Populus alba ${\times}$ P. glandulosa의 유전변이(遺傳變異)를 조사(調査)하기 위해 GOT, ACP, MDH, ADH의 isozyme을 starch gel에 의한 수평식(水平式) 전기영동법(電氣泳動法)으로 조사(調査)하였다. 염색결과(染色結果) 4종류(種類)의 동위효소(同位酵素)에 모두 band가 나타났으며 GOT의 band는 6 - 7 loci로 구분(區分)되고, 이 중 변이(變異)를 보인 다섯 loci에서 양친수(兩親樹)의 유전자형(遺傳子型) 추정(推定)에 의한 차대(次代)의 분리비(分離比)는 이론치(理論値)와 관찰치(觀察値)가 거의 일치(一致)하였다. ACP에 있어서 두 개의 locus가 있는 것으로 추정(推定)되며 A-zone은 monomorphic하게 나타났고, B-zone에서는 P. alba는 band가 없고 P. alba ${\times}$ P. alba는 $B_1$-band가 있으므로 교잡종(交雜種)에서 현사시나무 2호가 1호보다 유전변이(遺傳變異)가 크다는 것이 확인되었다. MDH는 변이(變異)가 없는 한 개 유전자좌(遺傳子座)와 변이(變異)가 있는 두 개의 유전자좌(遺傳子座)가 확인되었다. ADH는 교배양친수(交配兩親樹)가 각각(各各) 한 개의 다른 A-band만 나타내나 차대(次代)는 모두 3개의 band를 나타내어 양친수(兩親樹)는 homozygote, 차대(次代)는 heterozygote로 추정(推定)되고 중간(中間) band가 나타남으로 dimer로 판단되었다. 교배모수(交配母樹)인 은백양과 화분수(花粉樹)인 수원사시나무는 4가지 enzyme에 있어서 클론간(間)에 모두 변이(變異)가 없었다.
Carbonic anhydrase (CA)는 생물체 내에 널리 존재하는 아연(Zinc)을 함유한 금속성효소(metalloenzyme)이다. 이는 생리학적 조건에서 주로 $CO_2$의 hydration과 bicarbonate의 dehydration의 반응을 촉매하는 기능을 한다. 이러한 CA는 거의 모든 생물체 내에서 발견되고 16개 이상의 동질효소들이 포유류에서 분리되었다. 반면 포유류와 달리 포유류가 아닌 생물체, 특히 어류와 해양생물에 대한 CA와 그에 대한 동질효소에 관한 자료는 매우 제한적이다. 어류 내에서 CA는 삼투압과 산-염기 평형을 조절하는 매우 중요한 효소로 알려져 있으며, 또한 어류 내 조직 중의 하나인 아가미는 산-염기 조절, 이온 교환, 생체 내 pH 조절 등을 수행하는 부위로 알려져 있다. 실험생물인 무지개송어는 국내 해양 양식 산업 분야에 있어서 매년마다 그 생산량이 증가하는 매우 중요한 해양자원이다. 게다가 환경 독성 연구 분야에 있어서 그 실험적인 가치가 인정되어 국내 외에서 실험동물로 널리 이용되고 있는 어류이다. 아가미 조직에서 분리한 단백질에서 분자량 30 kDa, 등전점 7.0의 위치에 해당하는 특이적인 band 가 형성된 모습을 관찰할 수 있었고 이는 확인 결과 CA인 것으로 판명되었다. 또한 CA의 존재여부가 확인된 아가미 조직 내에서 세부적인 발현 위치를 파악하기 위해 진행한 면역조직화학 실험 결과 CA가 아가미의 상피세포내에 존재하는 것을 파악 할 수 있었다.
글루탐산염(Glutamate)은 척추동물의 중추신경계에서 중요한 흥분성 신경전달물질 중의 하나이다. 글루탐산염의 대사를 조절하는 사람 글루탐산염 탈수소 효소(hGDH)는 정신분열증(schizophrenia) 환자의 대뇌에서 발현이 증가한다는 연구들이 있었다. 본 연구에서는 정신분열증과 연관된 항정신성약물인 haloperidol, risperidone, (${\pm}$)-sulpride, chlopromazine hydrochloride, melperone, (${\pm}$)butaclamol, domperidone, clozapine에 의한 hGDH의 효소활성변화를 확인하고자 하였다. 우선, 유전자 재조합을 통해 hGDH 동종효소 hGDH1, hGDH2를 합성하였다. 합성된 hGDH1과 hGDH2에 대한 항정신성약물의 억제효과를 효소검사법(enzyme assay)을 통해 확인한 결과, haloperidol, (${\pm}$)-sulpride, melperone, clozapine에 의해 hGDH1과 hGDH2의 효소활성이 억제되었다. 또한, 단백질 인산화 효소 측정법(kinase assay)을 하여 haloperidol이 기질인 알파-케토글루타르산에 대하여는 비경쟁적 저해반응(noncompetitive inhibition)을, NADH에 대하여서는 반경쟁적 저해반응(uncompetitive inhibition)이 나타는 것을 확인하였다. 입체성 다른 자리 작동체(allosteric effector)인 L-leucine이 다른 정신병치료제에서는 hGDH2의 억제를 회복시켰지만 오직 haloperidol에서는 효소의 활성이 회복되지 않았다. 따라서 본 연구는 hGDH1과 hGDH2 에서 항정신성약물에 의한 효소활성 억제를 비교하여 확인하였으며, 중추신경계에서 haloperidol이 GDH 활성 조절과 함께 글루탐산 농도를 조절할 수 있다는 가능성을 제시한다.
소나무 수피와 잣나무 수피를 먹이로 사육한 북방수염하늘소(M. saltuarius)의 종령유충의 소화액을 추출하여 4가지 기질(${\alpha}$-naphthyl acetate, ${\beta}$-naphthyl acetate, ${\alpha}$-naphthyl butyrate, ${\beta}$-naphthyl stearate)에 대한 에스테라제(esterase) 활성도 변화를 조사하였다. ${\alpha}$-naphthyl acetate를 기질로 하여 조사한 결과 Est7이 잣나무수피를 먹인 유충에서 강하게 활성화되었다. 또한, ${\beta}$-naphthyl acetate와 ${\alpha}$-naphthyl butyrate 기질을 사용한 경우에도 Est6과 Est7이 잣나무수피를 먹인 유충에서 강한 활성이 관찰 되었다. 그러나 ${\beta}$-naphthyl stearate에서 활성화 되는 에스테라제는 관찰할 수 없었다. 추출한 소화액에 카바메이트계와 유기인계 약제를 처리한 경우 Est7을 포함하여 Est3과 Est6이 강하게 저해되는 것으로 나타났다. 또한, eserine을 처리한 경우 Est4, Est6, Est7에서 강한 활성저해가 관찰되었다. Methoprene, bornyl acetate, linal, cineol, citral을 소화액에 첨가한 경우 에스테라제의 활성저해는 관찰되지 않았으나 이상의 결과는 in vitro에서 실시된 실험으로 추후 in vivo에서 재검증이 필요 할 것이다.
본 연구의 목적은 파랑볼우럭(Lepomis macrochirus)에서 용존산소량(DO)을 급격하게 변화시켰을 때 젖산탈수소효소(EC 1.1.1.27, Lactate dehydrogenase, LDH) 동위효소들의 대사조절을 확인하는 것이다. 파랑볼우럭을 수조내에서 일정한 환경에 적응시킨 후 DO를 변화시켜 조직별 LDH 동위효소의 활성 및 하부단위체 A, B, C의 상대적 비율을 조사하였다. DO를 18 ppm에서 6 ppm으로 감소시켰을 때에 파랑볼우럭 골격근, 심장 및 뇌 조직의 LDH는 각각 12, 12 및 6시간 이내에 대조군의 활성으로 회복되었다. DO가 변화되면 LDH 활성이 변화됨으로써 보상을 빠르게 수행하였고 이는 환경변화에 적응할 때에 LDH가 중요한 기능을 담당하는 것으로 생각된다. 파랑볼우럭의 심장, 눈 및 뇌 조직에서는 하부단위체 A의 상대적 비율이 증가된 후 12시간까지 대조군의 하부단위체 비율과 유사하게 회복되는 경향을 보였다. 이는 DO가 변화된 초기에 하부단위체 A를 이용한 혐기적 대사가 증가된 것으로 생각된다. 또한 하부단위체 C는 하부단위체 B보다 A와 유사하다는 결과를 얻었다. 파랑볼우럭의 LDH는 하부단위체 A와 C가 진화상 유사한 것으로 보이며, 주로 하부단위체 A와 C를 포함하는 LDH 동위효소들이 혐기적 대사를 통하여 저산소 환경에 적응할 수 있도록 pyruvate reductase의 기능을 담당하는 것으로 사료된다.
노랑초파리 (Drosophila melanogaster) Oregon-R strain과 Kwangju strain에서 발생단계에 EK라 합성되는 효소의 양상은 다음과 같다. 1. Oregon-R strain 및 Kwangju strain의 발생 4단계에 따른 ADH isozyme pattern은 알에서 ADH 2, ADH 3, ADH 4가 나타났고, 유충 번데기 및 성충에서는 ADH 1, ADH 2, ADH 3, ADH 4, ADH 5가 모두 나타났다. 2. ADH isozyme의 단백질을 분석하여 보면 양극 방향으로 이동한 ADH 3, ADH 4, ADH 5가 대부분을 차지하고 음극 방향으로 이동한 ADH 1, ADH 2는 적은 비율로 나타났다. 한편 유충 번데기 및 성충에서 ADH 3은 Oregon-R strain과 Kwangju strain에서 가장 큰 비율로 나타나지만, ADH 4에 대해서는 Kwangju Strain이 Oregon-R strain 보다 훨씬 낮은 비율로 나타나는 것이 특이하였다. 3. 활성은 앞에서 가장 낮고 유충에서 높아지고 번데기에서 낮아서 성충에서 제일 높게 나타났다. Strain 별에서도 모든 발생단계에서 Kwangju strain이 Oregon-R strain보다 높게 나타났다. 이것을 활경요소에 의하여 변화될수 있는 것으로 추정된다.
This review covers current developments in molecular-based studies of the structure and function of carboxylesterases. To allay the confusion of the classic classification of carboxylesterase isozymes, we have proposed a novel nomenclature and classification of mammalian carboxylesterases on the basis of molecular properties. In addition, mechanisms of regulation of gene expression of carboxylesterases by xenobiotics, and involvement of carboxylesterase in drug metabolism are also described.
대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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pp.207.2-207.2
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2003
cAMP acts as a second messenger in the functional responses of various cells to hormones, cytokines and other agents. In turn, this nucleotide also modulates the signal transduction processes regulated by a range of cytokines and growth factors. The intracellular level of cAMP is regulated by a G protein coupled adenylyl cyclase and degradation is mediated by the phosphodiesterases (PDEs), a superfamily of enzymes that catalyze the hydrolysis of cAMP. (omitted)
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.301.2-301.2
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2002
The present study was done to determine the effect of trolox C. a hydrophilic analogue of vitamin E. on alteration in cytochrome P-450 (CYP)-dependent drug metabolism during ischemia and reperfusion. Rats were subjected to 60 min of hepatic ischemia and 5 h of reperfusion. Rats were treated intravenously with trolox C (2.5 mg/kg) or vehicle (PBS. pH 7.4), 5 min before reperfusion. Serum alanine aminotransferase and lipid peroxidation levels were markedly increased after ischemia and reperfusion. This increase was significantly suppressed by trolox C. (omitted)
Barley ${\alpha}$-amylase genes, amy1 and amy2, were separately cloned into the expression vector of $pPICZ{\alpha}A$ and recombinant Pichia strains were established by homologous recombination. Both AMYs from Pichia shared almost identical hydrolysis patterns on short maltooligosaccharides to result in glucose, maltose, or maltotriose. Against insoluble blue starch, AMY1 showed the highest activity at 0.1-5 mM calcium concentration, whereas 15-20 mM was optimal for AMY2. On the hydrolysis of soluble starch, unexpectedly, there was no significant difference between AMYs with increase of calcium. However, the relative activity on various starch substrates was significantly different between AMYs, which supports that the isozymes are clearly distinguished from each other on the basis of their unique preferences for substrates.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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