Lactic acid bacteria (LAB) are commonly used as probiotics; however, not all LAB strains have the same beneficial effects. To successfully use LAB as probiotics in canines, LAB species should originate from the canine intestinal tract as they display host specificity. The objective of this study was to investigate the phenotypic and genomic traits of potential probiotic LAB isolated from canine fecal samples. Twenty LAB samples were evaluated for their potential probiotic characteristics including resistance to low pH, bile salts, hydrophobicity, auto-aggregation, co-aggregation, adhesion to epithelia or mucosa, and production of inhibitory compounds. Additionally, we evaluated their safety and other beneficial effects on canine health, such as DPPH free radical scavenging, and β-galactosidase. Four strains demonstrated potential probiotic characteristics and were selected: Enterococcus hirae Pom4, Limosilactobacillus fermentum Pom5, Pediococcus pentosaceus Chi8, and Ligilactobacillus animalis FB2. Safety evaluations showed that all strains lacked hemolytic activity, could not produce biogenic amines, and did not carry any pathogenic genes. In addition, L. fermentum Pom5 and P. pentosaceus Chi8 displayed susceptibility to all antibiotics and concordant with the absence of antibiotic resistance genes. Based on their phenotypic and genomic characteristics, L. fermentum Pom5 and P. pentosaceus Chi8 were identified as potential probiotic candidates for canines.
An 8-week feeding trial was conducted to investigate the effects of dietary supplementation with probiotics as a feed additive for Juvenile olive flounder (Paralichthys olivaceus). Three experimental diets supplemented with Bacillus polyfermenticus (BP), Bacillus licheniformis (BL), or Bacillus polyfermenticus plus Saccharomyces cerevisiae, (BP+SC) at $1.0{\times}10^7CFU/kg$ diet on a dry-matter basis were prepared. The basal diet was used as a control. After the 8-week feeding trial, the respiratory burst activity (NBT assay) of fish fed the BP + SC diet was significantly higher than that of fish fed the control diet. Fish fed the BP, BL and BP + SC diets had significantly lower cumulative mortality than did fish fed the control diet after the third day of the challenge test (P<0.05). However, there were no significant differences among fish fed the experimental diets in weight gain, feed efficiency, protein efficiency ratio, hematosomatic index, condition factor, survival rate, or Iysozyme activity. Results could suggest that dietary B. polyfermenticus, B. licheniformis, and B. polyfermenticus +S. cerevisiae enhance nonspecific immunity and disease resistance in juvenile olive flounder.
강한 천연 생리활성물질인 폴리페놀과 탄닌을 다량 함유한 석류를 노화방지제 및 기능성화장품의 화장품 원료로 이용할 수 있는 가능성을 제시하고자, 과즙과 과피 및 종자유로 나누어 분리추출한 후, DPPH radical과 superoxide의 소거작용, 세포내 $H_2O_2$와 hydroperoxide 및 superoxide 생성 억제작용에 미치는 영향에 관하여 실험하여 항산화 작용을 비교 평가하였다. 석류과피 메탄올 추출액은 전반적으로 가장 유의성 있는 항산화 작용을 보였다. 자체적인 항산화 작용뿐만 아니라 세포내에서 free radical이 생성되는 것을 억제하는 작용도 있는 것으로 여겨지며, 석류과즙 농축액은 free radical을 소거하는 항산화 작용이 있으며, 또한 석류 종자유는 강한 hydroperoxide 생성 억제효과를 나타내어, 특히 hydroxy기를 가진 readical의 생성을 억제하는데 효과가 있는 것으로 사료된다. 이상과 같은 결과로 보아, 석류의 과즙보다는 과피의 추출물이 항산화 작용이 더 뛰어난 것을 알 수 있었으므로 피부미용에 관련된 건강보조식품 개발시 과피성분을 함유한 추출물을 원료로 사용하는 것이 효과적이라고 사료되며, 특히 피부 주름 방지제 등과 같은 기능성 화장품을 개발하고자 할 때는 석류 종자유를 화장품 원료로 하여 개발하는 것이 더 효과적이라고 사료된다.
본 연구는 양식 넙치 Paralichthys olivaceus 사료 내 생균제 첨가가 넙치의 성장, 면역반응 및 병저항성에 미치는 영향을 평가하였다. 실험사료는 넙치용 배합사료(조단백질 52%, 조지방 11%, 조섬유 3%, 조회분 14%, 인 2.7%, 칼슘 1.5%, Suhyup Co., Korea)에 Bacillus sp. IS-2를 첨가하여 $10^3$, $10^5$, $10^7$ CFU/kg의 실험사료를 제작하였다. 2주간의 예비사육 후, 평균무게 $210{\pm}13g$인 실험어를 1,000 L 원형수조에 실험구 당 70마리씩 무작위로 배치하여 실험사료를 1일 2회 어체 중의 2%씩 12주 동안 공급하였다. 성장도 조사 결과 모든 실험구에서는 일반사료를 투여한 대조구에 비해 높은 성장률을 나타내었으며 $10^5$ CFU/kg 실험구에서는 대조구에 비해 약 13% 정도 높은 성장률을 나타내었다. 혈액분석 결과에는 glucose를 제외한 GOT, GPT, 단백질, 총콜레스테롤 등에서 실험구간 유의적인 차이를 나타내지 않아 생균제로 인한 간독성이나 어체 내 문제가 발생하지 않은 것으로 사료된다. Glucose인 경우 실험 종료 시점에서 증가되는 변화를 확인 할 수 있었는데 이는 수온, 수질에 의한 일시적인 현상이라 사료된다. Respiratory burst activity (NBT assay)에 있어서는 실험사료를 공급한 실험구가 대조구에 비해 높은 값을 확인할 수 있었으며 특히 $10^5$ CFU/kg 실험구와 $10^7$ CFU/kg 실험구에서 유의적으로 높은 값을 확인하였다. 혈청의 lysozyme 및 백혈구 활성에 있어서도 실험사료를 투여한 실험구에서 대조구에 비해 높은 활성을 확인 하였다. 공격실험 결과, Streptococcus inae를 접종한지 5일째부터 폐사가 시작되어 7일째 일반사료를 투여한 대조구에서는 100% 폐사율을 보인 반면, $10^3$ CFU/kg 실험구에서는 73%의 폐사율을 $10^5$ CFU/kg 실험구에서는 53%의 폐사율을 나타냈으며, $10^7$ CFU/kg 실험구에서는 45%의 폐사율을 보여 대조구에 비해 많게는 55% 이상의 높은 생존율을 나타내었다. 사료 내 첨가한 Bacillus sp. IS-2의 장내 생존 확인을 위해 실험이 종료 된 후 모든 실험구와 대조구 실험어의 장을 분리하여 배양 된 균체를 DNA를 분리 한 후에 제작 된 ditection primer를 이용한 PCR 결과 일반사료를 투여한 대조구를 제외한 모든 실험구에서 1,465 bp의 PCR product를 확인 할 수 있었다. 상기 결과를 토대로 양식넙치 사료 내 Bacillus sp. IS-2의 첨가는 양식넙치의 성장 및 면역증강, S. iniae에 대한 병정항성에 좋은 효과를 나타내어 사료첨가제로써의 이용 가능성이 클 것이라 사료된다.
본 연구에서는 밤나무 잎 추출물의 항산화 활성 및 주름과 미백에 관련된 tyrosinase와 elastase의 활성에 대한 억제 효능을 측정하였으며, 밤나무 잎 추출물에 함유된 플라보노이드 성분에 대한 분석을 실시하였다. 항산화 활성측정 결과로, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical (DPPH)을 이용한 free radical 소거활성은 50% ethanol 추출물($13.6{\mu}g/mL$ < ethyl acetate 분획(6.2) < aglycone 분획(2.1)으로 나타났고, lumionl-의존성 화학발광법을 이용한 $Fe^{3+}$-EDTA/$H_2O$ 계에서 생성된 활성산소종(ROS)의 소거활성은 aglycone 분획(0.8) < 50% ethanol 추출물(0.5) < ethyl acetate 분획(0.3) 순으로 나타났다. NET법을 이용한 xanthine과 xanthine oxidase의 반응으로부터 생성된 ${O_2}^{{\cdot}\;-}$의 소거활성은 aglycone 분획(65.5)이 ethyl acetate 분획(145.5)보다 더 높게 나타났으며, rose-bengal과 빛으로 유도된 사람 적혈구의 용혈에 대한 세포보호 활성은 $10{\mu}/mL$에서 aglycone 분획이 가장 높은 세포보호 활성을 나타내었다. Elastase 저해활성은 aglycone 분획이 oleanolic acid ($13.7{\mu}/mL$)에 비해 훨씬 좋은 $9.1{\mu}g/mL$로 나타나 뛰어난 주름 개선효과가 있을 것으로 생각된다. Tyrosinase 저해활성은 aglycone 분획이 미백 관련 화장품 고시 원료인 arbutin ($226.2{\mu}g/mL$)에 비해 훨씬 좋은 $21.6{\mu}g/mL$로 나타나 뛰어난 미백 효과가 있을 것으로 생각되어 B16 melanoma 세포를 이용한 멜라닌 합성 저해 활성을 측정하였다. 측정에 앞서 세포 독성 실험에서는 ethyl acetate 및 aglycone 분획이 $25{\mu}g/mL$ 이하에서 80% 이상의 세포 생존율을 나타내었고, $25{\mu}g/mL$ 이하에서의 멜라닌 합성 저해활성 측정 결과, ethyl acetate 및 aglycone 분획이 arbutin보다 훨씬 높은 저해 활성을 나타내었다. 이러한 항산화 및 항노화 활성을 나타내는 밤나무 잎 추출물의 플라보노이드 성분을 TLC와 HPLC를 통해 분석한 결과 kaempferol, quercetin, quercitrin, isoquercitrin, hyperin, rutin이 함유되어 있었고, 그 중에서도 quercitrin이 가장 많이 함유되어 있는 것으로 나타났다. 이상의 결과들은 밤나무 잎 추출물이 free radical, ROS를 소거하여 세포막을 보호함으로써 생체계, 특히 자외선에 노출된 피부에서 항산화제로서 작용할 수 있음을 가리킨다. 또한 자외선으로 인한 기미, 주근깨 과형성 및 주름 생성에 있어 상당한 저해 효과를 나타낼 수 있음을 시사한다.
We report non-specific immune responses and its disease resistance against Edwardsiella tarda by alga mixture (HE; Hizikia:Ecklonia) in olive flounder for the first time. Five isonitrogenous (44% crude protein) and isocaloric (17.1 MJ $kg^{-1}$) diets were formulated to have 0%, 2%, 4%, 6% and 8% of the alga mixture. One of five experimental diets was fed triplicate groups of fish (30 fish/group) to apparent satiation in a flow through system. After a two week feeding, blood was sampled at 3, 6, 12, 24 h after the last feeding for a kinetic measurement of nitroblue tetrazolium (NBT) activity and healthy fish with similar sizes in each tank were selected and injected with 1 mL of E. tarda suspension ($1.0\times10^7$ CFU/mL) to evaluate the disease resistance of the fish. Dietary supplementation of alga mixtures resulted in significantly higher non-specific immune responses compared with the fish fed the control diet. The cumulative mortality was significantly lower in the fish groups fed alga mixture containing diets than control group in the challenge test with E. tarda. Therefore, the results in this study indicate that dietary supplementation of Hizikia and Ecklonia mixtures enhance the non-specific immune responses and a disease resistance of olive flounder.
넙치 치어 배합사료의 첨가제로서 미역 분말, 어보산 및 고추냉이의 효능을 조사하기 위하여 평균 체중 8.4g 의 넙치를 각 수조마다 30마리씩 3반복으로 수용하여 미역 분말, 어보산 및 고추냉이를 첨가한 6종류의 사료로 8주간 사육하였다. 생존율은 모든 실험구가 95% 이상이었으며, 증중량과 사료효율은 어보산 첨가구가 가장 높았지만 미역 분말 10% 첨가구를 제외한 타 실험구와는 유의한 차이가 없었다. 일일사료 섭취율은 미역분말 10% 첨가구가 가장 높았다(P<0.05). 단백질효율은 어보산 첨가구가 미역 분말 첨가구 및 고추냉이 줄기 첨가구에 비해 유의하게 높았지만(P<0.05), 대조구 및 고추냉이 잎 첨가구와는 통계적인 차이가 없었다. 비만도는 어보산 첨가구가 가장 높았지만 미역 분말 10% 첨가구를 제외한 타 실험구와는 유의한 차이가 없었으며, 간중량 지수는 미역 분말 첨가구가 타 실험구에 비해 낮았다(P<0.05).실험 종료시 전어체의 수분, 단백질, 지질 및 회분함량은 모든 실험구간에 유의한 차이가 없었다. 간의 수분 함량은 미역 분말 10% 첨가구가 가장 높은 반면, 지질 함량은 가장 낮았다(P<0.05). 혈액 성상 및 혈청 성분은 사료의 첨가제에 따른 특별한 변화 경향을 보이지 않았다. 혈청 라이소자임 활성은 미역 분말 5% 및 어보산 첨가구가 대조구에 비해 유의하게 높았으며(P<0.05), 식세포의 활성은 어보산 첨가구와 고추냉이 줄기 첨가구가 대조구보다 유의하게 높았다(P<0.05).이상의 결과로 볼 때, 배합사료에 어보산 첨가는 넙치 치어의 성장을 개선시키는 데 도움이 될 것으로 기대되며, 미역, 어보산 및 고추냉이 줄기의 첨가는 넙치 치어의 비특이적 면역계 활성에 효과가 있는 것으로 판단된다.
Effects of Korean mistletoe extracts (KM-110), Viscum album coloratum on the specific and non-specific immune responses of Japanese eel Anguilla japonica were examined. The optimal concentration not showing toxicity of KM-110 was determined to $30-40{\mu}g/ml$ in vitro and $100{\mu}g$/100 g of fish in vivo. Even $1000{\mu}g$ of KM-110/100 g of fish did not show any clinical problem in fish though the levels of toxic parameters were slightly increased. In terms of antibody production, KM-110 significantly elicited more antibody production than FCA or $\beta$-glucan. $\beta$-glucan plus KM-110 group synergistically enhanced antibody production. There was no significant difference between KM-110 and KM-110 plus $\beta$-glucan group. The ROI production by head kidney (HK) leucocytes of eel injected with 500 or $1000{\mu}g$ KM-110 was significantly (P<0.05) enhanced than the control and FCA-treated group. Maximum increase in the NBT reduction value was observed in $1000{\mu}g$ KM-110 group but no significant difference was found between 500 and $1000{\mu}g$ KM group. The level of serum lysozyme activity was significantly (P<0.05) higher in the 500 and $1000{\mu}g$ KM-110- or FCA-treated group than in the control and $200{\mu}g$ KM-110 group. The phagocytic activities of HK leucocytes isolated from eel injected with 500 and $1000{\mu}g$ KM-110 were significantly (P<0.05) higher than $200{\mu}g$ KM-110 and PBS-injected control group. Korean mistletoe appeared to be a good activator of the specific and non-specific immune responses of Japanese eel.
glucan 첨가 사료 투여가 넙치에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 넙치에 glucan 0 %, 0.01 %, 0.1 %, 0.5 % 첨가 사료를 연속 투여구와 격주 투여구로 나누어 공급하면서, 성장, 혈액 성분, 비특이적 면역능을 분석하였으며, 나아가 어병 세균인 Edwardsiella tarda 균의 공격 실험에 대한 방어능을 조사하였다. glucan 첨가 사료 투여는 넙치의 성장에 긍정적인 효과를 보였는데, 특히 0.05 % 연속 투여구와 0.1 % 격주 투여구에서 대조구보다 유의하게 높은 성장을 나타내었다. glucan 첨가사료의 투여가 넙치의 비특이적 면역 반응에 미치는 영향을 조사하기 위해, 혈청 lysozyme과 전신 식세포의 활성 산소를 측정한 결과, 거의 모든 실험구에서 실험 기간 내내 대조구보다 높은 활성을 보였다. glucan 첨가 사료의 투여가 넙치의 생리에 영향을 미치는 지를 조사하기 위하여, Total protein, glucose, GOT, GPT, Ht를 측정한 결과, 3주째 GPT 수치가 다소 높은 것을 제외하고는 그다지 큰 변화를 보이지 않았다. 마지막으로 Edwardsiella tarda ($4{\times}10^6$ cells/fish) 균을 공격 실험한 결과, 0.01 % 연속 투여구를 제외한 모든 실험구에서 높은 방어력을 보였다.
Objectives This study was conducted to confirm the anti-inflammatory effect of Naetakbaekryeom-san (NTB), and whether it could be another treatment for inflammatory diseases. Methods The NTB water extract was extracted with hot water at 100℃ for 2 hours, concentrated at 80℃ under reduced pressure, and used. After 2 hours of pretreatment with NTB and positive control Bay11-7082, nitric oxide (NO), inducible NO synthase (iNOS), interleukin (IL)-6, IL-1𝛽, tumor necrosis factor alpha (TNF-𝛼) were measured in RAW264.7 cells activated with lipopolysaccharides (LPS) 500 ng/mL. After 2 hours of pretreatment with NTB, the anti-inflammatory effect of NTB was evaluated by measuring nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells (NF-𝜅B) in RAW264.7 cells and 293T cells activated with phorbol 12-myristate 13-acetic acid (PMA) 30 ng/mL. Results In RAW264.7 cells activated with LPS, NTB at concentrations of 0.1, 0.3, and 1.0 mg/mL showed no cytotoxicity, significantly inhibited NO production and inhibition of iNOS expression. TNF-𝛼 cytokine levels was not regulated, but NTB at each concentration inhibited the production of IL-1𝛽 and IL-6, and the effect was higher than that of the positive control Bay11-7082 (20 𝜇M). In PMA-activated RAW264.7 cells and 293T cells, each concentration of NBT decreased the NF-𝜅B transcriptional activity, with the greatest decrease at 1 mg/mL. Conclusions These results demonstrated the anti-inflammatory effect of NTB water extracts, but further studies such as comparison of anti-inflammatory effects and antioxidant effects by NTB component, comparison of effects according to extraction solvents, and clinical studies are needed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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