리포솜은 인지질로 구성된 인위적 세포막으로서, 본 연구에서는 초음파와 압력을 이용하여 나노 리포솜을 제조하였다. 먼저 리포솜을 탈수/재수화법으로 제조하였다. 형성된 multilayer vesilces(MLV)의 크기는 $10{\mu}m$ 이상이었다. Tip-type의 초음파 처리기와 French press를 이용하여 리포솜의 크기를 감소시켰다. MLV에 대한 출력 112.5W, 10분간의 초음파 처리로 리포솜의 크기가 450 nm 이하로 감소되었다. 또한, 6,000 psi 이상의 압력에서는 100 nm 내외의 균일한 리포솜이 생성되었다. 초음파와 가압에 의한 리포솜 용액의 색도는 대체로 명도, 적색도, 황색도가증가하였으며, 육안으로는 점점 더 투명하게 되었다. 이러한 결과는 초음파와 French press를 이용한 가압 처리로 나노 크기의 리포솜을 얻을 수 있음을 의미한다.
약물 수송체로 사용되는 리포솜은 동결 건조를 통하여 분말화 시키는 방법이 사용되어지고 있다. 리포솜 안정제로서 말토스는 동결건조된 리포솜 분말의 안정성을 향상시키고 약물 봉입률에 영향을 주는 것으로 알려져 왔다. 동결건조 전과 후의 리포솜 입자의 크기를 측정하므로서 리포솜의 안정성을 평가하였고 또한, 약물 봉입률은 모델 약물인 칼세인을 사용하여 조건에 따른 봉입양을 측정하였다. 리포솜 제조 후에 말토스를 첨가한 리포솜은 수화하는 과정에서 말토스를 첨가하여 제조한 리포솜보다 훨씬 더 안정한 것으로 확인되었다. 말토스를 첨가하지 않은 리포솜은 시간이 지남에 따라 입자의 크기가 커지는 반면, 리포솜 제조 후에 말토스를 첨가한 리포솜은 $4{\sim}37^{\circ}C$에서 30일 동안 안정하다. 또한, 말토스/지질의 물농도 비가 3과 6일 때 상대적으로 가장 높은 안정성을 보였다.
Kim, Jin-Chul;Lee, Eun-Ok;Yang, Ji-Won;Choe, Tae-Boo;Kim, Jong-Duk
Archives of Pharmacal Research
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제18권2호
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pp.84-89
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1995
The complexation and physical characteristics of egg phosphatidylcholine (PC) liposome containing amphotericin B(AmB) were investigated through circular dichrosim(CD) spectra, the size distribution, the turbidity change, and the calcein release. CD spectra of AmB-containing egg PC mxture exhibited a positive peak around 330 nm indicative of complexation of AmB and four negative peaks. The positive peak increased up to $2.2{\;}millidegree/{\mu}g$ AmB as AmB contents increased up to 12% (w/w), suggesting that AmB-phospholipid complexation was promoted by the antibiotics. The effective diameter of liposomesa by dynamic light scattering decreased from 450 nm to 220 nm as the amount of AmB in liposomes increased from o to 30% (w/w). The complexation may be responsible for the reduction in size. On the other hand, at around 1 mN deoxycholate (DOC), the reltive turbidities of 5 and 10% (w/w) AmB-containing liposome suspension were less than 1 probably due to the soblubilization of the complex, while those of pure PC liposome suspension were larger than 1 at the same concentration. Deoxycholate-induced release of liposomes, indicating the intercalation of the drug into the bilayers. Therefore, it is concluded that in AmB/eggPC/water system, AmB-phospholipid complexcoexists with AmB-containing liposomes.
Background: This study was performed to determine the effects of liposome-encapsulated bee venom (BV) treatment of inflammatory factors in atopic dermatitis (AD) compared with BV treatment. Methods: AD was induced by phthalic anhydride in mice and the effects of BV liposomes were measured. Using Leica Application Suite, thickened epidermis and dermis were measured after BV liposome treatment (0.05 and 0.1 ㎍/mL). The number of stained mast cells and the concentration of immunoglobulin (Ig)E were measured. Serum IgE concentration was analyzed using an enzyme-linked immunosorbent assay. The serum concentrations of interleukin (IL)-1, IL-4, and IL-6 inflammatory cytokines were measured. The levels of messenger ribonucleic acid expression of proinflammatory cytokines and chemokines were measured using reverse transcription polymerase chain reaction. Inhibition of mitogen-activated protein kinase activation, was analyzed on western blot. To measure the transcriptional activity (NF-κB inhibition by BV liposomes), western blots (p65, p-IκB, p50, and IκB) were also performed. Results: The weight of lymph nodes, serum IgE concentrations, morphological changes in the skins from the backs of the mice, and mast cell numbers in inflamed tissues were noticeably lower in the BV liposome treatment group compared with the BV treatment group. The concentrations of pro-inflammatory cytokines (IL-1, IL-4, IL-6) and chemokines (TSLP, CCL22) were also reduced. Activation of mitogen-activated protein kinase (p-ERK and p-p38), and transcriptional activity (p65, p-IκB, p50, and IκB) was strongly suppressed in the BV liposome group. Conclusion: BV liposomes may have a better therapeutic effect than BV for the treatment of AD.
Many of the adverse effects of solar UV exposure appear to be directly attributable to damage to epidermal DNA. In particular, cyclobutane pyrimidine dimers (CPD) may initiate mutagenic changes as well as induce signal transduction responses that lead to a loss of skin immune surveillance and micro-destruction of skin structure. Our approach is to reverse the DNA damage using prokaryotic DNA repair enzymes delivered into skin using specially engineered liposomes. T4 endonuclease V encapsulated in liposomes (T4N5 liposome lotion) enhanced DNA repair by shifting repair of CPD from the nucleotide excision to the base excision repair pathway. Following topical application to humans, increased repair limited UV-induction of cytokines, many of which are immunosuppressive. In a recent clinical study, topical treatment of UV-irradiated human skin with T4N5 liposome lotion reduced the suppression of the nickel sulfate contact hypersensitivity response. Similarly, the photoreactivating enzyme enhances repair by directly reversing CPDs after absorbing activating light. Here also treatment of UV-irradiated human skin with photoreactivating enzyme in liposomes and photoreactivating light restored the response to the contact allergen nickel sulfate. These findings confirm in humans the observation in mice that UV induced suppression of contact hypersensitivity is caused in part by CPDs. We have tested the ability of T4N5 liposome lotion to prevent UV-induced skin cancer in patients with xeroderma pigmentosum (XP), who have an elevated incidence of skin cancer resulting from a genetic defect in DNA repair. Daily use of the lotion for one year in a group of 20 XP patients reduced the average number of actinic keratoses by 68% and basal cell cancers by 30% compared to 9 patients in the placebo control group. Delivery of DNA repair enzymes to skin is a promising new approach to photoprotection.
본 연구에서는 경피 흡수가 어려운 주름 개선 펩티드인 GHK, GHK-Cu, Pal-GHK 리포좀 및 여기에 피부 투과 펩티드인 아르지닌 올리고머 R4(tetra-D-arginine), R6(hexa-D-arginine)를 첨가한 리포좀으로 경피 투과도를 측정하여 그 결과를 다음 6가지 구분으로 분석하였다. (1) 주름 개선 펩티드만 함유한 GHK, GHK-Cu, Pal-GHK lioposome의 경우; 24시간 최종 누적 경피 투과율은 6.05%, 7.4%, 8.83%를 보였다. (2) GHK에 약물 전달 펩티드 아르지닌 올리고머 R4, R6를 첨가한 리포좀의 경우; 24시간 최종 누적 경피 투과율은 13.63%, 7.68%를 나타냈다. (3) GHK-Cu에 R4, R6를 첨가한 리포좀의 경우; 24시간 최종 누적 경피 투과율은 15.46%, 8.64%로 나타났다. (4) Pal-GHK에 R4, R6를 첨가한 리포좀의 경우; 24시간 최종 누적 경피 투과율은 16.9%, 10.67%를 보였다. (5) GHK, GHK-Cu, Pal-GHK에 각각 R4를 첨가한 리포좀의 경우; 24시간 최종 누적 경피 투과율은 13.63%, 15.46%, 16.9%를 나타냈다. (6) GHK, GHK-Cu, Pal-GHK에 각각 R6를 첨가한 리포좀의 경우; 24시간 최종 누적 경피 투과율은 7.68%, 8.64%, 10.67%로 나타났다. 본 실험을 통해 구리이온(Cu2+)과 팔미트산에 의해 GHK의 피부 흡수가 증가하고, 피부 투과 펩티드에 의해 주름 개선 펩티드의 피부 흡수가 증진되며, GHK, GHK-Cu, Pal-GHK에는 R4가 R6보다 높은 효과를 보이는 것을 알 수 있었다. 이를 통하여 GHK, GHK-Cu, Pal-GHK의 피부 흡수를 증가를 위한 최적의 조건을 제시하여 그 효능을 극대화할 수 있는 방안을 제시함으로써 주름 개선 기능성 화장품에서의 폭넓은 활용과 응용을 제안한다.
Ji Yoon Kim;Un Chul Shin;Ji Yong Park;Ran Ji Yoo;Soeku Bae;Tae Hyeon Choi;Kyuwan Kim;Young Chan Ann;Jin Sil Kim;Yu Jin Shin;Hokyu Lee;Yong Jin Lee;Kyo Chul Lee;Suhng Wook Kim;Yun-Sang Lee
대한방사성의약품학회지
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제9권1호
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pp.9-16
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2023
Liposomes as drug delivery system have proved useful carrier for various disease, including cancer. In addition, perfluorocarbon cored microbubbles are utilized in conjunction with high-intensity focused-ultrasound (HIFU) to enable simultaneous diagnosis and treatment. However, microbubbles generally exhibit lower drug loading efficiency, so the need for the development of a novel liposome-based drug delivery material that can efficiently load and deliver drugs to targeted areas via HIFU. This study aims to develop a liposome-based drug delivery material by introducing a substance that can burst liposomes using ultrasound energy and confirm the ability to target tumors using PET imaging. Liposomes (Lipo-DOX, Lipo-DOX-Au, Lipo-DOX-Au-RGD) were synthesized with gold nanoparticles using an avidin-biotin bond, and doxorubicin was mounted inside by pH gradient method. The size distribution was measured by DLS, and encapsulation efficiency of doxorubicin was analyzed by UV-vis spectrometer. The target specificity and cytotoxicity of liposomes were assessed in vitro by glioblastoma U87mg cells to HIFU treatment and analyzed using CCK-8 assay, and fluorescence microscopy at 6-hour intervals for up to 24 hours. For the in vivo study, U87mg model mouse were injected intravenously with 1.48 MBq of 64Cu-labeled Lipo-DOX-Au and Lipo-DOX-Au-RGD, and PET images were taken at 0, 2, 4, 8, and 24 hours. As a result, the size of liposomes was 108.3 ± 5.0 nm at Lipo-DOX-Au and 94.1 ± 12.2 nm at Lipo-DOX-Au-RGD, and it was observed that doxorubicin was mounted inside the liposome up to 52%. After 6 hours of HIFU treatment, the viability of U87mg cells treated with Lipo-DOX-Au decreased by around 20% compared to Lipo-DOX, and Lipo-DOX-Au-RGD had a higher uptake rate than Lipo-DOX. In vivo study using PET images, it was confirmed that 64Cu-Lipo-DOX-Au-RGD was taken up into the tumor immediately after injection and maintained for up to 4 hours. In this study, drugs released from liposomes-gold nanoparticles via ultrasound and RGD targeting were confirmed by non-invasive imaging. In cell-level experiments, HIFU treatment of gold nanoparticle-coupled liposomes significantly decreased tumor survival, while RGD-liposomes exhibited high tumor targeting and rapid release in vivo imaging. It is expected that the combination of these models with ultrasound is served as an effective drug delivery material with therapeutic outcomes.
본 연구에서는 알킬체인의 길이가 서로 다른 benzyltrialkylammonium chloride계 화합물을 합성하여 리포좀 제조에 응용하였다. 제조된 리포좀의 평균 입도분포, 제타전위, 방출거동 및 항균성을 조사하였으며, 사슬 길이에 따른 특성을 비교하였다. 리포좀의 평균 입도는 120~140 nm의 크기분포를 가졌으며 소수성 사슬의 길이가 증가할수록 큰 입자크기를 가졌다. 리포좀 용액의 제타전위는 양이온성 계면활성제인 benzyltrialkylammonium chloride를 첨가함에 따라 +80~90 mV의 값을 가지며 향상된 분산 안정성을 보였다. 방출거동에서는 사슬 길이에 따라 방출 속도를 조절할 수 있었으며 긴 사슬의 계면활성제를 첨가한 리포좀은 증가된 서방형 방출특성을 보였다. 또한, 리포좀의 포집효율은 25.9~27.5% 이었다.
DHA의 산화를 방지하기 위하여 vitamin C/alginate 리포솜에 병합시켰다. TEM을 통하여 제조된 AVDLs를 확인할 수 있었고, TLC를 통하여 각각의 AVDLs는 초기 첨가량의 15 ${\sim}$ 18 % DHA를 함유하고 있음을 확인하였다. TBARS assay에 의해$40^{\circ}C$에서 AVDLs에 포함된 DHA의 산화정도를 분석한 결과 vitamin C를 포함한 리포솜이 DHA의 산화를 억제하는 것으로 확인되었으며 0.2 % vitamin C를 포함한 AVDLs가 항산화 효과가 가장 큼을 알 수 있었다. AVDLs는 실험에서와 같은 산화조건에서 DHA의 산화를 초기 3일까지는 억제시킴을 알 수있었다.
Gene delivery that provides targeted delivery of therapeutic genes to the cells of a lesion enhances therapeutic efficacy and reduces toxic side effects. This process is especially important in cancer therapy when it is advantageous to avoid unwanted damage to healthy normal cells. Incorporating cancer-specific ligands that recognize receptors overexpressed on cancer cells can increase selective binding and uptake and, as a result, increase targeted transgene expression. In this study, we investigated whether a peptide capable of homing to hepatocellular carcinoma (HCC) could facilitate targeted gene delivery by cationic liposomes. This homing peptide (HBP) exhibited selective binding to a human hepatocarcinoma cell line, HepG2, at a concentration ranging from 5 to 5,000 nM. When conjugated to a cationic liposome, HBP substantially increased cellular internalization of plasmid DNA to increase the transgene expression in HepG2 cells. In addition, there was no significant enhancement in gene transfer detected for other human cell lines tested, including THLE-3, AD293, and MCF-7 cells. Therefore, we demonstrate that HBP provides targeted gene delivery to HCC by cationic liposomes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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