This study was conducted to confirm the availability of lactic acid bacteria as probiotics haying inhibitory effects to cancer cell line. Five lactic acid bacteria showing anti-cancer activity were compared by acid tolerance, bile tolerance, antibiotics resistance, milk fermentation, stability, and cell adherence activity to colon epithelial cell. The results obtained are as follows : In acid tolerance, all strains did not have a resistance below pH 3.0 and 3.5 except Lactobacillus plantarum KCTC3099. In antibiotics resistance, Lactococcus lactis and L. plantarum KCTC3099 were resistant to cotrimoxazol (128 mg/1), and Bifidobacterium adolescentis Maeil-K8 and B. infantis Maeil-K9 were resistant to doxycylin and gentamycin (4 mg/1). In case of cell adherence ability to Caco-2 cell, B. infantis Maeil-K9 was found to be superior to others as 3.1%, while the others were less than 0.5%. When the strains were cultured to milk base, viable counts of the strains tested increased more 1 log cycle than inoculation, but acid production was very low except L. plantarum KCTC3099. Also, L. plantarum KCTC3099, B. adolescentis Maeil-K8, and B. infantis Maeil-K9 were stable in fermented milk base during storage. In conclusion, L. plantarum KCTC3099 and B. infantis Maeil-K9 were confirmed to be superior for the availability as probiotics.
A new bacteriocin producing lactic acid bacteria having antagonistic activity against Lactobacillus plantarum, was isolated from Kimchi. It was identified as Leuconostoc mesenteroides, and designated as Leuconostoc mesenteroides B7. The bacteriocin from Leuconostoc mesenteroides B7 named as bacteriocin B7 was stable in the pH range $2.5{\sim}9.5$. Bacteriocin B7 was active over a wide temperature range from $4^{\circ}C$ to $120^{\circ}C$. It was inactivated by proteinase K, trypsin, ${\alpha}-chymotrypsin$, and protease treatments indicating its proteinous nature. Tricine-SDS-PAGE of the purified bacteriocin B7 showed the presence of a single band, having a molecular mass of about 3,500 dalton. Mixed culture of the producer and the indicator, Lb. plantarum KFRI 464 or Lb. delbruekii KFRI 347, increased production of bacteriocin B7. This result suggested the presence of bacteriocin inducing factor in the indicator strain. The inducing factor was localized in cell debris and intracellular faction of the indicator cell, Lb. plantarum KFRI 464. Treatment of the inducing factor with proteinase K destroyed inducing activity. This result strongly suggested that the inducing factor is a protein.
The genus Leuconostoc is generally recognized as a favorable microorganism associated with a good taste of Kimchi and Lactobacillus plantarum is responsible for the overripening and acidification of Kimchi. A rapid and reliable PCR-based method to monitor the change of these lactic acid bacterial populations during Kimchi fermentation was attempted. A Leuconostoc-specific primer set was chosen from the conserved sequences of 16S rRNA genes among Leuconostoc species. The Lb. plantarum-specific primer set was the internal segments of a Lb. plantarum-specific probe which was isolated after randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis and tested for identification. The specificity of this protocol was examined in DNA samples isolated from a single strain. In agarose gel, as little as 10 pg of template DNA could be used to visualize the PCR products, and quantitative determination was possible at the levels of 10 pg to 100 ng template DNA. For the semi-quantitative determination of microbial changes during Kimchi fermentation, total DNAs from the 2 h-cultured microflora of Kimchi were extracted for 16 days and equal amounts of DNA templates were used for PCR. The intensities of DNA bands obtained from PCR using Leuconostoc-specific and Lb. plantarum-specific primer sets marked a dramatic contrast at the 1 ng and 100 ng template DNA levels during Kimchi fermentation, respectively. As the fermentation proceeded, the intensity of the band for Leuconostoc species increased sharply until the 5th day and the levels was maintained until the 11 th day. The sharp increase for Lb. plantarum occurred after 11 days with the decrease of Leuconostoc species. The results of this study indicate that Leuconostoc species were the major microorganisms at the beginning of Kimchi fermentation and reach their highest population during the optimum ripening period of Kimchi.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.42
no.6
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pp.892-897
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2013
We investigated the acute toxicity from a single dose of crude anti-fungal compounds produced by Lactobacillus plantarum AF1, a lactic acid bacterium isolated from kimchi, on ICR male and female mice in vivo. The test article was orally administered once to both sexes of mice. The mortality rate, clinical findings, autopsy findings, and body weight changes were monitored daily for 14 days. In the oral acute toxicity test, male and female mice were gavaged with four doses (5, 50, 300 or 2,000 mg/kg) of the crude anti-fungal compounds. The oral $LD_{50}$ of the crude anti-fungal compounds was higher than 2,000 mg/kg. No significant changes in general conditions, body weights, clinical signs, or appearance of gross lesions were observed. In conclusion, our results suggest a low toxicity and no-adverse-effects from crude anti-fungal compounds produced by Lactobacillus plantarum AF1 up to 2,000 mg/kg via the oral route.
The malolactic fermentation (MLF), which is widely used in winemaking, is the conversion of malic acid to lactic acid conducted by the malolactic enzyme (Mle) of lactic acid bacteria. In order to select the strains with MLF among 54 lactic acid bacteria isolated from the traditionally fermented foods, we designed a primer set that specifically targets the conserved regions of the mle gene and then selected four strains that harbor the mle gene of Lactobacillus plantarum. All strains were identified as L. plantarum by analyzing the 16S rRNA sequences, biochemical properties, and the PCR products of the recA gene. From comparison of the mle gene sequences consisting of 1,644 bp, the nucleotide and amino acid sequence of strain JBE60 correspond to 96.7% and 99.5% with those of other three strains, respectively. The strain JBE60 showed the highest resistant against 10% (v/v) ethanol among the strains. The strains lowered the concentration of malic acid to average 43%. Considering the ethanol resistance and conversion of malic acid, the strain JBE60 is considered as a potential starter for the malolactic fermentation.
A multiplex competitive polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the rapid identification and quantification of Leuconostoc mesnteroides and Lactobacillus plantarum populations which are the key microorganisms in kimchi fermentation. The strain-specific primers were designed to selectively amplify the target genes encoding 165 rRNA of L. plantarum and dextransucrase of L. mesenteroides. There was a linear relationship between the band intensity of PCR products and the number of colony forming units of each model organism. The PCR quantification method was compared with a traditional plate-counting method f3r the enumeration of the two lactic acid bacteria in a mixed suspension culture and also applied to a real food system, namely, watery kimchi. The population dynamics of the two model organisms in the mixed culture were reliably predictable by the competitive PCR analysis.
Objective: Microencapsulation technologies have been developed and successfully applied to protect the probiotic bacterial cells damaged by environmental exposure. This study aimed to investigate the effects of microencapsulation of Lactobacillus plantarum MB001 on the growth performance, ileal nutrient digestibility, jejunal histomorphology and cecal microbiome of broiler chickens in a tropical climate. Methods: A total of 288 one-day-old female broilers (Ross 308) were randomly allocated into 4 groups (6 replicates of 12 birds). Treatments included, i) a basal diet (NC), ii) NC + avilamycin (10 mg/kg) (PC), iii) NC + non-encapsulated L. plantarum MB001 (1×108 colony-forming unit [CFU]/kg of diet) (N-LP), iv) NC + microencapsulated L. plantarum MB001 (1×108 CFU/kg of diet) (ME-LP). Results: Dietary supplementation of ME-LP improved average daily gain, and feed conversion ratio of broilers throughout the 42-d trial period (p<0.05), whereas ME-LP did not affect average daily feed intake compared with NC group. Both N-LP and ME-LP improved apparent ileal digestibility of crude protein and ether extract compared with NC group (p<0.05). The broilers fed ME-LP supplemented diet exhibited a beneficial effect on jejunal histomorphology of villus height (VH), crypt depth (CD) and villus height to crypt depth ratio (VH:CD) of broilers compared to NC group (p<0.05). At the phylum level, Firmicutes was enriched (p<0.05) and Proteobacteria was decreased (p<0.05) only in the ME-LP group. At the genus level, the ME-LP diets increased (p<0.05) the number of both Lactobacillus and Enterococcus compared to NC, PC, and N-LP groups (p<0.05). Conclusion: Microencapsulation assists the efficient functioning of probiotics. ME-LP could be potentially used as a feed additive for improvement of cecal microbiota, gut integrity and nutrient utilization, leading to better performance of broilers.
We investigated the fermentation conditions for extracts of leave/branches and sap from Korean Dendropanax morbifera (D. morbifera) using Lactobacillus plantarum (L. plantarum) ilchiwhangchil 1785 and L. plantarum ilchiwhangchil 2020. Log growth phase cultured L. plantarum ilchiwhangchil 1785 and L. plantarum ilchiwhangchil 2020 were used for fermentation. The pH and growth of the microorganisms in broth were monitored during the fermentation period. The results revealed that the optimum fermentation conditions for 20 wt% of leave/branches extracts and 1 wt% of sap extract was 2 days incubation at $37^{\circ}C$. The minimum inhibitory concentration (MIC) method and a disk diffusion assay were used to evaluate the antimicrobial activity of the fermented extracts of the leave/branches and sap against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Pseudomonas aeruginosa. The antimicrobial activity increased in all three strains grown on the medium containing fermented extracts of the leave/branches and sap as compared with that of the strains grown on medium containing non fermented extracts. Furthermore, the antimicrobial activity increased in proportion to the contents of the fermented extracts. Our data suggest that fermented extracts of leave/branches and sap of D. morbifera have applications as natural bio functional materials, such as preservatives, cosmetic materials, and natural packaging materials.
This study was performed to investigate the four-week repeated-dose toxicity of the crude antifungal compounds produced by Lactobacillus plantarum AF1 (Lb. plantarum AF1), a lactic acid bacterium isolated from kimchi, in male and female rats. Sprague-Dawley male and female rats were divided into four groups, with 10 animals in each group. The test article was administered once daily by gavage to rats at dosage levels of 0, 500, 1,000, and 2,000 mg/kg/day for four weeks. There were no test-article-related deaths or abnormal clinical signs in both the male and female rats during the observation period. Furthermore, no differences in the body weight changes, food intake and water consumption levels of the control and treatment groups were found. The hematological parameters, serum biochemical analysis results, histopathological examination results and all other findings also showed no significant or dose-dependent changes. There were also no changes in the organ weights upon the administration of the crude antifungal compounds produced by Lb. plantarum AF1. These results suggest that the oral administration of the crude antifungal compounds produced by Lb. plantarum AF1 had no adverse effects up to a dosage level of 2,000 mg/kg in both male and female rats.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.41
no.5
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pp.612-620
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2012
This study was performed to investigate the 4-week repeated-dose toxicity of $Lactobacillus$$plantarum$ AF1 ($Lb.$$plantarum$ AF1), a lactic acid bacteria isolated from kimchi, in male and female rats. Sprague-Dawley male and female rats were divided into four groups, with 10 animals in each group. The test article was administered once daily by gavage to rats at dosage levels of 0, 0.5, 1.0, and 2.0 g/kg/day for 4-weeks. There were no test articlerelated deaths or abnormal clinical signs in either gender of rat during the observation period. Furthermore, no differences were found between the control and treatment groups in terms of body weight changes, food intake, and water consumptions. Hematological parameters, serum biochemical analysis, and any other findings also showed no significant or dose-dependent alterations. There were no alterations in organ weights upon administration of $Lb.$$plantarum$ AF1. These results suggest that there were no adverse effects of oral application of $Lb.$$plantarum$ AF1 up to a dosage level of 2.0 g/kg in both male and female rats.
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