천연항균물질인 자몽종자추출물(grapefruit seed extract), 폴리라이신(polylysine) 및 프로폴리스(propolis)의 충치유발균 Streptococcus mutans에 대한 항균활성을 측정하여 가식성필름에 첨가 천연고분자 필름을 제조함으로써, 충치예방 및 구강청결 등의 치의적 상품개발 가능성을 타진해 보고자 하였다. Disc method를 이용한 예비 항균활성실험 결과, 자몽종자추출액의 경우 10%(w/w)의 농도에서 Streptococcus mutans 균에 대해 확실한 항균활성이 나타나, 이를 pullulan 필름제조 용액에 첨가하여 항균성 가식필름을 제조하였다. Pullulan 10$\sim$15%(w/w)의 농도와 사용된 pullulan 양의 40$\sim$50%(w/w)의 sorbitol 농도에서 적절한 항균필름이 제조되었다. 자몽종자추출액 50 ppm을 함유한 pullulan 필름은 Streptococcus mutans의 활성을 억제하는 것으로 나타나, 자몽종자추출액을 함유한 가식성 항균필름은 충치예방상품으로 개발 가능성이 높을 것으로 사료된다.
In batch culture of A. pullulans HP-2001, maximal production of pullulan was 57.90 g/l at 96 hr. The maximal production of pullulan with 76.55 g/l occurred when substituted solution was 10% (w/v) sucrose, 0.25% (w/v) yeast extract and mineral salts. The maximal production of pullulan was 75.00 g/l with a dilution rate of $0.015\;h^{-1}$. Productivity of pullulan in the continuous culture fed with the fresh medium was higher than that fed with the fresh medium without nitrogen source.
The production of pullulan by Aureobasidium pullulans HP-2001 was investigated under various ratios of glucose as carbon source and yeast extract as the nitrogen source, Highest conversion rate (productivity) of glucose to pullulan was 40.0% when concentrations of glucose and yeast extract were 5% and 0.15%, respectively. Maximal production of pullulan was 29.3g/1 when the concentration of glucose was 8%(w/v) and that of yeast extract was 40:1. On basis of the result that production of pullulan was found in a medium which concentration of glucose as carbon source was up to 20%(w/v), Aureobasidium pullulans HP-2001 seemed to overcome the catabolite repression. Conversion rate of pullulan from 20%(w/v) of glucose was 11.1%.
Production of pullulan by Aureobasidium pullulans HP-2001 with agro-industrial byproducts was investigated. Agro-industrial byproducts from the rice processing industry for the traditional Korean food (AIB-A), apple juice production (AIB-B), and soybean sauce production (AIB-C) were used for carbon and nitrogen source for production of pullulan. Major components of AIB-A were glucose, maltose, maltotriose, and dextran. AIB-A and B were found to be good substitute to glucose as carbon source. Productivity of pullulan with AIB-A and B as carbon source was similar to that glucose. Molecular weight of pullulan produced with AIB-A and B was higher than that with glucose. Major components of AIB-B and C were carbohydrate, protein, fat and ash. AIB-C was also a good substitute to yeast extract as nitrogen source. Some of physiological conditions were examined for the large scale production of pullulan.
Effect of carbon source and culture conditions involved in the concentration of dissolved oxygen on cell growth and the production of pullulan by A. pullulans HP2001 were investigated. Among those carbon sources, glucose was found to be the best carbon source for the production of pullulan by A. pullulans HP2001. Maximal production of pullulan by A. pullulans HP2001 was 26.6 g/ f when concentrations of glucose and yeast extract were 8% (w/v) and 0.25% (w/v), respectively. It was found that aeration rate, agitation speed and inner pressure of a bioreactor, which were some of physiological factors involved in the dissolved oxygen in the medium may affect cell growth and the production of pullulan by A. pullulans HP2001.
Poly(vinyl alcohol)(PVA)/pullulan/titanium dioxide($TiO_2$) composite nanofibers were produced at different $TiO_2$ concentrations(1 and 3 wt.%) using the electrospinning method. The parameters of electrospinning including polymer contents, voltage and tip-to-collector distance(TCD) were optimized for fabrication process. The study showed that the best condition to make PVA/pullulan nanofiber and effect of $TiO_2$ nanoparticles. The PVA/pullulan/$TiO_2$ nanofibers were characterized by scanning electron microscope(SEM), transmission electron microscope(TEM), Thermogravimetric analysis (TGA) and X-ray diffraction(XRD).
Self-assembling nanospheres of hydrophobized pullulan have been developed. Pullulan acetate (PA), as hydrophobized pullulan, was synthesized by acetylation. Carboxymethylated poly(ethylene-glycol) (CMPEG) was introduced into pullulan acetate (PA) through a coupling reaction using N, N'-dicyclohexyl carbodiimide (DCC). A synthesized PA-PEG-PA (abbreviated as PEP) conjugate was confirmed by Fourier transform-infrared (FT-IR) spectroscopy. Since PEP conjugates have amphiphilic characteristics in aqueous solution, polymeric nanoparticles of PEP conjugates were prepared using a simple dialysis method in water. From the analysis of fluorescence excitation spectra primarily, the critical association concentration (CAC) of this conjugate was found to be 0.0063 g/L. Observations by scanning electron microscopy (SEM) showed the spherical morphologies of the PEP nanoparticles. The particle size distribution of the PEP conjugates was determined using photon correlation spectroscopy (PCS) and the intensity-average particle size was 193.3 ${\pm}$ 13.53 nm with a unimodal distribution. Clonazepam (CNZ), as a model drug, was easy to entrap into polymeric nanoparticles of the PEP conjugates. The drug release behavior was mainly diffusion controlled from the core portion.
Bacillus circualans S-1으로부터 새로운 균체외 pullulan 6-glucanohydrolase(EP)를 정제하였다. 정 제된 EP는 SDS하에서 140kDa의 분자량을 나타내었으며, pI는 5.5이었다. SDS-PAGE에 의해 분석된 이 EP는 Schiff staining에 대하여 negative이었으며, 또한 아미노 말단기 순서는 P-L-N-M-S-Q-P이었 다. 정제된 EP는 6$0^{\circ}C$ 부근의 최적온도와 pH 9.0 부근에서 최적 pH를 나타내었으며, pH 4.0에서 pH 11 까지 4$^{\circ}C$에서 24시간동안 반응에서도 안정하였다. 또한 기질로 사용된 Pullulan은 열불안정화로부터 효 소를 보호하였으며, 그 범위는 기질 농도에 의존하였다. 이 EP의 활성은 Mn2+, Ca2+ 이온 에 의하여 활성화되었으며, amylopectin, glycogen, $\alpha$,$\beta$-limited dextrin 및 pullulan의 $\alpha$-1,6-linkage를 가수분해 하였다. 정제된 EP는 pH 9.0 및 5$0^{\circ}C$에서 측정하였을 때 pullulan의 경우는 7.92mg/ml의 Km값을 각각 나타내었다. 또한 정제된 EP는 pullulan을 maltotriose까지 완전히 가수분해하였다. 그리고 Mouse anti-serum과 함께 western blotting 분석결과 정제된 EP는 배양과정중 단일 형태로 생산되는 것으로 나타났다.
Aureobasidium pullulans HP-2001 균주를 사용하여 풀루란을 대량 생산을 위하여 7 l 및 100 l 생물배양기를 사용하여 용존산소와 관련된 조건을 최적화하였다. 풀루란의 생산에 최적인 탄소원과 질소원은 각각 50.0 g/l 포도당 및 2.5 g/l 효모추출물이었으며 플라스크 규모에서의 풀루란 변환율은 37%이었다. 풀루란 생산 균주의 생장에 최적인 배지의 초기 pH 및 배양온도는 7.5 및 30oC이었으나 풀루란의 생산에 최적인 배지의 초기 pH 및 배양 온도는 각각 6.0 및 $25^{\circ}C$이었다. 7 l 생물배양기에서 Aureobasidium pullulans HP-2001 균주의 생육에 최적인 교반속도 및 통기량은 각각 600 rpm 및 2.0 vvm이었으나 풀루란 생산에 최적인 조건은 각각 500 rpm 및 1.0 vvm이었으며 최적 조건에서 풀루란의 생산농도는 18.13 g/l이었다. 100 l 생물배양기에서 풀루란 생산 균주의 생장에 최적인 내압은 0.0 kgf/$cm^2$이었으나, 풀루란 생산에 최적인 내압은 0.4 kgf/$cm^2$이었으며 최적 조건에서 풀루란의 생산 농도는 22.89 g/l이었다. 이는 내압이 없는 상태에 비하여 풀루란의 생산 농도가 1.38배 증가한 것이다.
Aureobasidium pullulans에 의한 플루란 생산이 다양한 pH,탄소원, 질소원 조건하에서 수행되었다. 발효 배양액과 배출기체 조성은 GC,LC,GPC를 이용하여 분석되었다. 초기 pH 6.0이고 sucrose 50g/l를 사용했을 때 27g/l 의 플루란이 생산되었다. pH가 3이하로 내려가면 균체량은 증가하지만 플루란 생산은 거의 정지되었다. 질소원으로$(NH_4)_2SO_4$만 사용한 경우의 발효에서는 pH가 3이하로 감소하였기 때문에 플루란 생산량이 감소하였기 때문에 플루란 생산량이 적었으며 탄소원으로 포도당을 사용했을 때도 비슷한 현상이 관찰되었다. sucrose같은 2당류를 기질로 사용했을 때 2당은 포도당과 3당류로 분해되고 포도당은 세포내에서 플루란으로 중합된 후 세포 밖으로 배출되는 것으로 추론되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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