DA-125, a new antitumor agent, was compared with adriamycin, a known DNA intercalator, in terms of inhibitory mechanism of DNA replication by using replicating simian virus 40 (SV40) genome in vivo. In analyzing the SV40 DNA replication intermediates present in cells treated with DA-125, it was not observed to accumulate B-dimers of SV40 DNA which are prominent in adriamycin-treated cells. However, treatment with DA-125 induced dose-dependent formation of DNA-topoisomerase complex which is characteristic of topoisomerase poisons. In addition, DA-125 showed more efficient in inhibiting SV40 DNA replication than adriamycin. Therefore, on the basis of this observation, we suggest that DA-125, a derivative of adriamycin, inhibits DNA replication by blocking topoisomerase activity as a toposomerase poison although adriamycin blocks topoisomerase activity as a DNA intercalator.
Bacteriophage M13 DNAs carrying the wild type or base substituted SV40 DNA replication origins were used for replication assay. In vivo and in vitro assay with African green monkey cell line COS-1 showed that the replication of M13-SV40 recombinant DNAs was restricted like a pBR322 SV40 recombinant DNA(Lusky and Botchan, 1981). Furthermore, recombinant phage DNAs isolated from the transfected siminan cells subsequently show a reduced ability to retransform E. coli. But pATSV-W(Kim et al., 1988) was replicated in COS-1 cells normally. We think that a poison sequence may exist on bacteriophage M13 DNA like pBR322.
When DNA replication of simian virus 40 (SV40) is initiated on the replication origin, the regions containing the initiation sites of DNA primase, which participates in the transient RNA primer synthesis for formation of Okazaki fragments in the lagging strand, were chosen as the target sites of antisense RNA for studies of the inhibition of SV40 DNA replication. Four recombinant transcription vectors, pUC-PrI, pUC-PrII, pGEM-PrBS, and pGEM-PrSN, coding antisense RNA, were constructed. Four antisense RNAs (named as I, II, BS, and SN) having the size of 18, 19,58, and 123 nts, respectively, were made from the transcription vectors by in vitro transcription. And then, antisense RNA in the concentration of 2${\mu}m$ were added to COS cells transfected with pATSV-W which is a recombinant plasmid containing the SV40 origin of replication. The inhibitory extent of DNA replication was measured by DpnI resistance and was confirmed by measurement of transient RNA primer synthesis. The result shows that six combinations of antisense RNA (I, II, BS, SN, I+SN, and BS+SN) lead to the inhibition of SV40 DNA replication by up to 85%.
The effects of the RM 60 series on DNA replication systems were examined by using simian virus 40 (SV40) DNA replication system in vitro. The RM 60 series inhibited the DNA replication in the initiation step rather than in the elongation step. Polymerase$\alpha$-primase activity and toposiomerase I activity study were performed subsequently, the RM 60 seies increased the polymerase $\alpha$-primase activity in a low dose, but decreased the activity in a higher dose. The topoisomerase I activity was inhibited by the RM 60 series. This result suggests that the RM 60 series might inhibit some molecules which are required to establish replication forks during the initiation step of the DNA replication.
Fucoidan은 갈조류에 다량 함유되어있는 다당류로서 항암작용, 항혈응고작용, 항혈전작용, 항염증작용, 항virus작용과 같은 생리활성작용력을 가지고 있어 최근 많은 연구가 수행되어지고 있다. 본 논문은 갈조류에서 fucoidan을 추출 하여 그 항암활성을 SV40 DNA replication assay, RPA-ssDNA binding assay, 그리고 MCF7 cell growth inhibition assay를 이용하여 알아보았으며 이 항암활성은 fucoidan의 황산기가 중요한 역할을 하고 있음을 알아내었다. 화학적으로 황산기의 함유량을 증가시킨 fucoidan이 황산기의 함유량을 제거시킨 fucoidan보다 항암활성이 뛰어났고, 이는 RPA의 ssDNA 결함력을 떨어 EM리기 때문이라 예측되어 진다. 본 연구는 한국산 갈조류에서 추출한 황산기를 함유한 fucoidan의 항암활성능력을 보여주었다.
An expression vector in a mammalian cell was constructed using the origin of replication (OR) and the promoters of SV40. The plasmid pSVOE was constructed by inserting SV40 DNA fragment (1, 118bp) containing SV40 OR and promoters into pBR322-1, and then a multiple cloning sequence was inserted at the immediate downstream of the late promoter of SV40 in the pSVOE vector. The plasmid was named pSVML. As a selection marker, thymidine kinase gene of herpes simplex virus with its promoter was inserted into EcoRI site of pSVML and the recombinant was named pSVML-TKp. To test the expression capacity of foreigen gene inserted at the multiple cloning site of pSVML, the thymidine kinase gene without its own promoter was inserted at the BamHI site of pSVML. The recombinant was named pSVML-TK. These plasmids, pSVML-TKp and pSVML-TK, were transfected into COS cells with calcium phosphate precipitation method. The thymidine kinase activity was significantly increased in both transfected cells.
Seo, Jin-Wook;Lee, Hak-Sung;Lee, Min-Jun;Kim, Mi-Ra;Shin, Cha-Gyun
Archives of Pharmacal Research
/
제27권1호
/
pp.77-82
/
2004
DA-125, a novel derivative of adriamycin, is known for its anti-cancer activity. In this study, the inhibitory mechanism of DA-125 on topoisomerase was investigated in the simian virus 40 (SV40) replicating CV-1 cell by studying the SV40 DNA replication intermediates and DNA-topoisomerase complexes. DNA-protein complexes that were formed in the drug-treated cells were quantitated by using a glass filter assay. SV40 DNA replication intermediates that were accumulated in the drug-treated CV-1 cell were analyzed in a high resolution gel. DA-125 did not accumulate B-dimers of SV40 DNA replication intermediates which were found in the adriamycin-treated CV-1 cells. DA-125 induced a dose-dependent formation of the DNA-protein complexes, while adriamycin did not. When adriamycin and etoposide (VP16) were added to the SV40-infected cells at the same time, adriamycin blocked the formation of the DNA-protein complexes induced by VP16 in a dose-dependent manner. However, DA-125 blocked the formation of the DNA-protein complexes induced by VP16 up to the maximum level of the DNA-protein complexes that were induced by DA-125 alone. Adriamycin and DA-125 did not inhibit the formation of the DNA-protein complexes that were caused by camptothecin, a known topoisomerase I poison. DA-125 is bifunctional in inhibiting topoisomerase II because it simultaneously has the properties of the topoisomerase II poison and the DNA intercalator. As a topoisomerase II poison, DA-125 alone induced dose-dependent formation of the DNA-protein complexes. However, as a DNA intercalator, it quantitatively inhibited the formation of the DNA-protein complexes induced by a strong topoisomerase II poison VP16. Furthermore considering that the levels of the DNA-protein complex induced by VP16 were decreased by DA-125 in terms of the topoisomerase II poison, we suggest that DA-125 has a higher affinity to the drug-binding sites of DNA than VP16 has.
Kim, Sang-Hae;Kim, Yong-Sok;Park, Mee-Young;Park, Hyune-Mo
한국동물학회지
/
제28권3호
/
pp.166-178
/
1985
한국형 B형 간염바이러스(HBV) DNA의 표면항원 유전자를 포유동물 세포에서 발현시켜 항원의 검출과 유전자의 분자유전학적인 연구를 하기 위하여 pre-surface antigen 지역과 표면항원 유전자 그리고 poly(A) addition site가 포함된 DNA 조각을 simian virus 40(SV 40)의 DNA 복제 원점과 promoter가 포함된 유전자 운반체에 재조함 시켰다. 우선, HBV DNA가 들어있는 pHBV 107을 Bam HI으로 부분절단한뒤 self-ligation시켜 두 HBV DNA가 같은 방향으로 들어간 pHBVD 107을 만들었다. 이 plasmid를 Bgl II로 절단하였을때 pre-surface지역과 표면항원 유전자 그리고 poly(A) addition site가 함께 포함된 2.7 kb의 insert DNA 조각을 얻었다. 유전자 운반체로는 포유동물세포에서 복제할 수 있도록 하기 위하여 SV40의 DNA 복제 원점부위와 72 bp repeats(enhancer)가 포함된 pSVOE를 만든다음 이 vector의 Pvu II 절단자리에 Bam HI linker를 붙여 insert DNA가 vector의 SV40 late promoter지역 가까이에 들어갈 수 있도록 변형시킨 pSVOB를 만들었다. 이상과 같이 만들어진 pre-surface 지역-표면항원유전자-poly(A)-addition site가 포함된 2.7 kb DNA 절편을 pSVOB promoter 뒤의 Bam HI site에 삽입하여 재조합된 plasmid pSVBS를 얻었다. 예비실험으로 pSVBS를 T-antigen이 생산되는 COS cell에 이주시켰더니 $HB_sAg$가 발현됨을 보았다.
For the construction of plasmid and bmNPV sarrying the FRT recognition site for the FLP recombinases, we synthesized the wild type FRT dligonucleotides. The target FRT sequences consist of three 13bp repeated DNA sequences; two repeats in a direct orientation and one inverted relative to the other two. In addition, there is an 8bp spacer region between the repeats which determune the orientation of the FRT recombination site. In order to place the FRT site both in target BmNPV genome and the transfer vector, we constructed a plasmid, FRT site both in the target BmNPv genome and the transfer vector, we constructed a plasmid, pFRT$\beta$-gal, carrying the FRT sites within the cloning sites of pSV vector and a recombinant BmNPV, vFRTPH, carrying the FRT sites at a downstream of polyhedrin promotor, respectively. In order to test the functionality of the FLP/FRT site-specific recombination system, vFRTPH, pFRT$\beta$-gal and pHsFLP DNA were co-transfected into BmN-4 cells. The resulting recombinant virus was designated a vFRT$\beta$2-gal. From construction analysis of the vFRT$\beta$2-gal with PCR technique it was concluded that the entire pFRT$\beta$-gal plasmid with $\beta$-galactosidase gene and origines of replication flanked by two functional hybrid FRT sequences. The efficiency of recombination was 8.7%, which was higher than that(2.2%) of recombination between a conventional transfer vector and the wild type BmNPV.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
/
제29권4호
/
pp.199-205
/
2003
The p53 protein was discovered in 1979 as cellular 53-kD nuclear phosphoprotein bound to the large transforming antigen of SV40 virus. $P21^{WAF1/CIP1}$, which has been described as the critical downstream mediator of p53, is known to suppress DNA replication and arrest the G1 cell cycle by quaternary complex with cyclin D, cyclin-dependent kinase(CDK) and proliferating cell nuclear antigen(PCNA). In these days, some studies shows that the p21 can be induced by independent pathways. There are various reports about the expression of p21 (67%.82.4%) in oral squamous cell carcinoma. But these studies are mostly done in malignant tumor not in benign tumor. So we decided to study the expression of p21 in ameloblastoma and the relationship between p53 and p21 as a downstream mediator of p53 in ameloblastoma. We investigated the expression of p21 and p53 with the method of immunohistochemistry. We selected 30 cases of ameloblastoma tissue blocks (acanthomatous type: 5 cases, follicular type: 8 cases, plexiform type: 17 cases) imbedded in paraffin. We used 30 cases of normal gingival tissues and 30 cases of squamous cell carcinoma tissues (SCC) respectively and compared their results with those of ameloblastoma. We made slides with the streptavidin-biotin methods and used monoclonal antibody DO-7 (Novocastra, Newcastle, United Kingdom) as p53 antibody and monoclonal antibody M7202 (DAKO, California, U.S.A.) as p21 antibody. We used Pearson's correlation coefficient to analyse the relationship. The results were as follows: 1. p21 was expressed in ameloblastoma about 30% and this is lower than that of normal gingiva and SCC. 2. In normal gingiva and ameloblastoma, p21 expression was correlated with p53 expression. 3. In SCC, p21 were expressed about 83.3% and this is more than that of p53. But there was no correlation between p21 and p53 expression. We confirmed p21 expression and relation with p53 in ameloblastoma. But, to confirm the function of p21, more studies about p21 expression in malignant ameloblastoma and ameloblastic carcinoma are needed.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.