• 한국산학기술학회논문지
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• 제12권8호
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• pp.3517-3522
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• 2011

수인성 병원성 미생물에 의한 공중목욕탕의 오염은 질병발생의 원인이 된다. 본 연구에서는 공중목욕탕내에 존재하는 수인성 병원성미생물들을 확인하고자 하였다. 서울지역내의 30 곳 공중목욕탕에서 욕조수 시료를 채수하여 진행하였다. 수인성 병원성미생물의 검출은 0.45 ${\mu}m$의 여과막을 이용하여 전통적인 배양방법으로 분리 및 동정하였다. 분자생물학적 기법을 사용하기 위해 미생물학적인 배양을 하지 않고 핵산을 추출하여 16S rRNA유전자를 표적으로 polymerase chain reaction-reverse blot hybridization (PCR-REBA)을 실시하였다. 미생물학적 배양방법에서는 지표세균인 Escherichia coli와 Shigella spp.가 검출되었으며, 분자생물학적 기법인 PCR-REBA을 수행한 결과 E. coli, Shigella spp., Salmonella spp., Pseudomonas spp., Mycobacterium spp. 등의 수인성 병원성미생물이 7곳에서 검출되었다. 본 연구결과를 토대로 공중목욕탕의 욕조수내에 수인성병원성미생물에 의한 감염을 줄이기 위해 적절한 위생관리과 E. coli를 포함한 유해미생물을 선정하여 지속적인 모니터링이 필요할 것으로 사료된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권1호
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• pp.83-92
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• 2009

Individual immunochromatographic assays (ICG) for ochratoxin A (OTA) and zearalenone (ZEA) were optimized and used in the development of a one-step simultaneous immunochromatographic assay (OS-ICG) for the rapid multianalysis of two mycotoxins in corn samples. The nitrocellulose membrane of the OS-ICG was treated with OTA-bovine serum albumin (BSA), ZEA-ovalbumin (OVA), and anti-mouse IgG in the OTA test, ZEA test, and control zones, respectively. Monoclonal antibody-gold conjugates (OTA3 MAb-gold and ZEA2C5 MAb-gold) were sprayed onto the conjugate pad. The visual detection limits were 2.5 and 5 ng/ml for OTA and ZEA, respectively, and the results were obtained within 15 min after starting the analysis. An efficient, simple, and rapid extraction method using 30% MeOH/PBS was established and validated by analyzing the corn samples spiked with OTA/ZEA mixtures (0/0, 5/10, 10/20, and $20/30\;{\mu}g/kg$). The cut-off values of the OS-ICG for the spiked corn were 5 and $10\;{\mu}g/kg$ for OTA and ZEA, respectively. Natural corn samples were analyzed by OS-ICG, direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay (DC-ELISA), and HPLC. Results of the OS-ICG were in good agreement with those obtained by DC-ELISA and HPLC. The developed OS-ICG offers a rapid, easy-to-use, and portable analytical system and can be used as a convenient qualitative tool for the on-site simultaneous determination of OTA and ZEA in cereals, food, and agricultural products in one analytical cycle.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권11호
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• pp.1855-1862
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• 2016

Cronobacter sakazakii (C. sakazakii) is a foodborne pathogen, posing a high risk of disease to infants and immunocompromised individuals. In order to develop a quick, easy, and sensitive assay for detecting C. sakazakii, a rabbit anti-C. sakazakii immunoglobulin G (IgG) was developed using sonicated cell protein from C. sakazakii. The developed anti-C. sakazakii (IgG) was of good quality and purity, as well as species-specific. The developed rabbit anti-C. sakazakii IgG was attached to the surface of a sulforhodamine B-encapsulated liposome to form an immunoliposome. A test strip was then prepared by coating goat anti-rabbit IgG onto the control line and rabbit anti-C. sakazakii IgG onto the test line, respectively, of a plastic-backed nitrocellulose membrane. A purple color signal both on the test line and the control line indicated the presence of C. sakazakii in the sample, whereas purple color only on the control line indicated the absence of C. sakazakii in the sample. This immunochromatographic strip assay could produce results in 15 min with a limit of detection of $10^7CFU/ml$ in C. sakazakii culture. The immunochromatographic strip assay also showed very good specificity without cross-reactivity with other tested Cronobacter species. Based on these results, the developed immunochromatographic strip assay is efficient for the detection of C. sakazakii and has high potential for on-site detection.

• 한국임상수의학회지
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• 제24권3호
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• pp.305-307
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• 2007

락토페린 결합단백질(Lactoferrin-binding proteins, LBP)은 젖소유방염 원인균인 Streptococcus uberis의 막단백질로서 그 특성에 관해서는 잘 규명되어 있지 않지만, 특히 최근에는 스트렙토코커스성 유방염의 독성인자로서 중요시되고 있다. 본 연구에서는 S. uberis 네 가지 균주를 대상으로 LBP를 보다 효율적으로 추출하기 위하여 mutanolysin 및 sodium dodecyl sulfate(SDS)를 이용한 두 가지 다른 추출 방법을 사용하였다. 추출된 세균단백질을 SDS-polyacrylamide gel electrophoreis(SDS-PAGE)로 전기영동을 하였고, 겔을 니트로셀룰로스 막으로 이동시켰다. Rabbit anti-bovine lactoferrin 항체와 HRP-conjugated donkey anti-rabbit IgG 항체를 사용하여 LBP를 검출하였다. 이러한 웨스턴 블롯팅 분석을 통해 SDS 추출법이 mutanolysin 추출법에 비해 보다 효율적으로 110 kDa 및 112 kDa의 LBP를 추출할 수 있음을 증명하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제49권3호
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• pp.207-212
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• 2011

Rapid serodiagnostic methods for Toxoplasma gondii infection in cats are urgently needed for effective control of transmission routes toward human infections. In this work, 4 recombinant T. gondii antigens (SAG1, SAG2, GRA3, and GRA6) were produced and tested for the development of rapid diagnostic test (RDT). The proteins were expressed in Escherichia coli, affinity-purified, and applied onto the nitrocellulose membrane of the test strip. The recombinant SAG1 (rSAG1) showed the strongest antigenic activity and highest specificity among them. We also performed clinical evaluation of the rSAG1-loaded RDT in 182 cat sera (55 household and 127 stray cats). The kit showed 0.88 of kappa value comparing with a commercialized ELISA kit, which indicated a significant correlation between rSAG1-loaded RDT and the ELISA kit. The overall sensitivity and specificity of the RDT were 100% (23/23) and 99.4% (158/159), respectively. The rSAG1-loaded RDT is rapid, easy to use, and highly accurate. Thus, it would be a suitable diagnostic tool for rapid detection of antibodies in T. gondii-infected cats under field conditions.

• 공업화학
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• 제22권5호
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• pp.522-525
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• 2011

본 연구에서는, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)와 면역크로마토그래픽 기법을 결합하여 Staphylococcus aureus 검출을 위한 면역스트립을 제작하였다. 면역스트립은 4개의 서로 다른 기능을 가진 멤브레인을 이용하여 만들어졌다. 니트로셀룰로오스 멤브레인은 항체와의 결합력이 높기 때문에, 포획항체를 고정화하였고, 다공성 멤브레인들을 통하여 모세관 현상으로 인해 시료흐름을 유도하였다. 효소반응에 의해 생성된 발색신호는 디지털카메라와 자체 제작된 소프트웨어를 이용하여 정성, 정량분석 하였다. 최적의 분석조건 하에서 30 min 이내에 $2.7{\times}10^4{\sim}2.7{\times}10^7CFU/mL$ 범위의 S. aureus 농도를 측정할 수 있었다.

• 핵의학기술
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• 제23권1호
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• pp.64-68
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• 2019

기존에 Millex GS 멸균 필터를 사용하여 방사성 의약품 N-13 암모니아 주사액 제조 시 많은 양의 방사성 의약품이 멸균 필터에 흡착되어 있었다. 이에 Satorious의 Minisart 멸균 필터를 사용하여 흡착률의 차이를 확인하고 합성 수율을 증가시키고자 하였다. 실험 대상은 Millex GS 필터와 Satorious Minisart 필터를 대상으로 하였으며 제조된 N-13 암모니아를 각각의 멸균 필터에 통과시킨 후 선량계를 이용하여 흡착률을 구하였다(n=10). 그리고 품질 관리 시험을 시행하여 본원 기준에 적합한지 확인하였다. 실험 결과 Millex GS와 Sartorious Minisart 필터에 각각 $71.0{\pm}17.6%$와 $19.1{\pm}3.2%$ 흡착되었다. 필터를 제거한 product vial에는 Millex GS와 Sartorious 각각 $29.0{\pm}17.6%$와 $80.9{\pm}3.2%$ 여과되었다. 여과된 암모니아 주사액의 양은 GS 필터보다 Minisart 필터를 사용할 때 약 2.8배 더 많이 획득할 수 있었다. 각 멸균 필터를 통과한 N-13 암모니아 주사액의 방사화학적 이물, 화학적 이물, 이 핵종, pH, 엔도톡신, 무균 시험 등 품질 관리 시험 결과 본원 기준에 적합하였다. Millex GS 필터의 얇은 막은 mixed cellulous easter(MCE)로써 acetic acid, sulfic acid, anhydride에 추가로 Nitrocellulose가 약 80%의 비중을 차지하고 있는 필터이다. 때문에 Nitrocellulose가 포함되지 않은 CA계열인 Sartorious Minisart 필터보다 여과할 수 있는 성능은 Millex GS가 우수하나, 품질시험의 평가상 Satorious Minisart 필터를 사용하여도 문제가 없을 것이다. 따라서 N-13 암모니아 주사액 제조 시, Satorious Minisart 필터를 사용함으로써 필터 흡착으로 인한 손실을 최소화하고, 비용도 절감 할 수 있으며, 보다 안정적으로 N-13 암모니아 주사액을 제조 할 수 있을 것으로 생각한다.

• Archives of Plastic Surgery
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• 제34권6호
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• pp.679-684
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• 2007

Purpose: DMH(1,2-dimethylhydrazine) has been known to induce vascular neoplasm such as malignant endothelioma in animal experiment, through induction of abnormal proliferation of HUVECs. In our previous studies, 11 types of PKC isoenzymes were determined by RT-PCR and the expression of $PKC{\alpha}$, and ${\mu}$ was more prominent than other PKC isoenzymes in the DMH-treated group. However, this result was not based on objective assessment. In this study, we further evaluated the role of $PKC{\alpha}$ on the DMH-induced abnormal proliferation of HUVECs by two different methods to identify its presence with high relevance in objective view. $PKC{\mu}$ will be investigated in further study. Methods: The study was conducted with the cultured HUVECs group(control) and the $0.75{\times}10^{-9}M$ DMH-treated group. After processing protein extraction in 0 and 24 hour, extracted protein was treated of quantitative test through BCA protein assay. In the western blot analysis, electrophoresis was performed in the order of gel preparation, sample preparation, and gel running. Electrotransfer to nitrocellulose membrane and reaction with antibody were done. Detection of $PKC{\alpha}$ was achieved through "Gel Image Analysis System". In the fluorescence immunocytochemical analysis, the grading of radiance of the intracellular $PKC{\alpha}$ particles was detected with confocal microscope after treating with primary and fluorescent secondary antibody in 0 and 24 hours. Results: The Western blot analysis showed increased $PKC{\alpha}$ expression from the specimen obtained in 24 hour of the DMH treatment group when compared to those in control group. Under confocal fluorescence microscope, the emitting radiance in the DMH treated group was brighter at 24 hours as well. Conclusion: We believe that $PKC{\alpha}$ plays a role in DMH-induced abnormal proliferation of the vascular endothelium, which may provide insights in understanding the vascular neoplasm.

• 대한소아치과학회지
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• 제29권3호
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• pp.354-361
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• 2002

본 연구는 어린이의 치아우식증을 야기하는 주된 원인균인 Streptococcus mutans에 대한 타액내 Immunoglobulin A의 양을 좀 더 쉽고 빠르며 정확하게 분석하는 방법을 개발하는데 일차적 목적을 두었고 이 방법을 사용하여 우식 경험군과 비경험군 간의 타액내 IgA 역가에 차이가 있는지 관찰하였다. 본 연구에서 사용한 immune-slot blot method에서 항체 역가 측정의 기본 개념은 Streptococcus mutans의 단백질을 1/2씩 희석하여 nitrocellulose membrane에 결합시킨 후 1/100으로 희석된 타액에 의해 검출될 수 없는 최대의 단백질 희석배수를 구하는 것이다. 연구 결과 우식 경험군과 비경험군의 희석배수 평균치는 우식 비경험군이 $2^{6.278{\pm}2.260}$, 우식 경험군이 $2^{5.730{\pm}0.499}$로 IgA의 농도가 우식 비경험군에서 약간 높게 나타났다. 그러나 우식 비경험군의 경우 표준편차가 매우 높아 양 군간에 유의한 차이는 없었다.

• 공업화학
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• 제30권4호
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• pp.429-434
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• 2019

본 논문에서는 수용성의 CdSe/ZnS 양자점을 합성하고 이에 항체기능성을 도입하여 lateral flow immunoassay (LFIA) 플랫폼에 융합하여 폐암 질병진단에 활용 가능한 단백질 바이오마커[예: 인간 혈청 아밀로이드 A-1 (hSAA1)]의 농도 분석에 적용하고자 한다. 면역분석법 센서 스트립은 니트로셀룰로오즈 막에 테스트라인과 대조라인으로 각각 항hSAA1 단일클론항체(10G1)(anti-hSAA1)와 항chicken IgY (anti-chicken IgY)를 스프레이하여 제작하였다. 이와 함께, 유기상에서 합성된 CdSe/ZnS 양자점은 카르복실기로 변형된 알케인티올기를 이용한 리간드 교환방법으로 수용성으로 전환하였으며, 이에 타겟 단백질인 hSAA1에 특이적으로 결합 가능한 항체인 항hSAA1 단일클론항체(14F8)로 컨쥬게이션하여 형광검출용 입자[QDs-anti hSAA1 (14F8)]로 사용하였다. 제작된 LFIA 스트립 위에 순차적으로 다른 농도의 hSAA1과 QDs-anti hSAA1 (14F8)의 복합체를 흘려주면, 테스트라인에 anti hSAA1 (10G1)/hSAA1/QDs-anti hSAA1 (14F8) 샌드위치 복합체가 형성되어 양자점에 의한 발광신호가 검출됨을 측정하였다. 최적화된 측방흐름이 가능한 완충용액 조건에서 100 nM 농도의 hSAA1 단백질의 유무를 5 min 안에 눈으로 확인 가능하였다.