• 제목/요약/키워드: K_{cat}/K_m$

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Purification and Characterization of a Thermostable Xylanase from Fomitopsis pinicola

  • Shin, Keum;Jeya, Marimuthu;Lee, Jung-Kul;Kim, Yeong-Suk
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제20권10호
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    • pp.1415-1423
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    • 2010
  • An extracellular xylanase was purified to homogeneity by sequential chromatography of Fomitopsis pinicola culture supernatants on a DEAE-Sepharose column, a gel filtration column, and then on a MonoQ column with fast protein liquid chromatography. The relative molecular mass of the F. pinicola xylanase was determined to be 58 kDa by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and by size-exclusion chromatography, indicating that the enzyme is a monomer. The hydrolytic activity of the xylanase had a pH optimum of 4.5 and a temperature optimum of $70^{\circ}C$. The enzyme showed a $t_{1/2}$ value of 33 h at $70^{\circ}C$ and catalytic efficiency ($k_{cat}=77.4\;s^{-1}$, $k_{cat}/K_m$=22.7 mg/ml/s) for oatspelt xylan. Its internal amino acid sequences showed a significant homology with hydrolases from glycoside hydrolase (GH) family 10, indicating that the F. pinicola xylanase is a member of GH family 10.

마우스레트로바이러스에 의한 합포체 형성 기작 분석 (Analysis of Syncytium Formation Mechanism induced by Ecotropic Murine Retrovirus)

  • 배은혜;박성한;정용태
    • 미생물학회지
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    • 제42권3호
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    • pp.230-234
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    • 2006
  • 레트로바이러스의 합포체(syncytia)형성 기작 연구를 위해 합포체 형성을 유도하는 새로운 ecotropic 마우스레트로바이러스(Friend murine leukemia virus)변이주를 실험에 사용하였다. 마우스레트로바이러스의 외막에 존재하는 당단백질 중 수용체와 결합하는 부위의 아미노산을 변화시키면 합포체를 형성할 수 있음이 이미 밝혀졌다. 본 연구에서는 합포체 유도 마우스레트로바이러스 외막 당단백질을 가진 pseudotype 레트로바이러스 벡터로 부터도 이러한 융합 현상이 일어날 수 있는지 알아보았다. 마우스 세포주인 M. dunni에 pseudotype 바이러스를 감염시킨 결과 레트로바이러스 벡터 매개에 의한 바이러스-세포간 융합 현상은 일어나지 않았다. 이러한 실험결과는 합퐁체 형성이 바이러스 복제가 가능한 합포체 유도 마우스레트로바이러스에만 일어남을 나타낸다. 또한 ecotropic 마우스레트로바이러스 수용체의 농도와 막 융합과의 상관관계도 없는 것으로 밝혀졌다.

조선소의 대형블록 용접을 위한 인력 운반형 용접로봇 개발 (Development of a Portable Welding Robot for Welding Jobs in Ship Blocks)

  • 박주이;김진욱;김정민;김지윤;김웅지;김수호
    • 제어로봇시스템학회논문지
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    • 제20권7호
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    • pp.760-766
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    • 2014
  • This paper represents a portable robot for use in the welding process of the double hulls in shipbuilding yards. It has 5 degrees of freedom and 3kg of payload. Its body weight is 17.3 [kg] so that human workers can carry it by hand to the work place. Its body is mainly made of magnesium and aluminum alloys. Since the robot is placed about 25m apart from its controller, EtherCAT is adopted for reliable connection between the robot and controller through a single light cable. RTX real-time kernel and KPA EtherCAT master are used to control the robot on a Windows XP environment. The performance of the developed robot is satisfactory to the requirement in welding tasks of U-type cells in shipbuilding yards.

The Importance of the Aging Time to Prepare Cu/ZnO/Al2O3 Catalyst with High Surface Area in Methanol Synthesis

  • Jung, Heon;Yang, Dae-Ryook;Joo, Oh-Shim;Jung, Kwang-Deog
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제31권5호
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    • pp.1241-1246
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    • 2010
  • Ternary Cu/ZnO/$Al_2O_3$ catalysts were prepared by a co-precipitation method. The precursor structures were monitored during the aging. The first precipitate structure was amorphous georgeite, which transformed into the unknown crystalline structure. The transition crystalline structure was assigned to the crystalline georgeite, which was suggested with elemental analysis, IR and XRD. The final structure of precursors was malachite. The Cu surface area of the resulting Cu/ZnO/$Al_2O_3$ was maximized to be 30.6 $m^2$/g at the aging time of 36 h. The further aging rapidly decreased Cu surface areas of Cu/ZnO/$Al_2O_3$. ZnO characteristic peaks in oxide samples almost disappeared after 24 h aging, indicating that ZnO was dispersed in around bulk CuO. TOF of the prepared catalysts of the Cu surface area ranges from 13.0 to 30.6 $m^2/g_{cat}$ was to be 2.67 ${\pm}$ 0.27 mmol/$m^2$.h in methanol synthesis at the condition of $250^{\circ}C$, 50 atm and 12,000 mL/$g_{cat}$. h irrespective of the XRD and TPR patterns of CuO and ZnO structure in CuO/ZnO/$Al_2O_3$. The pH of the precipitate solution during the aging time can be maintained at 7 by $CO_2$ bubbling into the precipitate solution. Then, the decrease of Cu surface area by a long aging time can be prevented and minimize the aging time to get the highest Cu surface area.

Lentinus edodes 에서 분비되는 Laccase 의 특성 (Characterization of Laccase Excreted from Lentinus edodes)

  • 정인범;윤홍덕;맹진수;강사욱;하영칠;정가진;최형태;김재헌
    • 미생물학회지
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    • 제30권4호
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    • pp.252-259
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    • 1992
  • Lentinus edodes 에서 분비된 laccase 를 DEAE Sephadex A-50, Con A-Sepharose, Sephadex G-150 크로마토그래피를 통해서 순수분리하였다. 효소는 분자량이 87 KDa 정도인 하나의 소단위체로 되어 있고, 12.0% 의 당을 함유하고 있었다. 그리고 N-말단 아미노산 서열은 Pleurotus oxtreatus 와 Cloriolus hirsutus 의 laccase 와 유사하였다. 효소의 최적 pH 는 4.8 이고 최적 온도는 $40^{\circ}C$ 이었다. 그리고 본 효소는 pH 7-9 와 $30^{\circ}C$이하에서 비교적 안정하였다. Syringaldazine 에 대한 $K_{M}$$0.4\mu$ M 이었고 $k_{cat}$$ 77 sec^{-1}$ 이었다. This layer chromatography 에 의한 본 효소의 반응 산물들의 분리양상이 Pleurotus ostreatus 의 laccase 의 경우와 유사하였다.

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Escherichia coli 오르니틴 트란스카바밀라제의 유전자 argI의 클로닝 및 발현 (Cloning and Expression of Escherichia coli Ornithine Transcarbamylase Gene, argI)

  • 류기중;유장걸;고영환;김찬식;송성준;오영선;이선주
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제38권2호
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    • pp.118-122
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    • 1995
  • Escherichia coli의 오르니틴 트란스카바밀라제는 오르니틴과 카바밀인산으로부터 시트룰린의 합성을 촉진시키는 효소이다. 이 효소의 기능과 구조와의 상관관계, 반응메카니즘 등 생화학적 연구를 하기 위하여 대량의 효소를 추출할 필요가 있다. 본 연구는 오르니틴 트란스카바밀라제의 대량생산 시스템을 확립하기 위하여 E. coli argI 유전자를 E. coli $DH5{\alpha}$ 세포의 염색체 DNA를 추출한 후에 PCR 방법으로 증폭시켜 얻었다. 증폭된 argI 유전자를 단핵생물 단백질 발현벡터인 pKK223-3에 접합시킨 후, 오르니틴 트란스카바밀라제가 존재하지 않은 E. coli TB2 세포에 클로닝 시켰다. 이 세포로부터 생산된 오르니틴 트란스카바밀라제는 암모늄염에 의한 분할, 열변성, 크로마토그래피 등을 사용하여 순수하게 분리하였다. SDS 단백질 전기영동 결과 약 38 kDa 크기의 효소가 순수하게 얻어졌다. 반응속도론적 실험결과 $K_{cat}$$1{\times}10^5m^{-1}$, $K_M$은 오르니틴에 대하여는 0.35 mM, 카바밀인산에 관하여는 0.06 mM이 각각 얻어졌다. 이 결과는 야생형 오르니틴 트란스카바밀라제의 반응속도 인자들과 비슷한 값이다. 본 연구는 이들 결과로부터 오르니틴 트란스카바밀라제의 기능을 하는 E. coli argI 유전자가 클로닝 되었음을 확인하였다.

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급격한 수온 스트레스에 따른 전복, Haliotis discus hannai 치패의 생리학적 연구 (Physiological Studies on Acute Water-temperature Stress of Juvenile Abalone, Haliotis discus hannai)

  • 김태형;양문휴;최미경;한석중;여인규
    • 한국양식학회지
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    • 제18권1호
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    • pp.7-12
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    • 2005
  • 본 연구는 전복, Haliotis discus hannai 치패를 이용하여 급격한 수온변화 스트레스에 따른 간부위에서의 항산화효소 및 HSP70 mRNA의 변화를 조사하였다. 실험구는 10, 15, 20(대조구), 25 및 $30^{\circ}C$로 설정하였으며, 측정 시간은 0, 6, 12, 24 및 48h후에 측정하였다. 그 결과 HSP70 mRNA의 발현은 다른 실험구들과 비교하여 $30^{\circ}C$ 실험구에서만 유의적으로 높게 발현되었으며, SOD의 경우 모든 실험구에서는 증가하는 경향을 나타내었으나, 고수온에서 12 h 이후 급격한 상승을 나타내었고, 저수온에서는 수온 스트레스 자극 직후에 증가한 후 회복되는 경향을 나타내었다. CAT에서는 실험 개시 후부터 고수온 실험구에서 지속적인 상승을 나타내었다. 실험기간 중의 생존율은 $30^{\circ}C$ 실험구를 제외한 모든 실험구에서 $100\%$의 생존율을 나타내었으며, $30^{\circ}C$ 실험구에서는 $92\%$의 생존율을 나타내었다. 이상의 결과로, 20"C에서 순치된 전복은 저수온 스트레스에 대한 생리학적 방어기작이 약 $5^{\circ}C$ 내외의 고수온 스트레스에 대한 생리학적 방어기작과 비교하여 보다 빠르게 작용하여 안정화하는 것으로 나타났으며, 일정 수온 이상의 고수온에 노출되었을 경우에는 생체 내 과도한 생리학적 방어 기작이 작용하여 항산화효소 및 HSP70 발현이 증가하는 것으로 나타났다.

일부 폐경 후 여성에서 영양상태 및 골대사 관련 일부 혈액 지표와 항산화효소 활성과의 관련성 분석 (The Relationship between Some Blood Parameters and Antioxidant Enzyme Activity in Korean Postmenopausal Women)

  • 이행신;김미현;이다홍;승정자
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제39권5호
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    • pp.476-484
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    • 2006
  • To elucidate the relationship between blood parameters related bone metabolism and antioxidant enzyme activity in postmenopausal period 60 women residing in Iksan area were recruited. Food and nutrient intake of each individual subject were estimated by 24-hour recalls of 3 non-consecutive days. The biochemical markers including total protein, albumin, osteocalcin (intact bone gla protein; BOP), calcium, phosphorus and hemoglobin were measured in fasting blood. In addition, parameters of antioxidative capacity including the activities of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) , catalase (CAT) and total antioxidant capacity (TA) were monitored in blood, also. The mean age, height, weight, and BM! of subjects were 64.8 years, 151.1 em, 59.5 kg $26.0\;kg/m^2$, respectively. The mean SOD, GPx, and CAT activities were 138.5 U/ml, 1,273.8 U/ml and 314.3 kU/l respectively, and TA was 1.16 mmol/l without significant difference among different age groups. BMI was positively correlated with SOD activity (p < 0.01). SOD activity and CAT activity showed positive correlation with serum albumin (p < 0.05) and hemoglobin (p < 0.01). In conclusion, this study revealed that antioxidant enzyme activity holds a significant relationship with the blood parameters like as serum albumin and hemoglobin in postmenopausal women and further systematic research is needed to investigate the their relation mechanism.

Effect of Chromium Stress on Antioxidative Enzymes and Malondialdehyde Content Activities in Leaves and Roots of Mangrove Seedlings Kandelia Candel (L.) Druce

  • Rahman, Mohammed Mahabubur;Rahman, Motiur M.;Islam, Kazi Shakila;Chongling, Yan
    • Journal of Forest and Environmental Science
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    • 제26권3호
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    • pp.171-179
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    • 2010
  • Effect of chromium (Cr) stress on antioxidant enzyme activities and malondialdehyde (MDA) content were investigated in leaves and roots of mangrove (italic (L.) Druce) seedlings. Cr toxicity effects were also assessed on young seedlings. The seedlings were grown in green house condition for three months in nutrient solution with 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, and 3 mg $L^{-1}$ $CrCl_3$. This study showed that Cr led to the change of antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POD) and catalase (CAT) and activities at different concentrations. The activity of antioxidant enzymes in leaves of K. candel seedlings indicates that enzymes engaged in antioxidant defense in certain level especially in low concentration of Cr treatments. The activities of SOD and POD were activated by Cr in the root level, while CAT activity was inhibited. CAT activity decreased in response to high concentrations of Cr. In the present study indicated that SOD in root was active in scavenging the superoxide produced by Cr. Both in roots and leaves, an increase in malondialdehyde (MDA) content was observed with increase in metal concentration and exposure periods. Our finding indicated that the high concentration of excessive Cr supply may interfere with several metabolic processes of seedlings, causing toxicity to plants as exhibited by chlorosis, necrosis, photosynthetic impairing and finally, plant death.