Lee, Jiwon;Park, Eonyoung;Kim, Ga Hye;Kwon, Ilmin;Kim, Kyungjin
Experimental and Molecular Medicine
/
v.50
no.12
/
pp.6.1-6.10
/
2018
Bmal1 is one of the key molecules that controls the mammalian molecular clock. In humans, two isoforms of Bmal1 are generated by alternative RNA splicing. Unlike the extensively studied hBmal1b, the canonical form of Bmal1 in most species, the expression and/or function of another human-specific isoform, hBmal1a, are poorly understood. Due to the lack of the N-terminal nuclear localization signal (NLS), hBMAL1a does not enter the nucleus as hBMAL1b does. However, despite the lack of the NLS, hBMAL1a still dimerizes with either hCLOCK or hBMAL1b and thereby promotes cytoplasmic retention or protein degradation, respectively. Consequently, hBMAL1a interferes with hCLOCK:hBMAL1b-induced transcriptional activation and the circadian oscillation of Period2. Moreover, when the expression of endogenous hBmal1a is aborted by CRISPR/Cas9-mediated knockout, the rhythmic expression of hPer2 and hBmal1b is restored in cultured HeLa cells. Together, these results suggest a role for hBMAL1a as a negative regulator of the mammalian molecular clock.
Junction-mediating and regulatory protein (JMY) is a regulator of both transcription and actin filament assembly. The actin-regulatory activity of JMY is based on a cluster of three actin-binding Wiskott-Aldrich syndrome protein homology 2 (WH2) domains that nucleate actin filaments directly and promote nucleation of the Arp2/3 complex. In addition to these activities, we examined the activity of JMY generation in early embryo of mice carrying mutations in the JMY gene by CRISPR/Cas9 mediated genome engineering. We demonstrated that JMY protein shuttled expression between the cytoplasm and the nucleus. Knockout of exon 2, CA (central domain and Arp2/3-binding acidic domain) and NLS-2 (nuclear localization signal domain) on the JMY gene by CRISPR/Cas9 system was effective and markedly impeded embryonic development. Additionally, it impaired transcription and zygotic genome activation (ZGA)-related genes. These results suggest that JMY acts as a transcription factor, which is essential for the early embryonic development in mice.
Shin, Jong-Hwan;Gumilang, Adiyantara;Kim, Moon-Jong;Han, Joon-Hee;Kim, Kyoung Su
Mycobiology
/
v.47
no.4
/
pp.473-482
/
2019
Rice blast disease, caused by the ascomycete fungus Magnaporthe oryzae, is one of the most important diseases in rice production. PAS (period circadian protein, aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator protein, single-minded protein) domains are known to be involved in signal transduction pathways, but their functional roles have not been well studied in fungi. In this study, targeted gene deletion was carried out to investigate the functional roles of the PAS-containing gene MoPAS1 (MGG_02665) in M. oryzae. The deletion mutant ΔMopas1 exhibited easily wettable mycelia, reduced conidiation, and defects in appressorium formation and disease development compared to the wild type and complemented transformant. Exogenous cAMP restored appressorium formation in ΔMopas1, but the shape of the restored appressorium was irregular, indicating that MoPAS1 is involved in sensing the hydrophobic surface. To examine the expression and localization of MoPAS1 in M. oryzae during appressorium development and plant infection, we constructed a MoPAS1:GFP fusion construct. MoPAS1:GFP was observed in conidia and germ tubes at 0 and 2 h post-infection (hpi) on hydrophobic cover slips. By 8 hpi, most of the GFP signal was observed in the appressoria. During invasive growth in host cells, MoPAS1:GFP was found to be fully expressed in not only the appressoria but also invasive hyphae, suggesting that MoPAS may contribute to disease development in host cells. These results expand our knowledge of the roles of PAS-containing regulatory genes in the plant-pathogenic fungus M. oryzae.
The R3V6 peptide includes a hydrophilic arginine stretch and a hydrophobic valine stretch. In previous studies, the R3V6 peptide was evaluated as a gene carrier and was found to have low cytotoxicity. However, the transfection efficiency of R3V6 was lower than that of poly-L-lysine (PLL) in N2A neuroblastoma cells. In this study, the transfection efficiency of R3V6 was improved in combination with high mobility group box 1A domain (HMGA). HMGA is originated from the nuclear protein and has many positively-charged amino acids. Therefore, HMGA binds to DNA via charge interaction. In addition, HMGA has a nuclear localization signal peptide and may increase the delivery efficiency of DNA into the nucleus. The ternary complex with HMGA, R3V6, and DNA was prepared and evaluated as a gene carrier. First, the HMGA/DNA complex was prepared with a negative surface charge. Then, R3V6 was added to the complex to coat the negative charges of the HMGA/DNA complex, forming the ternary complex of HMGA, R3V6, and DNA. A physical characterization study showed that the ternary complex was more stable than the PLL/DNA complex. The HMGA/R3V6/DNA complex had a higher transfection efficiency than the PLL/DNA, HMGA/DNA, or R3V6/DNA complexes in N2A cells. Furthermore, the HMGA/R3V6/DNA complex was not toxic to cells. Therefore, the HMGA/R3V6/DNA complex may be a useful gene delivery carrier.
Purpose : To investigate the signal enhancement ratio by NOE effect on in vivo $^{31}P$ MRS in human heart muscle and liver. we also evaluated the enhancement ratios of different phosphorus metabolites, which are important in 31P MRS for each organ. Materials and Methods : Ten normal subjects (M:F = 8:2, age range = 24-32 yrs) were included for in vivo $^{31}P$ MRS measurements on a 1.5 T whole-body MRI/MRS system using $^1H-^{31}P$ dual tuned surface coil. Two-dimensional Chemical Shift Imaging (2D CSI) pulse sequence for $^{31}P$ MRS was employed in all $^{31}P$ MRS measurements. First, $^{31}P$ MRS performed without NOE effect and then the same 2D CSI data acquisitions were repeated with NOE effect. After postprocessing the MRS raw data in the time domain, the signal enhancements in percent were estimated from the major metabolites. Results : The calculated NOE enhancement for liver $^{31}P$ MRS were $\alpha-ATP\;(7\%),\;\beta-ATP\;(9\%),\;\gamma-ATP\;(17\%),\;Pi\;(1\%),\;PDE\;(19\%)$ and $PME\;(31\%)$. Because there is no creatine kinase activity in liver, PCr signal is absent. For cardiac $^{31}P$ MRS, whole body coil gave better scout images and thus better localization than surface coil. In $^{31}P$cardiac multi-voxel spectra, DPG signal increased from left to right according to the amount of blood included. The calculated enhancement for cardiac $^{31}P$ MRS were : $\alpha-ATP\;(12\%),\;\beta-ATP\;(19\%),\;\gamma-ATP\;(30\%),\;PCr\;(34\%),\;Pi\;(20\%),\;(PDE)\;(51\%),\;and\;DPG\;(72\%)$. Conclusion : Our results revealed that the NOE effect was more pronounced in heart muscle than in liver with different coupling to 1H spin system and thus different heteronuclear cross-relaxation.
Kim, Hye-Won;Kim, Chang-Guhn;Yoon, Kwon-Ha;Kim, Hyun-Jeong;Juhng Seon-Kwan;Roh, Byung-Suk;Yang, David J.;Kim, E.Edmund;Lee, Hyun-Chul
The Korean Journal of Nuclear Medicine
/
v.33
no.3
/
pp.289-297
/
1999
Purpose: Misonidazole is a radiosensitizer that binds in hypoxic cells. The purpose of this study was to find out the feasibility of I-131-Iodomisonidazole (IMISO) for imaging of tumor hypoxia. Materials and Methods: Tosyl precursor was dissolved in acetonitrile and I-131-NaI was added to synthesize IMISO. Balb/c mice inoculated with CT-26 adenocarcinoma were injected with IMISO. Mice were sacrificed at 1, 2, 4, 24 hr and % of injected dose per gram of tissue (%ID/g) was determined. For scintigraphy and MRI, mouse bearing CT-26 adenocarcinoma was administered with IMISO and imaging was performed 4 hr after. Then, mouse body was fixed and microtomized slice was placed on radiographic film for autoradiography Results: %ID/g of tumor was 1.64 (1h), 0.98 (2h), 0.85 (4h) and 0.20 (24h), respectively. At 24h, %ID/g of tumor was higher than that of all other tissues except thyroid. Tumor to muscle ratio increased with time and tumor to blood ratio also increased with time and reached 1.53 at 24 hr. On autoradiogram, tumor was well visualized as an increased activity in central hypoxic area of the tumor which corresponds to the area of high signal intensity on T2-weighted MR image. On scintigraphy, tumor uptake was visualized. Conclusion: This results suggest that IMISO may have a potential for tumor hypoxia imaging in mouse model. However, further study is needed to improve it's localization in tumor tissue and to achieve acceptable images of tumor hypoxia.
Kim, A-Hyeon;Lee, Soohyun;Jeon, Suwon;Kim, Goon-Tae;Lee, Eun Jig;Kim, Daham;Kim, Younggyu;Park, Tae-Sik
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.30
no.1
/
pp.109-117
/
2020
Cre recombinase is widely used to manipulate DNA sequences for both in vitro and in vivo research. Attachment of a trans-activator of transcription (TAT) sequence to Cre allows TAT-Cre to penetrate the cell membrane, and the addition of a nuclear localization signal (NLS) helps the enzyme to translocate into the nucleus. Since the yield of recombinant TAT-Cre is limited by formation of inclusion bodies, we hypothesized that the positively charged arginine-rich TAT sequence causes the inclusion body formation, whereas its neutralization by the addition of a negatively charged sequence improves solubility of the protein. To prove this, we neutralized the positively charged TAT sequence by proximally attaching a negatively charged poly-glutamate (E12) sequence. We found that the E12 tag improved the solubility and yield of E12-TAT-NLS-Cre (E12-TAT-Cre) compared with those of TAT-NLS-Cre (TAT-Cre) when expressed in E. coli. Furthermore, the growth of cells expressing E12-TAT-Cre was increased compared with that of the cells expressing TAT-Cre. Efficacy of the purified TAT-Cre was confirmed by a recombination test on a floxed plasmid in a cell-free system and 293 FT cells. Taken together, our results suggest that attachment of the E12 sequence to TAT-Cre improves its solubility during expression in E. coli (possibly by neutralizing the ionic-charge effects of the TAT sequence) and consequently increases the yield. This method can be applied to the production of transducible proteins for research and therapeutic purposes.
DNA double-strand break (DSB) is a serious treat for the cells including mutations, chromosome rearrangements, and even cell death if not repaired or misrepaired. Ku heterodimer regulatory DNA binding subunits (Ku70/Ku80) bound to double strand DNA breaks are able to interact with 470-kDa DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs), and the interaction is essential for DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) activity. The Ku80 mutants were designed to bind Ku70 but not DNA end binding activity and the peptides were treated in breast cancer cells for co-therapy strategy to see whether the targeted inhibition of DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) activity sensitized breast cancer cells to ionizing irradiation or chemotherapy drug to develop a treatment of breast tumors by targeting proteins involved in damage-signaling pathway and/or DNA repair. We designed domains of Ku80 mutants, 26 residues of amino acids (HN-26) as a control peptide or 38 (HNI-38) residues of amino acids which contain domains of the membrane-translocation hydrophobic signal sequence and the nuclear localization sequence, but HNI-38 has additional twelve residues of peptide inhibitor region. We observed that the synthesized peptide (HNI-38) prevented DNA-PKcs from binding to Ku70/Ku80, resulting in inactivation of DNA-PK complex activity in breast cancer cells (MDA-465 and MDA-468). Consequently, the peptide treated cells exhibited poor to no DNA repair, and became highly sensitive to irradiation or chemotherapy drugs. The growth of breast cancer cells was also inhibited. These results demonstrate the possibility of synthetic peptide to apply breast cancer therapy to induce apoptosis of cancer cells.
A liguleless mutant, which showed complete loss of lamina joint region at the junction between leaf blade and leaf sheath, was isolated from a Ds insertional mutants derived from the source cultivar, Dongjin. This mutant could not affect other developmental patterns like phyllotaxis. Southern blot analysis, using GUS as a probe, revealed that the liguleless mutant contained three Ds copies transposed in the rice genome. Among the four genomic sequences flanking the Ds, one was mapped in the intergenic region (31661640 - 31661759), and the other two predicted a protein kinase domain (12098980 - 12098667) as an original insertion site within a starter line used for massive production of Ds insertional mutant lines. Another predicted and inserted in first exon of liguleless 1 protein (OsLG1) that was mapped in coding region (LOC_Os04g56170) of chromosome 4. RT-PCR revealed that the OsLG1 gene was not expressed liguleless mutants. Structure analysis of OsLG1 protein revealed that it predicted transcription factor with a highly conserved SBP domain consisting of 79 amino acids that overlapped a nuclear localization signal (NLS). RT-PCR revealed that OsLG1 is mainly expressed in vegetative organs.
Dehydration Responsive Element Binding (DREB) gene is one of the essential transcription factors plants use for responding to stress conditions including salinity, drought, and cold stress. The purpose of this study was to isolate the full length and characterize the DREB gene from three different genotypes of sugarcane, wild, commercial cultivar, and interspecific hybrid sugarcane. The length of the gene, designated ScDREB was 789 bp, and coding for a putative polypeptide of 262 amino acid residues. Sequences of the gene were submitted to the GenBank database with accession numbers of KX280722.1, KX280721.1, and KX280719.1 for wild sugarcane, commercial cultivar (KPS94-13), and interspecific hybrid (Biotec2), respectively. In silico characterization indicated that the deduced polypeptide contains a putative nuclear localization signal (NLS) sequence, and a conserved AP2/ERF domain of the DREB family, at 82-140 amino residues. Based on multiple sequence alignment, sequences of the gene from the three sugarcane genotypes were classified in the DREB2 group. Gene expression analysis indicated, that ScDREB2 expression pattern in tested sugarcane was up-regulated by salt stress. When the plants were under 100 mM NaCl stress, relative expressions of the gene in leaves was higher than those in roots. In contrast, under 200 mM NaCl stress, relative expressions of the gene in roots was higher than those in leaves. This is the first report on cloning the full length and characterization, of ScDREB2 gene of sugarcane. Results indicate that ScDREB2 is highly responsive to salt stress.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.