• 대한수의학회지
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• 제53권2호
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• pp.95-101
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• 2013

The study was carried out to evaluate and compare the immune responses in mice experimentally infected with either wild-type or isogenic mutants of Salmonella enterica serovars Enteritidis (SE), Salmonella Typhimurium (ST) and Gallinarum (SG). The mutant strains were constructed by allelic replacement of some virulence-associated genes in the wild-type strains. Seven-week-old female BALB/c mice were orally or intraperitoneally inoculated by injecting bacterial suspension. To evaluate the immune responses, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay were conducted with serum and fecal samples. As a result, the mice group infected orally with the SE mutant strain showed the highest level of specific IgA-secreting splenocytes, compared to the other groups. The peritoneally injected groups showed the greater levels of IgG1 than the orally injected groups, which was in a good agreement with the previous studies. In addition, the mutant infected groups had the similar secretion levels of antibodies with the wild-type infected groups. These results demonstrated that the SE mutant strain elicited humoral immune response as much as wild-type, implying that it can be useful as a delivery vehicle as well as a candidate of a live attenuated vaccine.

• 생명과학회지
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• 제15권4호
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• pp.641-646
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• 2005

Salmonella typhimurium TML이 Int-407 숙주세포에 부착하는 정도는 S. typhimurium이 낮은 농도의 철이 함유된 배지에서 배양되었을 때보다 LB 액체배지 또는 높은 농도의 철이 함유된 배지에서 생육한 것에서 약 10배 정도의 높은 수준으로 관찰되었다. 고농도의 철이 포함된 배양조건이 살모넬라가 숙주세포에 부착시키는 정도를 향상시키는데 반해, 칼슘, 코발트, 구리, 인산, 마그네슘 그리고 망간과 같은 다른 양이온은 그렇지 않다. 이것은 아마도 철이 Salmonella가 부착에 필요한 요소들의 발현을 활성화하는 역할을 하는 것으로 추정된다. 철 농도에 따른 부착정도의 차이들은 type 1 fimbriae, mannose resistant hemagglutinin과 flagellum등을 생성하지 않는 다양한 S. typhimurium 돌연변이주들에서도 관찰되는 것으로 미루어보아 이들 구조체들과 상관이 없는 밝혀지지 않은 어떤 인자가 부착성 증가에 관여하는 것으로 사료된다. fur유전자가 불활성화된 S. typhimurium 돌연변이주의 부착성이 야생형 Salmonella와 유사한 방식으로 철에 의해 조절되었는데, 이는 철 농도에 따른 부착성의 변화에 관여하는 잠재적인자의 발현이 Fur 단백질과 독립적으로 이루어진다는 것을 나타낸다.

• 한국균학회소식:학술대회논문집
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• 한국균학회 2015년도 추계학술대회 및 정기총회
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• pp.37-37
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• 2015

dsRNA was found in malformed cultures of Lentinula edodes strain FMRI0339, one of the three most popular sawdust cultivated commercial strains of shiitake, and was also found in healthy-looking fruiting bodies and actively growing mycelia. Cloning of the partial genome of the dsRNA revealed the presence of the RdRp sequence of a novel L. edodes mycovirus (LeV), and sequence comparison of the cloned amplicon showed an identical sequence to known RdRp genes of LeV found in strain HKA. The meiotic stability of dsRNA was examined by measuring the ratio of the presence of dsRNA among sexual monokaryotic progeny. More than 40% of the monokaryotic progeny still contained the dsRNA, indicating the persistence of dsRNA during sexual reproduction. Comparing the mycelia growth of monokaryotic progeny suggested that, although variations in the growth rate existed among progeny and virus infection was observed in highly actively growing progeny, there appeared to be a tendency toward a lower frequency of virus incidence in actively growing progeny. This study attempted to cure the edible mushroom L. edodes strain FMRI0339 of the L. edodes mycovirus (LeV) in order to obtain an isogenic virus-free fungal strain as well as a virus-infected strain for comparison. Mycelial fragmentation, followed by being spread on a plate with serial dilutions resulted in a virus-free colony. Viral absence was confirmed with gel electrophoresis after dsRNA-specific virus purification, Northern blot analysis, and PCR using reverse transcriptase (RT-PCR). Once cured, all of fungal cultures remained virus-free over the next two years. Interestingly, the viral titer of LeV varied depending on the culture condition. The titer from the plate culture showed at least a 20-fold higher concentration than that grown in the liquid culture. However, the reduced virus titer in the liquid culture was recovered by transferring the mycelia to a plate containing the same medium. In addition, oxygen-depleted culture conditions resulted in a significant decrease of viral concentration, but not to the extent seen in the submerged liquid culture. Although no $discernable phenotypic changes in colony morphology were observed, virus-cured strains showed significantly higher growth rates and mycelial mass than virus-infected strains. We were also explored effects of LeV on fruiting body formation and mushroom yield. The fruiting body formation yield of virus-free L. edodes was larger than virus-infected L. edodes. These results indicate that LeV infection has a deleterious effect on mycelial growth and fruiting body formation. In addition, we have been investigated host-parasite interaction between L. edodes and its mycovirus interaction to study viral mechanism by establishment of proteomics.

• 생명과학회지
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• 제15권6호
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• pp.955-960
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• 2005

메트로니다졸은 인체 위장질환의 원인균인 헬리코박터 파일로리를 박별하기위해 처방하는 주요 약제이다 그러나 인체로부터 분리한 헬리코박터 파일로리 균주는 메트로니다졸에 내성을 가지는 경우가 일반적이며, 이러한 내성원인은 이 균주의 염색체 상에 존재하는 두 종류의 nitroreductase 유전자인 rdxA와frxA 유전자가 비활성화됨에 따라 유발된다. 본 연구에서는 헬리코박터 파일로리 균에서 rdxA 유전자에 변이를 도입하여 메트로니다졸에 내성을 가지는 균주를 구축하여, 메트로니다졸 내성이 균주에 미치는 생물학적 영향을 관찰하고자 하였다. In vitro상에서 메트로니다졸 내성균주는 대조균과 비교하여 exponential phase에서는 거의 차이 없이 증식하였으나 stationary phase에서는 빠르게 생육활성을 잃는 것을 관찰할 수 있었다. 또한 생쥐를 이용한 동물 실험에서 메트로니다졸 내성균주는 생쥐의 위장 내에서 서식하는 능력을 상실함을 알 수 있었다. 그러나 이러한 생육 활성을 회복시켜주는 compensate템 mutation을 가진 균주를 쉽게 얻을 수 있었으며 이 균주는 생쥐에 감염시키면 위장 내에서 서식하는 능력을 회복함을 알 수 있었다.

• 미생물학회지
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• 제45권3호
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• pp.263-267
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• 2009

세포정지기 및 스트레스에서 유도되는 RpoS 인자는 다양한 세포반응에 관여하는 유전자의 전사발현에 관여하는 전자조절인자이다. 대장균에서 proline의 생합성에 관여하는 유전자인 proBA와 proC 발현을 세포생장 주기별로 조사해 본 결과, 세포지수기에서는 proBA와 proC 유전자의 발현이 유도되는데 비해, 세포정지기에서는 이 세유전자의 전사발현이 극적으로 저해되었다. 그러나 rpoS 돌연변이를 야생형 대장균에 도입한 결과 proline 생합성에 관여하는 유전자인 proBA와 proC 유전자의 발현이 세포정지기에서 저해되지 않았다. 이러한 결과는 RpoS가 proline 생합성에 관여하는 proBA와 proC 유전자의 전사발현에 음성효과를 미치고 있음을 의미한다. 한편 rpoS 돌연변이 균주에서는 proline 외에도 threonine, methionine, lysine, arginine 등의 아미노산이 야생형 대비 2배 이상 생합성이 증가되었는데, 이는 rpoS 대장균 돌연변이 균주가 아미노산의 대량생산에 이용될 수 있음을 의미한다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제12권2호
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• pp.296-300
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• 2002

Bacterial cell surface components are the major factors responsible for pathogenesis and bioremediation. In particular, the surface of a Gram-negative bacterium cell has a variety of components compared to that of a Gram-positive cell. In our previous study, we isolated an isogenic mutant of Bradyrhizobium japonicum, which exhibited altered cell surface characteristics, including an increased hydrophobicity. Polyacrylamide gel electrophoretic analysis of the lipopolysaccharide (LPS) in the mutant demonstrated that the O-polysaccharide part was completely absent. Meanwhile, a gel permeation chromatographic analysis of the exopolysaccharide (EPS) in the mutant demonstrated that it was unaltered. Since LPSs are known to have several anion groups that interact with various cation groups and metal ions, the mutant provided an opportunity to examine the direct role of LPS in metal binding by B. japonicum. Using atomic absorption spectrophotometry, it was clearly demonstrated that LPS was involved in metal binding. The binding capacity of the LPS mutant to various metal ions $(Cd^{2+},\;Cu^{2+},\;Pb^{2+},\;and\;Zn^{2+})$ was 50-70% lower than that of the wild-type strain. Also, through an EPS analysis and desorption experiment, it was found that EPS and centrifugal force had no effect on the metal binding. Accordingly, it would appear that LPS molecules on B. japonicum effect the properties, which precipitate more distinctly metal-rich mineral phase.

• 한국양식학회지
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• 제19권3호
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• pp.166-172
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• 2006

동일 종내 미꾸라지(Misgurnus mizolepis) 웅성발생성 인공처녀생식(intraspecific androgenesis)기술을 개발하기 위해 미꾸라지 난 유전물질의 불활성화와 이에 따른 웅성발생성 반수체 유도 조건을 최적화하였다. 다양한 자외선(UV)농도$(0\sim25,650ergs/mm^2)$를 이용하여 미꾸라지 난의 유전학적 불활성화를 시도하였으며 수정률, 부화율 및 반수체 출현율을 평가한 결과 10,800 ergs의 농도에서 가장 우수한 반수체 유도 효율을 보였으며 최초 처리 난 중 50%이상의 웅성발생성 반수체 수율을 확보할 수 있었다. 웅성발생성 개체는 전형적인 haploid syndrome의 특징을 나타내었고 flow cytometry분석 결과 정확히 미꾸라지 반수체(1.4 pg/cell)의 DNA함량을 보유하는 것으로 나타났다. 인위적으로 삽입된 형질전환 유전자 표지를 이용하여 부계 특이적인 인공처녀생식 여부를 확인하였으나 일부 반수체자어들에서$(8\sim11%)$ 모계 유전물질의 잔류가 검출되었다.