• 한국생명과학회:학술대회논문집
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• 한국생명과학회 2007년도 제48회 학술심포지움 및 추계국제학술대회
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• pp.109.1-109.1
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• 2007

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• 현장농수산연구지
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• 제23권1호
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• pp.81-87
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• 2021

2020년 11월, 국내의 넙치 양식장에서 양식 중이던 넙치가 이상 유영 소견을 보이다가, 지속적으로 폐사하였다. 질병 진단 과정 중, 폐사어의 신장에서 세균(KNCFKW-PN1)이 분리되었다. gyrase B subunit 유전자의 시퀀스 분석 결과, KNCFKW-PN1 분리주는 기존에 보고된 LMG 2227^T 균주의 해당 유전자 시퀀스와 99.59% 유사도를 보여 Pseudoalteromonas nigrifaciens 로 동정이 되었다. 항생제 감수성 실험 결과에 따르면, KNCFKW-PN1 분리주는 ciprofloxacin에 대하여 중등도의 내성을 나타내었고, ampicillin, cefepime, cefotaxime, ceftazidime, amikacin에 내성을 나타내었다. 본 사례는 다제 내성 Pseudoalteromonas nigrifaciens 세균이 넙치로부터 분리된 최고의 보고이다.

• 미생물학회지
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• 제40권4호
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• pp.302-306
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• 2004

한국 근해와 염전으로부터 40 균주의 색소 생성 호염세균을 분리하여, 16S rDNA PCR-RELP와 16S rDNA 염기서열 분석을 통하여 다양성을 파악하였다. 분리된 호염성 색소 생성 세균들은 Pseudoalteromonas, Photobacterium, Vibrio, Halobavillus, Bacillus, Paracoccus, Salinicoccus, Tenacibaculum, Flavobacterium의 다양한 속의 세균 종이었다. 해양에서 분리한 색소생성 호염 세균의 $80\%$ 이상이 그람음성인 Pseudoalteromonas 속이었으며, 염전에서 분리한 세균의 대부분은 그람양성의 Halobavillus속 세균이었다. 또한 Salinicoccus 속에 속하는 신종 가능성이 있는 균주 KK7을 분리하였다.

• 생명과학회지
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• 제22권12호
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• pp.1724-1728
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• 2012

Ecklonia cava로부터 얻어진 fucoidan을 분해하는 해양세균은 해수로부터 분리하였다. 이 균주의 조효소는 pH8과 $50^{\circ}C$에서 fucoidan을 효율적으로 분해하였다. Crude fucoidanase는 1% (w/v) fucoidan 반응액에서 24시간 내에 약 7.1%를 가수분해하였으며 반응산물로서 endo-type 가수분해에 의한 oligosaccharide를 생산하였다. 16S rRNA 유전자 염기서열분석과 생화학적 시험의 결과로부터 SB 1493균주는 잠정적으로 Pseudoalteromonas sp.로 동정하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제35권1호
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• pp.11-16
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• 2007

Pseudoalteromonas carrageenovora 유래의 arylsulfatase 유전자는 PCR로 증폭한 후 Geobacillus toebii의 D-amino acid aminotransferase(D-ATT) 유전자 유래의 구성적 발현 promoter를 함유하는 pHCE-IA vector로 subcloning 하였다. 4-Methylumbelliferyl sulfate가 포함된 LB 평판배지 상에서 자란 형질전환체 Escherichia coli BL2l (DE3)/pHCE-AST는 360 nm상에서 4-methylumbellifrrone에 의한 강한 형광을 보였고, 이는 대장균에서 arylsulfatase가 활성형으로 생산되었음을 의미하였다. E. coli BL21 (DE3)/pHCE-AST를 0.4% glycerol 또는 0.4% glucose가 포함된 LB 배지로 배양했을 때 arylsulfatase활성은 glycerol이 포함된 배지에서 활성이 더 높게 나타났다. 2% glycerol이 포함된 LB배지에서 arylsulfatase 활성은 약 15.0 unit/ml에 달했으며, 이는 1% glycerol을 첨가해서 배양했을 때보다 2.6배 이상의 높은 발현 수준이였다. 재조합 arylsulfatase 효소로 제조된 agarose와 시판용 agarose를 DNA markers를 이용해서 전기영동 성능을 비교했을 때 우수한 이동성과 분리능을 보였다. 본 연구의 결과, E. coli에서 과발현 생산된 arylsulfatase 효소를 이용하여 전기영동용 고순도 agarose생산 공정에 적용 가능함을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제51권4호
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• pp.364-373
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• 2015

알긴산의 응용을 위하여 인천지역에서 수집한 다양한 패류와 해수로부터 알긴산 분해효소 활성이 우수한 103개의 균주를 분리하고 그 중 M1-2-1, M6-1, C8-15 등 분해능이 가장 우수한 3균주를 선발하여 그 특성을 분석하였다. 이들은 모두 그람 음성 간균이었고, 운동성이 있는 호염성 세균이었다. 또한 생리 생화학적 특성 분석과 16S rRNA 유전자의 염기서열 분석으로 M1-2-1과 M6-1은 Pseudoalteromonas 속, C8-15은 Vibrio 속에 속하는 세균으로 동정되었다. 이들의 알긴산 분해효소 활성은 알긴산이 유일한 탄소원인 APY 배지에 접종하여 $25^{\circ}C$에서 6-8시간 배양했을 때 최대로 나타났고, NaCl을 가했을 때 생장 및 효소 활성 모두 증진되었다. 이 분리 균주들의 알긴산 분해 조효소들은 $45^{\circ}C$와 pH 7.0-8.0에서 가장 높은 활성을 나타냈으며, Pseudoalteromonas sp. M1-2-1과 M6-1 균주는 각각 2.7232 g/L와 1.976 g/L의 환원당 생성능을 보여, 산업적으로 활용 가능성이 높은 것으로 사료되었다.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제49권6호
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• pp.840-845
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• 2011

아가로오스 분해산물은 생리활성이 우수하여 의약품 및 기능성 화장품 원료로 사용될 뿐만 아니라 바이오에탄올 생산을 위한 효모 발효용 기질로 검토되고 있어 상당한 주목을 받고 있다. 이에 따라 고성능 아가레이즈 탐색에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 최근 본 연구팀에서는 남해안에서 신규 아가레이즈를 생산하는 미생물인 Pseudoalteromonas sp.를 분리하였다. 본 연구에서는 음이온교환수지를 이용하여 미생물 배양액으로부터 아가레이즈를 분리 정제하기 위한 크로마토그래피 조건을 최적화 하였다. 황산암모늄을 첨가하여 배양 상등액으로부터 침전된 단백질을 회수하고 이를 투석하여 조효소액을 얻었다. 음이온 교환수지인 DEAE-Sepharose 레진이 충진된 칼럼에 조효소액을 로딩하여 아가레이즈를 분리하였다. 410 ${\mu}g$의 단백질 로딩 시 흡착에 적합한 평형 pH는 7.5~8.0 이었고, 적정한 resin의 부피는 3 mL였다. 등용매 용출에서 용출액 중의 NaCl 농도가 증가함에 따라 용출되는 단백질 양이 증가하여 400 mM의 NaCl에서 최대에 달하였다. 최종적으로, NaCl 농도를 1,000 mM까지 선형적으로 증가시키며 아가레이즈를 분리하였다. Lugol 용액을 이용한 염색법으로 용리액 중의 아가레이즈의 존재를 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제40권1호
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• pp.1-9
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• 2012

본 연구는 홍조류를 기질로 사용한 바이오에탄올 생산 공정에서 전처리(홍조류 가수분해) 공정의 효율을 높이기 위하여 성능이 우수한 신규 아가레이즈를 발굴하는 데 있다. 남해안에 서식하는 해조류를 채집하여 이로부터 아가레이즈 활성을 갖는 3종의 균주들을 순수 분리 하였다. 이들 균주들을 4일간 배양한 후, 황산암모늄 침전과 투석에 의하여 배양액으로부터 조효소를 회수하였다. 세포외 분비 효소를 포함하는 배양 상등액으로부터 얻은 조효소와 세포 내 효소를 포함하는 세포 추출물에서 얻은 조효소 모두에서 아가레이즈 활성이 측정되었고, 동일 균주에서 세포외 분비 단백질이 세포내 축적 단백질보다 높은 활성을 나타내었다. 3종의균주 중 GNUM08122 조효소가 단위 단백질 당 아가레이즈 활성은 낮았으나, p-nitrophenyl-${\alpha}$-D-galactopyranoside의 ${\alpha}$-결합을 끊는 것으로 관찰되어 ${\alpha}$-agarase 활성이 있을 것으로 추측되어 균주 동정을 실시하였다. GNUM08122 균주의 16S rRNA 염기서열을 결정하고 계통수 분석을 수행한 결과 Pseudoalteromonas issachenkonii KMM 3549 및Pseudoalteromonas tetraodonis IMA 14160 균주와 99.7%이상 상동성을 보였는데, 이는 GNUM08122가 Pseudoalteromonas속 균주임을 나타낸다. 균주의 생화학적 생리적 특성을 조사하였다. GNUM08122는 $40^{\circ}C$, 산성 조건(pH 4)는 물론 약 알칼리(pH 8)에서도 활발히 성장하였다. 높은NaCl(10%, w/w)에서도 세포생장이 저해를 받지 않았고 다양한 탄수화물을 사용하는 것으로 확인되었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XII)
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• pp.571-575
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• 2003

A marine aerobic Gram-negative bacterium, Pseudoalteromonas carrageenovora, has been blown to hydrolyze carrageenans, the sulfated galactans of red algae, and to desulfate oligo kappa-carrageenans. Recently, the gene encoding arylsulfatase (aryl-sulfate sulfohydrolase, E.C.3.1.6.1) of A. carrageenovora was cloned and the nucleotide sequence was reported. Enzymatic hydrolysis of sulfate groups in agaropectin simplifies the process of agarose preparation. In order to overproduce the enzyme, the arylsulfatase gene (astA, 984 bp ORF) from P. carrageenovora genome was amplified by PCR and subcloned into the pET21a vector. When the constructed plasmid pAST-A1 was introduced into E, coli BL21(DE3), the transformant on LB plate containing IPTG showed the hydrolyzing activity for p-nitrophenyl sulfate. Most of arylsulfatase activity was found in the cell lysate, but at $50\;{\sim}\;5000\;{\mu}M$ IPTG concentration the activity was found both in the culture supernatant and the cell lysate. The molecular weight of the recombinant enzyme was estimated to be 34 kDa by SDS-PAGE.

• Ocean and Polar Research
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• 제27권2호
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• pp.215-219
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• 2005

We isolated and identified three protease-producing bacteria that had inhabited the region around the Korean Arctic Research Station Dasan located at Ny-Alesund, Svalbard, Norway $(79^{\circ}N,\;12^{\circ}E)$. Biofilms were collected from the surface of a floating pier and from dead brown algae in a tide pool near the seashore. The biofilm samples were transported to the Korea Polar Research Institute (KOPRI) under frozen conditions, diluted in sterilized seawater, and cultured on Zobell agar plates with 1% skim milk at $10^{\circ}C$. Three clear zone forming colonies were selected as protease-producing bacteria. Phylogenetic analysis based on 16S rDNA sequences showed that these three stains shared high sequence similarities with Pseudoalteromonas elyakovii, Exiguobacterium oxidotofewm Pseudomonas jessenii, respectively. We expect these Arctic bacteria may be used to develop new varieties of protease that are active at low temperatures.