This study was conducted to evaluate in-situ bioremediation ability of Bioil-D, microbial material for oil degradation, at a gas station that had been treated by SVE system. TPH concentrations and total contaminated soil volume were rapidly decreased after Bioil-D treatment. The performance of Bioil-D was also estimated based on the observation of microbial population at the soil samples and $CO_2$ concentration produced at the extraction wells. The field study showed a successful work of Bioil-D.
페난스렌은 다환방향족 탄화수소의 일종으로서 미량으로도 인체에 강한 해를 미칠 수 있는 주요 환경오염 물질이다. 미생물을 이용한 페난스렌 제거 목적으로 중국 쑤저우(Suzhou) 지역의 유류 오염토양에서 페난스렌을 강력하게 분해하는 세균을 분리하였다. 16S rDNA 염기서열 결정에 의하여 이 세균은 Sphingobacterium sp. SW-09로 동정되었으며 PCR 증폭을 통하여 페난스렌 분해 유전자인 nahH를 가지고 있음이 확인되었다. 이전의 연구에서 포천일대의 군부대에서 분리된 강력한 페난스렌 분해세균인 Staphylococcus sp. KW-07과 이번에 분리된 Sphingobacterium sp. SW-09을 이용하여 이들의 페난스렌 분해능을 비교분석하였다. 그 결과, 쑤저우 지역에서 분리된 Sphingobacterium sp. SW-09이 최소배지와 실제토양에서 모두 Staphylococcus sp. KW-07보다 강하게 페난스렌을 분해하는 것으로 나타났다. 결과적으로 이번에 분리된 Sphingobacterium sp. SW-09을 사용하여 유류 오염토양의 환경정화에 사용할 수 있을 것으로 판단된다.
Oil spill was found in 1999 from a diesel storage facility located near the top of Baekun Mountain in Uiwang City. Application of bioremediation techniques was very relevant in removing oil spills in this site, because the geological condition was not amenable for other onsite remediation techniques. For efficient bioremediation, bacterial communities of the contaminated site and the uncontaminated control site were compared using both molecular and cultivation techniques. Soil bacterial populations were observed to be stimulated to grow in the soils contaminated with diesel hydrocarbon, whereas fungal and actinomycetes populations were decreased by diesel contamination. Most of the dieseldegrading bacteria isolated from contaminated forest soils were strains of Pseudomonas, Ralstonia, and Rhodococcus species. Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis revealed that the profiles were different among the three contaminated sites, whereas those of the control sites were identical to each other. Analysis of 16S rDNA sequences of dominant isolates and clones showed that the bacterial community was less diverse in the oil-contaminated site than at the control site. Sequence analysis of the alkane hydroxylase genes cloned from soil microbial DNAs indicated that their diversity and distribution were different between the contaminated site and the control site. The results indicated that diesel contamination exerted a strong selection on the indigenous microbial community in the contaminated site, leading to predominance of well-adapted microorganisms in concurrence with decrease of microbial diversity.
The biodegradation rates of diesel oil by a selected diesel-degrading bacterium, Pseudomonas stutzeri strain Y2G1, and microbial consortia composed of combinations of 5 selected diesel-degrading bacterial were determined in liquid and soil systems. The diesel degradation rate by strain Y2G1 linearly increased $(R^2=0.98)$ as the diesel concentration increased up to 12%, and a degradation rate as high as 5.64 g/l/day was obtained. The diesel degradation by strain Y2G1 was significantly affected by several environmental factors, and the optimal conditions for pH, temperature, and moisture content were at pH8, $25^{\circ}C$, and 10%, respectively. In the batch soil microcosm tests, inoculation, especially in the form of a consortium, and the addition of nutrients both significantly enhanced the diesel degradation by a factor of 1.5 and 4, respectively. Aeration of the soil columns effectively accelerated the diesel degradation, and the initial degradation rate was obviously stimulated with the addition of inorganic nutrients. Based on these results, it was concluded that the major rate-limiting factors in the tested diesel-contaminated soil were the presence of inorganic nutrients, oxygen, and diesel-degrading microorganisms. To resolve these limiting parameters, bioremediation strategies were specifically designed for the tested soil, and the successful mitigation of the limiting parameters resulted in an enhancement of the bioremediation efficiency by a factor of 11.
Many methods have been developed for the remediation of contaminated soil and groundwater. Among those technologies, in-situ bioremediation is most likely to be cost-effective method for petroleum hydrocarbon contamination. But the in-situ bioremediation can require more time to remediate hydrocarbon-contaminated soil and groundwater than other methods. Therefore we intended to save time of in-situ bioremediation using a biological additive to activate indigenous microbes in soil. The additive, 'Inipol EAP 22' stimulates the growth of specific flora, significantly accelerating the speed at which hydrocarbons are biodegraded. And it hans been tested in accordance with protocol approved by the USEPA and is registered on the National Contingency Plan Product Schedule List. In the experiment, three soil samples contaminated with fuel oil were prepared in the same concentration. Inipol EAP 22 was not added to one sample and was added to the other two samples with 5% and 10% of hydrocarbon by weight respectively. And $CO_2$gas derived from bacterial respiration was analyzed in each samples for 15 days. As a result, 145% and 153% of $CO_2$ evolution (microbial respiration) against the sample without 'Inipol EAP 22' occurred in samples with 'Inipol EAP 22' addition of 5% and 10%, respectively
원유로 오염된 토양의 생물학적 복원과정 동안 접종된 Nocardia sp. Hl7-1 균주를 확인하기 위해 165 rDNA sequence에 기초하여 균주에 특이적인 primer를 제작하였다 14균주의 16S rDNA sequence비교를 통해 제작된 4개의 primer set는 Hl7-1 균주를 특이적으로 검출할 수 있었다. 특히 NH169F-NH972R과 NH575F-NH972R의 primer set는 50 fg의 DNA와 $1.2${\times}$10^4$ cfu/g-soil의 균체농도까지 민감하게 검출할 수 있었다. 이 두 primer set는 원유로 오염된 토양의 bioremediation과정 동안 접종된 Hl7-1 균주의 특이적 검출을 가능케 하였으며, 이는 사용된 primer set에 의해 증폭된 PCR산물을 제한효소(EcoRI)로 절단한 결과와 DGGE를 통한 Hl7-1 균주의 확인을 통해 본 연구에서 제작된 primer set의 특이성을 검증하였다.
The present study compared the microbial diversity and activity during the application of various bioremediation processes to crude oil-contaminated soil. Five different treatments, including natural attenuation (NA), biostimulation (BS), biosurfactant addition (BE), bioaugmentation (BA), and a combined treatment (CT) of biostimulation, biosurfactant addition, and bioaugmentation, were used to analyze the degradation rate and microbial communities. After 120 days, the level of remaining hydrocarbons after all the treatments was similar, however, the highest rate (k) of total petroleum hydrocarbon (TPH) degradation was observed with the CT treatment (P<0.05). The total bacterial counts increased during the first 2 weeks with all the treatments, and then remained stable. The bacterial communities and alkane monooxygenase gene fragment, alkB, were compared by denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE). The DGGE analyses of the BA and CT treatments, which included Nocardia sp. H17-1, revealed a simple dominant population structure, compared with the other treatments. The Shannon-Weaver diversity index (H') and Simpson dominance index (D), calculated from the DGGE profiles using 16S rDNA, showed considerable qualitative differences in the community structure before and after the bioremediation treatment as well as between treatment conditions.
본 연구는 인위적으로 오염시킨 사질토와 미세토를 대상으로 미생물, 영양제 및 계면활성제를 이용하여 성능실험을 수행하여 시간에 따른 TPH와 BTEX의 제거 특성 등에 대해 알아보았다. 수분 함량을 10${\sim}$20%로 유지하면서 실험한 결과, 사질토를 이용한 TPH 제거율은 C군의 경우 C-1 (미생물+ 영양제), C-2 (미생물 + 영양제 + 계면활성제), C-0 (미생물) 순으로 높았고 경과시간 81 일에서는 각각 51%, 83%, 63%를 나타내었다. 미세토를 이용한 D군의 경우도 마찬가지의 양상을 보이고 있으나 C군 보다 더 낮은 TPH 제거율을 나타내었으며 미생물과 영양제를 투입한 경우가 가장 높았다. 미세토의 pH는 사질토의 pH 보다 다수 낮거나 유사한 수치를 나타내고 있고, C-0, C-1, C-2의 BTEX 제거율은 14일이 경과한 후 각각 99.8%, 99.4%, 96.0%이며 D-0, D-1, D-2의 제거율은 각각 99.5%, 99.2%, 96.3%로 미생물만 투입한 경우가 가장 높았다.
유류오염 토양으로부터 디젤에 대한 분해능이 있는 균주를 순수분리하였고, 이들 분리 균주의 액체 배양을통하여 균체 생육과 유화활성이 우수한 균주를 최종적으로 선별하였다. 생리,생화학적 특성 및 165 rDNA 염기서열 분석을 실시한 결과, Pseudomonas sp.로 분류 되었으며, Pseudomonas sp. GENECO 1으로 명명하였다. Bioscreen C를 이용하여 디젤 분해를 위한 배양 조건을 조사한 결과 최적 배양온도는 $30^{\circ}C$, 초기 pH는 7.0로 나타났다. Gas chromatography를 이용한 배양 시간별 잔류 디젤 성분분석 결과 96시간 이내에 1.0%의 디젤을 95%이상 분해하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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