300 extracts derived from 100 plants were tested for their potential to induce HL-60 cell differentiation using NBT assay and NSE/SE staining methods. Morphological changes from suspended to adherent state of the cells were also observed by microscopic examination. In result, 55 extracts induced cell differentiation into monocyte/macrophage lineage in the NBT and the NSE assay.
널리 이용되는 검량방법중의 하나인 NBT 환원방법은 계면활성제인 Triton X-100의 존재하에서 그 측정감도가 크게 증폭된다. 본 연구는 이러한 Triton X-100 효과의 물리화학적 본질을 이해하기 위하여 수행하였으며, 이를 위하여 이 계면활성제가 NBT의 환원생성물인 불용성 formazan 콜로이드를 안정화시키는 효과와 수용액 중에서 동시에 진행되는 두 반응 $(NBT-O^-_{\.{^.2}}$ 산화환원 반응과 $O^-_{\.{^.2}}$의 disproportionation반응) 간의 경쟁관계에 미치는 속도론적 영향에 촛점을 맞추었다. Triton X-100 유무 조건하에서 $KO_2-DMSO$ 용액과 $K-PO_4$ 완충용액에 녹인 여러가지 농도의 NBT 용액을 빠르게 혼합하고, 이때 생성된 formazan과 $H_2O_2$를 각각 정량한 결과, 이 계면활성제는 formazan 콜로이드를 안정화 시킴으로써 결과적으로 formazan의 흡수도를 상승시키는 효과를 보일뿐만 아니라 $O^-_{\.{^.2}}$의 자발적인 dismutation을 억제하는 결과를 초래함을 확인하였다. 또한 종합적인 Triton X-100의 효과에 대한 콜로이드 안정화 효과와 속도론적 효과의 상대적 기여도는 실험조건에 따라 바뀌는데 특히 반응계의 $NBT/O^-_{\.{^.2}}$ 농도비율에 크게 좌우되는 것으로 밝혀졌다.
본 연구에서는 형광등 빛 조사 하에 각종 감광제와 아미노산의 조합에 의한 NBT의 환원 특성을 조사하였다. 기존 SOD 활성 측정에 이용된 Rb-Met 반응계는 증류수나 Tris보다는 PBS 용매 상에서 가장 우수한 효과를 나타냈다. 빛 조사 하에 Rb에 의한 NBT 환원을 위해서는 Met과 His 등의 아미노산이 필요하며, 감광제로서는 isoalloxazine 계열의 Rb와 thiazine 계열의 MB가 효과적인 환원 반응을 유도했다. 하지만 각종 감광제나 아미노산의 조합, 그리고 반응 용매에 따라 NBT 환원정도가 상이하며, 특히 Rb-Met in PBS와 MB-His in Tris 반응계가 가장 큰 반응을 유도하였다. Rb에 의해 유도된 NBT 환원반응은 SOD 및 gallic acid에 의해 효과적으로 저해되었으나, Tris 상에서 MB-His에 의한 NBT 환원은 SOD 및 gallic acid에 의한 저해효과가 미미하여 Rb와는 다른 기작에 의해 NBT 환원이 유도되는 것으로 보인다. 본 결과는 감광제와 아미노산에 따라 빛 조사 하에 다양한 상호작용이 발생하며, NBT 환원을 유도하는데 superoxide anion 뿐만 아니라 다른 요인도 관여할 수 있음을 시사한다.
Three phenolic compounds, rosmarinic acid (1), methyl rosmarinate (2), ethyl rosmarinate (3), and two flavonoids, luteolin (4), luteolin-7-O-$\beta$-D-glucuronide methyl ester (5) were isolated from the aerial part of Lycopus lucidus (Labiatae). Their structures were determined by chemical and spectral analysis. Compounds 1-5 exhibited potent antioxidative activity on the NBT superoxide scavenging assay. The $IC_{50}$ values for compounds 1-5 were 2.59, 1.42, 0.78, 2.83, and 3.05 $\mu\textrm{g}$/mL respectively. In addition, five compounds were isolated from this plant for the first time.
음나무의 새로운 용도 개발을 위하여 다양한 항산화 측정법을 이용하여 생리활성을 측정하였다. 즉, 음나무 수피 및 근피의 온수 추출물과 메탄올 추출물에 대한 세포 내 활성산소 농도를 측정하여 세포수준에서의 산화 스트레스 억제효과를 측정하였으며, DPPH법 및 NBT법을 이용하여 각 추출물의 화학적인 측면에서의 항산화력을 측정하여 이들 간의 차이를 비교하였다. NR assay와 MTT assay에 의해 측정한 세포독성 실험결과, 음나무 근피의 메탄올 추출물의 세포독성이 가장 강했으며, 50%의 세포 생존율을 나타내는 NR50과 MTT50은 각각 0.0018%와 0.0029%였다. 산화 스트레스 억제효과는 근피의 불용성 온수 추출물이 15분 처리에서 57.9%로 가장 우수하였다. DPPH법과 NBT법을 이용한 음나무 추출물에 대한 항산화 활성 측정결과, 각각 수피의 메탄올 추출물이 96% (0.1% 농도)이고, 수피의 불용성 온수 추출물이 95% (0.5% 농도)를 나타내어 우수한 항산화 활성을 나타내었다.
To investigate the possibility of development as a whitening agent using bamboo extracts (Phyllostachys nigra var. henonis), we measured DPPH assay, NBT/XO assay, intracellular ROS scavenging assay, tyrosinase assay and MSH-induced melanin production in B-16 cells. Bamboo extracts had dose-dependently anti-oxidant activity in DPPH, NBT/XO and intracellular ROS assay. Bamboo extracts appear to inhibit xanthine oxidase directly. Bamboo extracts inhibited not only purified tyrosinase activity but also inhibited tyrosinase activity and melanin production in B16 melanoma cells stimulated by $1{\mu}M\;{\alpha}$-MSH. Anti-oxidant activity and cytotoxicity of ethyl acetate fraction was more potent than those of water fraction, whereas whitening effect of water fraction was stronger than ethyl acetate fraction. Therefore, these results suggest that water fraction of bamboo extracts may be useful for the development as whitening agents reducing cytotoxicity.
To investigate the possibility of development as a whitening agent using arctigenin, we measured DPPH assay, NBT/XO assay, intracellular ROS scavenging assay, tyrosinase assay and MSH-induced melanin production in B16 melanoma cells. Arctigenin dose-dependently had anti-oxidant activity in DPPH, NBT/XO and intracellular ROS assay. Although arctigenin did not inhibit purified tyrosinase activity, it dose-dependently inhibited tyrosinase activity and melanin production in B16 melanoma cells stimulated by $1{\mu}M$${\alpha}$-MSH. In particular, arctigenin at a concentration $100{\mu}M$ inhibited ${\alpha}$-MSH-stimulated tyrosinase activity and melanin production by $50.9{\pm}2.9%$ and $69.0{\pm}6.5%$ respectively. And typical tyrosinase inhibitor, arbutin, inhibited $57.7{\pm}2.9%$ and $65.1{\pm}5.0%$ respectively. Such an similar inhibitory effect of arctigenin and arbutin in B16 melanoma cells may be due to the inhibition of MSH signal pathway rather than the direct inhibition of tyrosinase. Therefore, these results suggest that arctigenin may be useful for the development as whitening agents.
A new compound, 3-acetoxylanosta-7,9(11),24-triene-26-al (3), and seven known compounds (1 - 2 and 4 - 8) were isolated from Ganoderma tropicum (Jung.) Bres. collected in Tay Nguyen, Vietnam. The structures of these compounds were determined by one- and two-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy, electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS), and high-resolution ESI-MS, and by comparison with literature data. All of the isolated compounds were tested for nitroblue tetrazolium (NBT) reduction activity in Saccharomyces cerevisiae-stimulated RAW 246.7 cells. Among them, compounds 2 - 4 and 6 - 8 enhanced the NBT reduction in a dose-dependent manner.
Four flavonoids (1-4), a phenylethyl glycoside (5), and a phenylpropanoid glycoside (6) were isolated from the flowers of Buddleia officinalis (Loganiaceae). Their structures were determined by chemical and spectral analysis. Among the isolated compounds, luteolin (1) and acteoside (6) exhibited the most potent antioxidative activity on the NBT superoxide scavenging assay. In addition, compounds 1-6 revealed weak antifungal activity, and no hemolytic activity.
A new phenolic amide, dihydro-N-caffeoyltyramine (1) was isolated from the root bark of Lycium chinense Miller, along with known compounds, trans-N-caffeoyltyramine (2), cis-N-caffeoyltyramine (3), and lyoniresinol $3{\alpha}-Ο-{\beta}-D-glucopyranoside$ (4). Their structures were determined by spectroscopic analysis. A NBT superoxide scavenging assay revealed that three phenolic amides showed potent antioxidative activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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