• 한국작물학회지
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• 제58권1호
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• pp.50-56
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• 2013

SELDI-TOF MS를 활용한 저분자 펩타이드 분석을 위해서는 분석시료에 대한 최적화 분석조건을 확립하는 것이 필수적으로 선행되어야 한다. 본 연구는 수수 종자 내 존재하는 10 kDa 이하의 저분자 펩타이드를 프로파일링하기 위하여 활용된 SELDI-TOF MS의 최적화 분석조건을 확립하는데 있다. 분석조건은 (1) 프로테인 칩: CM10(weak cation exchanger), Q10(strong anion exchanger), (2) 바인딩 버퍼의 희석배수: 1/2, 1/5, 1/10, 1/20, 1/50, 1/100, 1/200, (3) Q10의 바인딩 버퍼 강도: 10 mM, 100 mM, (4) 단백질 추출버퍼: sodium borate, sodium borate + acetone, phenol, TCA 버퍼로 하였다. 1. 바인딩 버퍼의 희석배수는 CM10과 Q10 모두 1/20과 1/50이 최적화로 나타났다. 2. Q10의 바인딩 버퍼 강도는 농도가 약한 10 mM에서 더 많은 피크가 검출되었다. 3. SELDI-TOF MS 분석에 적합한 수수 종자단백질 추출 버퍼로는 2~10 kDa 범위에서는 sodium borate 버퍼와 10~20 kDa 범위에서는 phenol 버퍼로 분석되었다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제32권2호
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• pp.121-132
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• 2005

연구목적: 본 연구에서는 비폐쇄성 무정자증 환자에서 나타나는 정자형성과정의 이상과 고환세포의 세포자연사와의 연관관계 여부를 확인하였다. 또한 SELDI-TOF MS 분석을 통하여 고환 내 단백질 발현 양상을 확인하고, 질환에 따른 효과적인 biomarker 개발 가능성 여부를 확인하였다. 재료 및 방법: RT-PCR 및 면역조직화학법을 사용하여 고환에서의 Fas, FasL, Bcl-2, Bax와 Caspase-3의 발현 양상을 확인하고, in situ DNA 3'-end-labelling 방법으로 고환세포의 세포자연사 양상을 확인하였다. SELDI-TOF MS 분석법에 의한 고환의 병리학적 소견에 따른 단백질 발현 변화는 소수성 칩 ($H_4$)을 사용하여 분자량 10~100 kDa 범위 내에서 분석하였다. 결 과: 정상적인 정자형성과정을 보이는 폐쇄성 무정자증 환자의 고환에 비해 지주세포 증후군 (Sertoli cell only syndrome)과 성숙정지 (maturation arrest)를 보이는 고환 내 생식세포와 지주세포에서 세포자연사가 현저하게 증가한 것을 확인할 수 있었다. 세포자연사 관련인자들의 발현 양상을 확인한 결과, 지주세포 증후군과 성숙정지 환자군에서 Fas와 FasL mRNA의 발현이 증가하였으나, bcl-2, bax와 caspase-3 mRNA 발현의 경우에는 두 질환 모두에서 유의한 차이를 확인할 수 없었다. FasL 단백질 발현의 경우, 세포자연사의 증가가 관찰되었던 지주세포 증후군과 성숙정지를 보이는 환자의 간질세포와 지주세포에서 증가하는 양상을 나타내었다. SELDI-TOF MS 분석 결과에서 폐쇄성 무정자증 환자군에 비해 전체적인 단백질 발현양이 지주세포 증후군과 성숙정지 환자의 고환에서 감소하는 양상을 보였으며, 특히, 16.730 kDa 단백질의 현저한 감소를 확인할 수 있었다. 결 론: 본 연구결과를 통해 비폐쇄성 무정자증 환자에서 나타나는 정자형성과정의 장애는 생식세포의 비정상적인 세포자연사와 연관되어 있으며, 고환 내 Fas와 FasL의 비정상적인 발현이 주된 원인인 것을 확인할 수 있었다. 또한, SELDI-TOF MS 분석법을 통한 단백질 발현 양상의 연구는 무정자증 환자에서의 다양한 병리학적 소견을 쉽게 파악할 수 있는 biomarker 발굴뿐만 아니라 질환의 원인규명을 위한 연구에도 유용하게 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제13권5호
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• pp.1911-1915
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• 2012

Aim: New technologies for the early detection of pancreatic cancer (PC) are urgently needed. The aim of the present study was to screen for the potential protein biomarkers in serum using proteomic fingerprint technology. Methods: Magnetic beads combined with surface-enhanced laser desorption/ionization (SELDI) TOF MS were used to profile and compare the protein spectra of serum samples from 85 patients with pancreatic cancer, 50 patients with acute-on-chronic pancreatitis and 98 healthy blood donors. Proteomic patterns associated with pancreatic cancer were identified with Biomarker Patterns Software. Results: A total of 37 differential m/z peaks were identified that were related to PC (P < 0.01). A tree model of biomarkers was constructed with the software based on the three biomarkers (7762 Da, 8560 Da, 11654 Da), this showing excellent separation between pancreatic cancer and non-cancer., with a sensitivity of 93.3% and a specificity of 95.6%. Blind test data showed a sensitivity of 88% and a specificity of 91.4%. Conclusions: The results suggested that serum biomarkers for pancreatic cancer can be detected using SELDI-TOF-MS combined with magnetic beads. Application of combined biomarkers may provide a powerful and reliable diagnostic method for pancreatic cancer with a high sensitivity and specificity.

• 동의생리병리학회지
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• 제25권4호
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• pp.697-701
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• 2011

The purpose of this study was to fine proteins, which have significantly different level in plasma between Qi-deficiency and Fire-heat group of Korean Oriental Stroke pattern identification (PI) among Korean stroke patients. Eighteen stroke patients with Qi-deficiency and forty nine patients with Fire-heat, which had critical syndrome of each PI, were participated in this study. Plasma protein pattern were analyzed by SELDI-TOF MS using Q10 strong anion exchange chip and Mass spectral data (m/z) statistically determined. The expression level of proteins, which were different between Qi-deficiency and Fire-heat in the results by SELDI-TOF MS, were confirmed by western blot. As a result of analyzing plasma protein by SELDI-TOF MS, six protein peaks were significantly higher in Fire-heat group than Qi-deficiency group. Two peaks among of them, M15003 and M15745, were respectively identified as hemoglobin alpha and beta in previous study. Expression level of plasma free hemoglobin of Fire-heat group was also confirmed higher in Fire-heat group than in Qi-deficiency group. These findings suggest that plasma free hemoglobin is a candidate for discriminating Qi-deficiency and Fire-heat group according to pattern identification (PI) of stroke.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제32권2호
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• pp.71-79
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• 2008

Surface-enhanced laser desorption and ionization time-of-flight mass spectrometry (SELDI-TOF MS) is one of the recently developed proteomic technologies which is based on capturing proteins and peptides by chemically modified surfaces and highly sensitive for the analysis of complex biological samples. In the present study, to gain insights into oocyte maturation and early embryo development, SELDI-TOF-MS was used to find the protein candidates that are specifically or prominently expressed in porcine oocytes at the in vitro matured metaphase II (MIIl) and germinal vesicle (GV) stages. By selected CM10 chip, 16 candidates were found to be up-regulated in GV stage oocytes compared with in MII stage oocytes, their molecular weights were 8,180 (2 candidates), 10,226 (5 candidates), 15,767 (5 candidates) and 16,770 (4 candidates) Da respectively. And the expression of 29 candidates were higher in MII than in GV stage oocytes, their molecular weight were 10,832 (3 candidates), 17,743 (8 candidates), 20,122 (3 candidates), 22,131 (3 candidates), 24,857 (7 candidates) and 33,507 (5 candidates) Da, respectively. The expression of selected 13 candidates (0.2 and 1.0 % error tolerances) were analyzed using real time RT-PCR. The proteins that differentially regulated during oocyte in vitro maturation in the pigs may be potential biomarkers of oocyte maturation and quality.

• 한국작물학회지
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• 제59권3호
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• pp.252-262
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• 2014

혈당 강하를 목적으로 선발된 수수계통의 종자 유래 펩타이드의 양적, 질적 형질을 특성화하고 혈당 강하 수수에서 특이적으로 발현 펩타이드를 선발하기 위하여, 혈당 강하수수 7계통과 비 혈당 강하 수수 5계통에 대한 종자 펩타이드 프로파일링을 SELDI-TOF MS 기법을 활용하여 분석하였다. 1. 분자량의 범위가 2~20 kDa에서 검출된 수수 12계통 종자의 펩타이드는 CM10 (weak cation exchanger)에서 104개와 Q10 (strong anion exchanger)에서 95개였으며, 펩타이드 양적발현에서 12계통 간 유의성(p < 0.01)을 보인 펩타이드는 CM10에서 99개와 Q10에서 93개였다. 2. 12계통 간 양적 발현에 유의적(p < 0.01) 펩타이드를 이용한 heat map 분석에서 수수 각 계통 종자의 고유한 펩타이드 프로파일과 특이적으로 발현하는 펩타이드를 제시하고 있다. 3. 수수 12계통간의 근연거리를 이용한 군집분석에서 혈당 강하 수수 7계통과 비 혈당 강하 수수 5계통이 서로 다른 2개의 군집을 형성하였다. 4. 혈당 강하 계통에서 유의성(p < 0.00001)이 있게 발현되는 펩타이드를 29개 선정하였으며, 이중에서 혈당강하 계통에서만 공통적으로 높게 발현된 10개의 펩타이드(분자량이 2231.6, 2845.4, 2907.9, 3063.5, 3132.6, 3520.8, 4078.8, 5066.2, 5296.5, 5375.5 Da)를 선발하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권2호
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• pp.207-217
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• 2007

The Saccharomyces0 cerevisiae KNU5377 strain, which was isolated from spoilage in nature, has the ability to convert biomass to alcohol at high temperatures and it can resist against various stresses [18, 19]. In order to understand the defense mechanisms of the KNU5377 strain under menadione (MD) as oxidative stress, we used several techniques for study: peptide mass fingerprinting (PMF) by matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry (MS) followed by two-dimensional (2D) gel electrophoresis, liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS), and surface-enhanced laser desorption ionization-time of flight (SELDI-TOF) technology. Among the 35 proteins identified by MALDI-TOF MS, 19 proteins including Sod1p, Sod2p, Tsa1p, and Ahp1p were induced under stress condition, while 16 proteins were augmented under normal condition. In particular, five proteins, Sod1p, Sod2p, Ahp1p, Rib3p, Yaf9p, and Mnt1p, were induced in only stressed cells. By LC-ESI-MS/MS analysis, 37 proteins were identified in normal cells and 49 proteins were confirmed in the stressed cells. Among the identified proteins, 32 proteins were found in both cells. Five proteins including Yel047cp and Met6p were only upregulated in the normal cells, whereas 17 proteins including Abp1P and Sam1p were elevated in the stressed cells. It was interesting that highly hypothetical proteins such as Ynl281wp, Ygr279cp, Ypl273wp, Ykl133cp, and Ykr074wp were only expressed in the stressed cells. SELDI-TOF analysis using the SAX2 and WCX2 chips showed that highly multiple-specific protein patterns were reproducibly detected in ranges from 2.9 to 27.0 kDa both under normal and stress conditions. Therefore, induction of antioxidant proteins, hypothetical proteins, and low molecular weight proteins were revealed by different proteomic techniques. These results suggest that comparative analyses using proteomics might contribute to elucidate the defense mechanisms of KNU5377 under MD stress.

• 한국독성학회:학술대회논문집
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• 한국독성학회 2005년도 춘계 국제심포지엄 및 학술대회
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• pp.196-196
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• 2005

• 한국산학기술학회논문지
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• 제10권6호
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• pp.1407-1413
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• 2009

본 연구에서는 쥐의 미성숙 난자의 체외 성숙과정에서 매우 특이적으로 발현되는 후보 단백질 변화를 동정하려는 목적으로 체외 성숙 과정에서 GV 단계의 미성숙 난자와 MIl 단계의 난자를 실험 시료로 사용하였다. 그리고 단백질 Chip은 선행 실험에서 가장 효과적인 CM10을 사용하여 SELDI -TOF MS 분석 장치를 이용하여 후보단백질을 동정하였다. MIl 단계의 미성숙 난자와 비교하여 GV 단계의 미성숙 난자에서 16개의 후보단백질이 높게 발현되었으며, 이때 발현된 후보 단백질 각각의 분자량은 8180(후보단백질 2개), 10226 (5개), 15767(5개), 16770(4개) 달톤(dalton)이였다. 또한 29개의 후보단백질은 MIl 단계의 미성숙 난자에서 높게 발현되었고 이들의 분자량은 각각 10832(3개)17743(8개)20122(3개)22131(3개) 24857(7개) 33507(5개) 달톤 이였다. 한편 전체 후보 단백질 45개의 분석을 Real time RT-PCR에서 수행하여 13개의 잠재적인 후보단백질을 확인 동정하였다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 2005년도 제49차 추계학술대회
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• pp.137-137
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• 2005