Effects of temperature, pH, and salt concentration on the preservation of the infective juvenile entolopathogenic nematodes, Steinernema carpocapsae, were analyzed. The effects of acclimation to sublethal low temperature and glycerol concentrations on rapid cold hardening of the nematodes were also evaluated to set up the conditions for their cryopreservation. All tested environmental factors could change the storage effectiveness of the nematodes. These analyses indicated that the optinal storage condition for the nematodes consisted of $15^{\circ}C$, pH 8.5, and 0.5-1.0% salt concentration. The nematodes showed a rapid could hardening in response to $5^{\circ}C$ for 2h. Glycerol induced the nematodes to increase the cold hardiness. Its high concentration over 10%, however, gave a harmful effect on the nematode survival.
Yoo, Sun-Kyun;Brown, Ian;Cohen, Nancy;Gaugler, Randy
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.11
no.4
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pp.644-648
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2001
The biological control potential of entomopathogenic nematodes (EPN) can be enhanced by improved culture efficiency. Optimization of the media is a key factor for improving in vitro mass production of entomopathogenic nematodes. This study reports the effect of medium concentration. The medium is a combination of carbohydrates, lipids, proteins, sats, and growth factors, on the growth of Heterorhabditis bacteriophora and its symbiotic bacterium Photorhabdus liminescens. The overall optimal medium concentration for nematode recovery, hermaphrodite size, bacterial mass, infective juveniles (IJs) yield, and doubling time was 84 g/l. At this concentration rate, the doubling time of IJs production and the biomass of symbiotic bacteria was 1.6 days and 12.8 g/l, respectively. The maximum yield of $2.4{\times}{10^5}IJs/ml$ was attained within a one-generation cycle (eight days). The yield coefficient was $2.8{\times}{10^6}$ IJs/g medium, and the maximum productivity was $3.1{\times}{10^7}$ IJs per day. Medium concentration affected two independent factors, recovery and hermaphrodite size, which in turn influenced the final yield.
The purpose of this study was to control root-knot nematode, Meloidogyne incognita on pumpkin seedling with 10%, 20% coffee ground compost and 1% plant velvet bean powder (plain skin bean, leopard skin bean, hole plant, bean pod). Among the root-knot nematode insecticide treatments, the velvet bean plant powder was the highest mortality rate with 83.2% in greenhouse condition. In addition, the root-knot nematode second juvenile mortality significantly increased with the lapse of processing time for each concentration of leopard skin velvet bean extract in vivo. After 24 hours, the mortality rate of root-knot nematode showed the highest at 1.2% and 2.4% of leopard skin velvet bean extract. The growth promoting effect of seedlings pumpkin, 20% of coffee ground compost treatments inhibited the growth of pumpkin seedlings and 1% the tiger pattern velvet beans powder was the most to promote the growth of pumpkin seedlings. However, the results indicated that the organic materials of velvet beans and coffee ground compost are expected to be able to effectively control the root-knot nematode and further studies will be needed for the concentration and application methods.
Ecological studies on entomopathogenic nematodes are required to increase control efficacy against target insect pests and to obtain basic information for mass production. Thus, effect of temperature and nematode concentration on infectivity and reproduction of Steinernema carpocapsae Pocheon and that of exposure time and soil depth on infectivity were examined using Galleria mellonella larvae. Infectivity and reproduction were examined at five temperatures, 13, 18, 24, 30 and 35$^{\circ}C$ with seven concentrations, 0, 5, 10, 20, 40, 80 and 160 infective juveniles (IJs)/larva. Temperature and nematode concentration influenced infectivity and reproduction of S. carpocapsae Pocheon. Although G. mellonella larvae were killed by S. carpocapsae Pocheon at all given temperatures and nematode concentrations, mortality was higher at 24$^{\circ}C$ than other temperatures. Lethal time of G. mellonella by S. carpocapsae Pocheon was shorter with increasing temperature and nematode concentrations. S. carpocapsae Pocheon was not established in G. mellonella at 13 and $35^{\circ}C$. Time for the first emergence from G. mellonella cadaver was longer $18^{\circ}C$ (about 20 days) than 24 and $30^{\circ}C$ (about 5 days). The highest number of progenies was obtained at $24^{\circ}C$ with 80IJs/1arva, i.e., $18.8$\times$10^4$IJs were produced from a larva. In the exposure time assay, G. mellonella death was recorded in 10 minutes when 300 IJs were inoculated per larva. When S. carpocapsae Pocheon was inoculated at the rate of $10^{9}$ IJs/ha to G. mellonella at the depth of 0, 2, 5 and 10 cm of sand columns, 100% mortality and similar sex ratio were observed but number of established IJs in cadaver was decreased with deepening the soil depth. The results indicated that optimum temperature for infectivity and reproduction of S. carpocapsae Pocheon was $24^{\circ}C$ In addition, S. carpocapsae Pocheon was effective to target insects within 5 cm from the soil surface.
Park, Young-Jin;Kim, Mi-Kyung;Kim, Jin;Yang, Kyung-Hyung;Kim, Yong-Gyun
Korean journal of applied entomology
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v.40
no.3
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pp.259-264
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2001
Toxicological studies of two potential biological control agents, the entomopathogenic nematode (Steinernema carpocapsae) and the symbiotic bacteria (Xenorhabdus nematophilus) were conducted against two beneficial insects and one mammal species. Two microbial agents varied in their toxicities between two insect species: an ant, Pristomyrmex pungens, and silkworm, Bombyx mori. In oral toxicity test, the symbiotic bacteria resulted in significant lethal [half lethal concentration of $1.4$\times$10^3$colony-forming units (cfu)/ml] on the ants, while they gave little lethal effect (half lethal concentration of more than $10^{8}$ cfu/ml) on the silkworms. The nematodes, however, gave significant lethal effect [half lethal concentration of 4 infected juveniles (IJs)/ml] on the silkworms, while they did little lethal effect (half lethal concentration of 150,000 IJs/ml) on the ants in topical assays. Both the nematodes and the bacteria did not give lethal effect to the albino rats, Rattus norvegicus, when they were fed orally into the rats. Also, any of these microbial agents were not detected in the internal organs of the treated rats.
The present study described the isolation of 2-methylbutyric acid (2-MBA) produced from Bacillus pumilus L1, to subsequently investigate its nematicidal activity for the control of the root-knot nematode. The results showed that 2-MBA could be purified by chromatographic techniques and was identified using nuclear magnetic resonance and liquid chromatography-mass spectrometry. Crude extract and partially purified compounds had a significant effect on the inhibition of egg hatchability and second-stage juvenile (J2) mortality. A dose-dependent effect of 2-MBA was observed for J2 mortality and egg hatchability. Egg hatchability was 69.2%, 59.9%, 32.7%, and 0.0% at 125, 250, 500, and $1000{\mu}g\;mL^{-1}$ of 2-MBA after 4 d of incubation, respectively. Meanwhile, J2 mortality was in the range of 24.4%-100.0% after 2 d of incubation, depending on the concentrations of 2-MBA used. A pot experiment also demonstrated that treatment of B. pumilus L1 culture caused a significant reduction in the number of galls, egg masses, and J2 population than that of the tap water (TW) control. However, as the B. pumilus L1 culture concentration was decreased, the efficacy of nematode control by treatment of B. pumilus L1 culture was reduced compared to that of TW. B. pumilus L1 inoculation at different concentrations also promoted cucumber plant growth. Therefore, our study demonstrated the potential of 2-MBA from B. pumilus L1 as a biocontrol agent against the root-knot nematode and a plant growth promoter for cucumber plants.
Pathogenicity and multiplication of entomopathogenic nematode, Steinernema carpocapsae Weiser, ere analyzed in two insect hosts, Spodoptera exiga (Hubner) and Sp. litura(Fabricius). The estimated ${LC}^{50}s$(lethal concentration of the infective juveniles to kill 50% of the host insect population) were not different between tow insect species or among their developmental stages on the filter paper assay, thought the actual numbers of the infected nematodes were varied among them. The significant variation, however occurred in nematode multiplication between tow inset hosts. Temperature also gave sosignificatn effect on nematode multiplication rate that it took 6 days after infection at $25^{\circ}C$, but did 12 days at $20^{\circ}C$ to show the maximal nematode population peak($\approx$500,000 infective juveniles(IJ) in a 5th instar larva of Sp. litura and $\approx$-100,000 IJ in a 5th instar larva of Sp. exigua).
Pine wilt disease (PWD) caused by pine wood nematode (PWN), Bursaphelenchus xylophilus, which is transmitted by Monochamus alternatus and M. saltuarius, is a serious threat to coniferous forests in the Northern Hemisphere, including Korea. The efficacy of abamectin and emamectin benzoate for preventing the PWD in the field and its effect on the vectors Monochamus alternatus and M. saltuarius (Coleoptera: Cerambycidae) were evaluated. An experimental plot was delimited, of which consists of Japanese red pine (Pinus densiflora) forest in South Korea, and trunk injection trials were made with abamectin and emamectin benzoate. Branches of each tree were collected, and are subsequently subjected to the analysis of residues for both nematicides. Results obtained in this study showed that abamectin and emamectin benzoate showed over 90% mortality at the recommended concentration after 6 days and 8 days, respectively. Consequently, it was found that both insecticides have a higher effect on the susceptibility and persistence of two vectors of PWD, M. alternatus and M. saltuarius feeding on branches of the trees, and its application by trunk injection is confirmed as an option for pine wilt disease management programs in Korea.
Application of fertilizers such as urea, diammonium phosphate (DAP) and muriate of potash in soil adversely affected the spore germination of Arthrobotrys dactyloides. Amendment of soil with urea at the concentrations of 1.0%, 0.5% and 0.1 % completely inhibited spore germination and direct trap formation on the conidium, whereas muriate of potash delayed and reduced the spore germination even at the lowest concentration. DAP also inhibited spore germination at 1.0% concentration, while at lower concentration the percentage of spore germination was reduced. Application of neem cake at the concentration of 0.5% also inhibited spore germination after 24 h of amendment. The inhibitory effect of neem cake was reduced after 15 days of amendment, while after 30 days after amendment the inhibitory effect was completely lost and the spore germinated by direct trap as in unamended soil. Nematodes were not attracted to ungerminated spores after 24 h of amendment. After 15 days of amendment nematodes were attracted to agar blocks containing fewer germinated spores after 24 h of incubation but after 48 h of incubation large number of nematodes were attracted and trapped by the germinated spores with direct traps. After 30 days of amendment, larger number of nematodes were attracted and trapped by direct traps.
Pine wilt disease (PWD) caused by pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, has become the most serious threat to pine trees in Korea. This study was subjected to investigate effective biological control agent against PWD. To select nematocidal bacteria against PWD, Bacillus licheniformis MH48 was selected among five bacteria due to its high nematocidal potential. B. licheniformis MH48 was tested for cell growth and protease activity to evaluate its nematicidal potential. In the B. licheniformis MH48, cell numbers were highest three days after incubation, while protease activity was highest after seven days. In the effect of different concentrations of B. licheniformis MH48 culture broth against B. xylophilus, 20% concentration of culture broth showed approximately 80% of pine wood nematode mortality compared to the control. Especially, pine wood nematode's cuticle layers were degraded two days after treatment of B. licheniformis MH48 culture broth. The present study suggests that B. licheniformis MH48 can be one of the potential biocontrol candidates against pine wood nematode due to its ability to produce protease.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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