본 연구는 녹두묵을 이용한 항비만 임상선행연구를 바탕으로 녹두에 풍부한 vitexin의 항비만 효과의 기작을 살펴보고자 하였다. 녹두 vitexin은 $200{\mu}M$ 농도까지 3T3-L1 지방 전구세포의 독성효과는 없었으며 50, 100, $200{\mu}M$ 농도에서 지방합성이 억제되었고 $100{\mu}M$ 농도에서 지방분해효과로 추측할 수 있는 결과가 나타났다. 또한 $200{\mu}M$에서 염증성 아디포사이토카인 유전자발현을 증폭시키는 상위신호체계(p38, ERK)가 억제된 반면 AMPK의 경우는 $100{\mu}M$ 농도까지 증가하였고 $PPAR{\gamma}$ 단백질 발현도 $200{\mu}M$에서 증폭하였으며 TNF-${\alpha}$와 aP2 mRNA 발현은 $25{\mu}M$에 증가하였다가 감소하였다. 이러한 결과를 바탕으로 결론을 내리면 vitexin $100{\sim}200{\mu}M$ 사이의 농도가 항비만 기작을 규명하는 in vivo 실험을 위한 적절한 농도로 여겨진다. 그러나 본 연구에서는 vitexin 처리에 따른 C/EBP, SREBP1, $PPAR{\gamma}$ mRNA 농도의 변화는 관찰되지 않아 3T3-L1 세포자살(apoptosis) 신호체계 및 mTOR와의 연계성체계 혹은 기타 adipogenesis 억제 유전자로 SIRT1 등의 연구가 향후에 더 필요할 것으로 사료된다.
Platycodi radix의 주요 성분으로 항염증, 항고지혈 및 항종양 등 다양한 약리적 기능을 가지는 platycodin D는 최근 비만 및 지방세포형성(adipogenesis)을 억제하는 효과를 가진다고 보고되고 있다. 본 연구에서는 adipogenesis의 상위단계에 위치한 다양한 pro-adipogenic regulators와 anti-adipogenic regulators의 발현이 platycodin D에 의해 어떻게 변화되는지 분석하였다. Real-time PCR을 이용한 mRNA 발현의 정량적 분석에서 adipogenesis의 marker라 불리는 ADIPOQ와 GLUT4의 mRNA 발현은 platycodin D의 처리에 의해 유의적으로 감소되었다. 또한 terminal marker의 발현을 조절하는 PPAR$\gamma$와 C/EPB$\alpha$의 mRNA 발현 역시 platycodin D에 의해 유의하게 억제되었다. Platycodin D의 지방세포 억제 효과에 대한 상세한 분자적 메커니즘을 규명하기 위해, PPAR$\gamma$와 C/EPB$\alpha$의 상위 조절자들의 mRNA 발현 변화를 분석하였다. Pro-adipogenic regulators에 대한 platycodin D의 효과를 분석한 결과, C/EBP$\beta$와 C/EPB$\delta$의 mRNA 발현은 platycodin D에 의해 변화가 없었던 반면, KROX20과 KLF15의 mRNA 발현은 각각 초기 분화(2일)와 후기 분화(4일)에서 platycodin D에 의해 유의한 감소를 보였다. 또한, 대표적인 anti-adipogenic regulators인 CHOP의 mRNA 발현은 초기분화에서 platycodin D에 의해 유의하게 증가한 반면, 또 다른 anti-adipogenic regulators인 C/EBP$\gamma$의 mRNA 발현은 platycodin D에 의해 영향을 받지 않았다. 따라서 adipogenesis 과정에서 platycodin D는 pro-adipogenic regulators인 KROX20, KLF15와 anti-adipogenic regulator인 CHOP의 mRNA 발현에 영향을 주어 PPAR$\gamma$와 C/EPB$\alpha$를 조절하는 것으로 보여진다. 결론적으로, platycodin D에 의한 adipogenesis 억제 효과는 KROX20, KLF15 등의pro-adipogenic regulator와 CHOP 등의 anti-adipogenic regulator의 상호작용을 통해 나타나는 결과라 사료된다.
Choi, Seong Ho;Park, Sung Kwon;Choi, Chang Weon;Li, Xiang Zi;Kim, Kyoung Hoon;Kim, Won Young;Jeong, Joon;Johnson, Bradley J.;Zan, Linsen;Smith, Stephen B.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제29권3호
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pp.404-412
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2016
We hypothesized that supplementing finishing diets with palm oil would promote adipogenic gene expression and stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression in subcutaneous (s.c.) and intramuscular (i.m.) adipose tissues of feedlot steers. Eighteen Angus and Angus crossbred steers were assigned to three groups of 6 steers and fed a basal diet (control), with 3% palm oil, or with 3% soybean oil, for 70 d, top-dressed daily. Tailhead s.c. adipose tissue was obtained by biopsy at 14 d before the initiation of dietary treatments and at 35 d of dietary treatments. At slaughter, after 70 d of dietary treatment, tailhead s.c. adipose tissue and i.m. adipose tissue were obtained from the longissimus thoracis muscle. Palm oil increased plasma palmitic acid and soybean oil increased plasma linoleic acid and ${\alpha}$-linolenic acid relative to the initial sampling time. Expression of AMP-activated protein kinase alpha ($AMPK{\alpha}$) and peroxisome proliferator-activated receptor gamma ($PPAR{\gamma}$) increased between the initial and intermediate biopsies and declined thereafter (p<0.03). SCD gene expression did not change between the initial and intermediate biopsies but declined by over 75% by the final period (p = 0.04), and G-coupled protein receptor 43 (GPR43) gene expression was unaffected by diet or time on trial. Soybean oil decreased (p = 0.01) $PPAR{\gamma}$ gene expression at the intermediate sample time. At the terminal sample time, $PPAR{\gamma}$ and SCD gene expression was less in i.m. adipose tissue than in s.c. adipose tissue (p<0.05). $AMPK{\alpha}$ gene expression was less in s.c. adipose tissue of palm oil-fed steers than in control steers (p = 0.04) and CCAAT enhancer binding protein-beta ($CEBP{\beta}$) gene expression was less in s.c. and i.m. adipose tissues of palm oil-fed steers than in soybean oil-fed steers (p<0.03). Soybean oil decreased SCD gene expression in s.c. adipose tissue (p = 0.05); SCD gene expression in palm oil-fed steers was intermediate between control and soybean oil-fed steers. Contrary to our original hypothesis, palm oil did not promote adipogenic gene expression in s.c. and i.m. adipose tissue.
FCEE를 3T3-L1 전지방세포의 분화과정 중에 처리한 후, FCEE가 지방의 축적에 미치는 영향을 확인하였다. FCEE($200{\mu}g/mL$)를 세포에 처리한 후 Oil Red O 염색법과 AdipoRed 형광염색법을 이용한 지방 축적과 세포내 중성지방 함량을 측정한 결과, 무처리한 지방세포와 비교하여 각각 10.2%, 13.7% 유의하게 감소하는 것을 확인하였다. 이러한 결과에 대한 기작을 확인하고자 포도당 유입량과 유리 글리세롤 방출량을 측정하였다. FCEE($200{\mu}g/mL$) 처리 시 지방세포와 비교하여 포도당 유입량이 36.6% 유의적으로 감소하였으며, 유리 글리세롤 방출량도 8일째에 유의적으로 감소하였다. 이는 지방세포의 분화과정 중에 FCEE의 처리로 분화가 억제되어 지방구의 형성이 억제되고 배양액으로 배출되는 유리 글리세롤의 총량이 감소한 것으로 판단된다. 이러한 결과가 지방세포 분화의 억제에 의한 것인지 판단하기 위해 지방 형성 관련인자의 mRNA 발현량을 측정하였다. FCEE($200{\mu}g/mL$)의 처리로 AMPK mRNA 발현량은 지방세포와 비교하여 3배 증가하였으며, SREBP-1c, $C/EBP{\alpha}$와 $PPAR{\gamma}$ mRNA 발현량은 각각 0.6, 0.6 및 0.8배 감소하는 것을 확인하였다. 이상의 결과들로부터 FCEE는 지방 합성을 억제하는 활성을 보유하고 있는 바, 향후 항비만 기능성 식품소재로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
Objective This study was designed to investigate the effects of Gamiygin-tang (GY) extract (GYE) and fermented solution (GYF) on body weight, serum lipid level and adipocyte differentiation in high fat diet-fed obese mice. Materials and Methods High fat diet-fed obese mice and 3T3-L1 adipocytes mice were treated with GYE and GYF and obesity related markers were assessed. A cytotoxicity assay was carried out by MTS assay. Inhibitory effects of GYE and GYF on adipocyte differentiation were carried out by Oil Red O staining. The effects of GYE and GYF on the expression of adipocyte differentiation regulatory factors, peroxisome proliferator-activated receptor gamma ($PPAR{\gamma}$) and CCAAT/enhancer binding protein alpha (CEBP-${\alpha}$) were measured by real-time reverse transcriptase-polymerase chain reaction. The effects of GYE and GYF on the expression of adipocyte differentiation regulatory factors were also determined in relation to protein production/protein levels by western blotting. The anti obesity effects of GYE and GYF were measured in high fat-diet induced obese mice. Various factors were measured from the serum of the high fat-diet mice. Results Though GYE did not show toxicity at the concentration of 1mg/ml, GYF showed toxicity at the concentration of 1mg/ml. The GYE at 0.1 and 1mg/ml inhibited the differentiation of 3T3-L1 cells, and the GYF also inhibited the differentiation of 3T3-L1 cells. The effect of GYE on adipocyte differentiation factors including PPAR-${\gamma}$ and CEBP-${\alpha}$ was investigated and compared to the corresponding concentration levels of GYF. GYE and GYF both suppressed the RNA and protein levels of adipocyte differentiation factors. In the animal test both GYE and GYF reduced weight gain. GYE and GYF reduced blood cholesterol, TG and LDL levels. GYF better reduced blood cholesterol levels. Conclusions These results demonstrate that GYE and GYF exerts anti-obesity effect in 3T3-L1 cells and obese mice induced by high-fat diet.
본 연구에서는 홍삼 사포닌 분획(SF)으로부터 진세노사이드의 조성을 분석하고 지방세포의 분화 및 지방축적에 대한 효과를 측정하였다. SF는 지방분화인자인 $PPAR{\gamma}$, $C/EBP{\alpha}$의 단백질 양을 억제함으로써 지방분화 동안 효과적으로 지방축적을 억제하였으며 주로 지방분화 초기시점부터 지방분화 초기인자인 $C/EBP{\beta}$, KLF2의 조절작용을 통해 지방축적을 억제하는 것으로 관찰되었다. SF는 또한 지방분화 동안 생성되는 ROS의 생성을 효과적으로 억제하였는데 이는 SF가 산화방지 시스템인 Nrf2/Keap1 경로를 활성화하기 때문으로 판단되며 특히 Nrf2의 핵 내로의 진입을 활성화 함으로써 Nrf2의 타겟 산화방지 분자들인 HO-1, NQO1의 발현을 촉진하였다. 이는 지방분화 동안 SF의 지방축적 억제 효과가 Nrf2의 활성화와 밀접하게 관련이 있음을 보여준다.
Objectives : The purpose of this study was to investigate inhibitory effects of steamed Polygonatum odoratum extract (POE) on differentiation and adipogenesis in 3T3-L1 adipocytes. Methods : Polygonatum odoratum (P. odoratum) extract was extracted with ethyl acetate. Total phenolic and flavonoid contents in POE were measured for antioxidant activity. The spectrophotometric method was used to determine the DPPH and ABTS radical scavenging activity and ferric-reducing antioxidant potential (FRAP). MTT assay was examined for cell toxicity, oil red O staining was performed for intracelluar adipogenesis in differentiated 3T3-L1 adipocytes. Western blot analysis for measurement of CCAAT/enhancer-binding protein ${\alpha}$ ($C/EBP{\alpha}$), peroxisome proliferator-activated receptor${\gamma}$ ($PPAR{\gamma}$) and AMP-activated protein kinase (AMPK) expressions were performed. Results : The results revealed that POE has antioxidant activities. Contents of total polyphenolics and flavonoids were $50.83{\pm}1.52$ GAE mg/100g dry weight of POE and $17.05{\pm}2.47$ RE mg/100g dry weight of POE, respectively. DPPH radical scavenging activity, and FRAP in 10 mg/ml concentration were $92.1{\pm}0.6%$, $244.8{\pm}9.0{\mu}M$ Fe(II) and ABTS inhibition in 5 mg/ml concentration was $84.8{\pm}4.1%$. Treatment of POE in adipocytes inhibited the differentiation and adipogenesis of 3T3-L1 adipocytes compared to those of vehicle control. Additionally, protein expressions of $C/EBP{\alpha}$ and $PPAR{\gamma}$, major transcription factor for the adipogenic genes, were significantly decreased compared to those of vehicle control (p<0.05). Futhermore, phosphorylation of AMPK was increased in 3T3-L1 adipocytes treated with POE compared to that of vehicle control (p<0.05). Conclusions : we demonstrate that steamed P. odoratum extract (POE) has potentiating antioxidant activities, inhibits differentiation and lipid accumulation and also induces energy expenditure in adipocytes, which may contribute to antiobesity property.
Fluorouracil (5-FU) is one of the most widely used chemotherapeutic drugs in the treatment of advanced colorectal cancer patients. Capsaicin (N-vanillyl-8-methyl-alpha-nonenamide), a spicy component of hot pepper, is a homovanillic acid derivative that preferentially induces cancer cells to undergo apoptosis. The purpose of the present study is to examine whether capsaicin enhances the anticancer effect of 5-fluorouracil in HT-29 human colon cancer cells by inducing apoptosis, and whether PPARgamma is involved in the capsaicin action in combination treatment with 5-FU. Treatment of the cells with either 5-FU or capsaicin alone for 48 h had little effect on the cell viability up to $50{\mu}M$ concentration, whereas co-treatment of the cells with capsaicin in the presence of 5-FU for 48 h significantly decreased the cell viability in a concentration-dependent manner. In addition, caspase-3 activity, a marker enzyme for apoptosis, was significantly increased by the combined treatment with 5-FU and capsaicin compared to the 5-FU or capsaicin alone treatment. Also, treatment with troglitazone, a peroxisome proliferator-activated receptor gamma ($PPAR{\gamma}$) agonist, further enhanced the effect of the combination treatment on the cell viability and caspase-3 activity, and bisphenol A diglycidyl ether (BADGE), a $PPAR{\gamma}$ antagonist, blocked the effect of the combination treatment. These results suggest that the combination treatment of HT-29 cells with 5-FU and capsaicin induces apoptotic cell death at relatively low concentration than each drug alone, and the combination treatment may be associated with the $PPAR{\gamma}$ pathway activation.
적무(Rahphanus sativus L.) 새싹은 십자화과 식물이다. 본 연구에서는 적무새싹 물 추출물의 ${\alpha}$-amylase, ${\alpha}$-glucosidase, 췌장 리파아제 효소에 대한 활성 억제능과 3T3-L1 지방 전구세포를 이용하여 지방합성 억제 효능을 평가하였다. 적무새싹 추출물을 처리한 결과 ${\alpha}$-amylase, ${\alpha}$-glucosidase, 췌장 리파아제 효소 활성을 농도 의존적으로 억제하는 것을 확인하였다. 더욱이 적무새싹 추출물은 3T3-L1 지방 전구세포의 지방세포 분화, 지방 및 중성지방 축적을 억제하였으며 세포독성은 나타나지 않았다. 적무새싹 추출물은 peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)${\gamma}$, sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP-1) and CCAT/enhancer binding protein (C/EBP)${\alpha}$와 같은 지방합성 전사 인자의 발현 조절을 통하여 지방합성을 억제하였다. 또한, 적무새싹 추추물은 지방합성과 수송 저장에 관여하는 단백질인 adiponectin, fatty acid synthesis (FAS), perillipin, and fatty acid bind protein-4(FABP4)의 발현을 억제하였다. 이 연구는 적무새싹이 지방합성 전사인자는 물론 지방합성 단백질 발현의 제어를 통해 비만을 억제할 수 있는 가능성을 보여주었다.
본 연구에서는 삼정환의 혼합추출물과 개별추출물을 비교하여 항산화에 중요한 역할을 하고 있는 총 페놀 함량과 DPPH 자유라디칼 소거능 및 $TNF{\alpha}$의 유전자발현변화를 분석하였고, 항비만과 지질대사개선에 밀접한 요소인 AMPK-${\alpha}1$, HMG-CoA reductase, $PPAR{\gamma}$의 유전자 발현변화와 3T3-L1세포에서 Oil red O 실험을 하여 세포 내 지방구 함량의 변화를 살펴보았다. DPPH 자유라디칼 소거능은 두 군에서 큰 차이를 보이지 않았으며, 3T3-L1세포의 세포생존율은 삼정환의 혼합추출물과 개별추출물에서 모두 $200{\mu}g/ml$의 농도에서 높은 생존율을 보였다. 총 페놀함량 역시 개별추출물에서 더욱 많이 나타난 것을 알 수 있었으나, 종합적으로 항산화능력은 혼합추출물과 개별추출물이 유사한 것으로 나타났다. 비만과 관련성 있는 지질대사와 관련된 지표들을 분석해본 결과, Oil red O staining에서 혼합추출물을 처리한 군은 대조군과 큰 차이를 보이지 않은 반면, 개별추출물에서 지방구의 수가 감소한 것을 확인하였고, 항비만 효과에 주요한 타깃 유전자로 알려져 있는 AMPK-${\alpha}1$과 $PPAR{\gamma}$ 모두 혼합추출물에 비해 개별추출물에서 유의성 있는 변화를 확인하였다. 지질대사를 활성화시키는 HMG-CoA reductase 역시 유의성 있는 효과는 확인하지 못했으나 개별추출물에서 더욱 감소된 것을 알 수 있었다. 종합적으로, 삼정환을 혼합한 상태로 추출을 한 것보다 개별 약재를 추출한 것을 혼합하여 사용한 개별추출군이 항산화 및 항비만 효과에 더 나은 효능이 있는 것을 확인하였고, 이는 기존 환제의 제형으로 사용하던 약재의 실험에서 추출방법 및 제형에 더욱 심도 있는 연구가 필요하다는 것을 시사하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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