore, P. b. seulensis larvae are being reared on a large scale in Korea. We evaluated reared larvae of P. b. seulensis from Gyeong-gi in Korea. Using 16SrRNA PCR, electro-microscopy, and bioassay techniques, we found that the larvae harbored Spo-1, a bacterium identified as the insect pathogen Serratia marcescens. Therefore, we highlight the use of this insect as an alternate food and the need for its sanitary rearing conditions, as contamination may affect public health.
Yu, Kate E.;Kim, Do-Hyoung;Kim, Yong-In;Jones, Walton D.;Lee, J. Eugene
Molecules and Cells
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제41권2호
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pp.150-159
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2018
Animals use their odorant receptors to receive chemical information from the environment. Insect odorant receptors differ from the G protein-coupled odorant receptors in vertebrates and nematodes, and very little is known about their protein-protein interactions. Here, we introduce a mass spectrometric platform designed for the large-scale analysis of insect odorant receptor protein-protein interactions. Using this platform, we obtained the first Orco interactome from Drosophila melanogaster. From a total of 1,186 identified proteins, we narrowed the interaction candidates to 226, of which only two-thirds have been named. These candidates include the known olfactory proteins Or92a and Obp51a. Around 90% of the proteins having published names likely function inside the cell, and nearly half of these intracellular proteins are associated with the endomembrane system. In a basic loss-of-function electrophysiological screen, we found that the disruption of eight (i.e., Rab5, CG32795, Mpcp, Tom70, Vir-1, CG30427, Eaat1, and CG2781) of 28 randomly selected candidates affects olfactory responses in vivo. Thus, because this Orco interactome includes physiologically meaningful candidates, we anticipate that our platform will help guide further research on the molecular mechanisms of the insect odorant receptor family.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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