해양세균으로부터 superoxide dismutase를 생산하는 균주를 광화학적 superoxide ion 형성 및 nitrite정량방법으로 검색하여 고활성 균주 B-446을 확보하고 본 균주로부터 35-75% ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sephadex A-25 ion exchange chromatography, Sephadex C-200 gel filtration chromatography, High-Q anion exchange chromatography그리고 HPLC-GPC를 이용하여 수율 6%, 정제도 32.3 배의 정제된 SOD를 얻었으며 정제 과정중 효소활성 분석에 본 광화학적 superoxide ion생성 방법으로 사용하였다.
Soybean $\beta$-amylase was purified by DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephadex G-100 gel chromatography, CM Sephadex C-50 ion exchange chromatography and CM Sephadex C-50 ion exchange rechromatography The purified enzyme showed 1, 020 unit/mg of specific activity. The purified enzyme was identified as homogenious by disc PAGE and analysis of reaction product.
Complex, ill-defined mixtures of natural origin are often used as nutrients in the production of biological products through microbial fermentation. Product yields are affected by variation in these natural products. Yeast extract is a typical example of these natural products. Since it is a mixture of amino acids, peptides and nucleic acids, its composition is not well characterized. In this study, we investigated the properties of thiamine hydrochloride, riboflavin and pyridoxine hydrochlride in yeast extract by using a gel filtration chromatography, ion exchange chromatography and high performance liquid chromatography. Yeast extract solution was fractionated by gel filtration chromatography and ion exchange chromatography, and then, each fraction was analyzed by using a high performance liquid chromatography.
새로운 분리공정으로써 크로마토그래피를 이용하고자 하는 노력들이 활발하게 진행되어지고 있는 가운데, 기존의 전통적인 크로마토그래피를 더욱 발전시킨 시도들이 행하여지고 있다. 여기에 부합하여 약 20여년 전부터 연구되기 시작한 Displacement ion-exchange chromatography는 현재 활발한 연구가 진행되어지고 있으며, 전형적인 preparative chromatography에 비해 많은 장점을 가지고 있다. Displcement ionexchange chromatography는 displacer를 사용하여, 고농도의 원료 물질을 효율적으로 단시간내에 처리할 수 있는 공정으로 기존의 preparative chromatography의 문제점이었던 꼬리끌기 현상과 희시현상을 대폭 감소시킬 수 있게 되었다. 따라서, displacement ion-exchange chromatography 공정에서의 가장 큰 과제인 비선형 등온선 영역에서의 거동과 분리공정 조작선의 결정 및 고성능의 displacer에 대한 연구가 요구되어지고 있으며, 본 총론에서는 이온교환 크로마토그래피 공정에서 displacement ion exchange chromatography를 이용한 단백질의 분리에 대하여 고찰하고자 한다.
The polysaccharides were extracted from fruiting body, mycelia, and cell-free broth of Agaricus blazei Murill. The crude polysaccharides were obtained by the ethanol addtion. They were further purified using ion-exchange chromatography and gel chromatography. Ion-exchange chromatography using DEAE-cellulose column separated neutral and acidic polysaccharides. Neutral polysaccharides were then purified with gel filtration chromatography. For single peak obtained from gel filtration chromatography was molecular weight was measured with Sepharose CL-6B. The same procedure with acidic polysaccharides were performed to get the purified polysaccharides.
Ligand Exchange를 원리로 하여 Nickel Ion을 포함하고 있는 Chelating Resin인 dowex A-1을 써서 Elution Chromatography에 의하여 Amine의 혼합물을 분리하는 방법을 기술하였다. 이 실험에서 암모니아 수용액을 Eluent로 썼다. 이 방법은 특히 방향족아민의 분리에 효과 있음을 알게 되었다.
라이소자임은 용균 작용, 조직 회복 과정의 촉진 등의 작용을 하며 난백 중에 0.3% 함유되어 있다. 난백에서 라이소자임을 분리하는 방법으로 친화성 크로마토그래피, 이온교환크로마토그래피, 한외여과법 등이 있는데 이 중 이온교환크로마토그래피가 가장 많이 사용된다. 라이소자임을 양이온 젤이 충전된 유리 칼럼에서 분리 정제할 때 최적의 pH와 온도 조건을 찾는 것을 실험 목표로 하고, ASPEN Chromatography 전산 모사의 결과와 비교하였다. 실험에 사용되는 완충용액은 인산완충용액이었고 pH를 5~8로 변화를 주어 상온에서 실험하였고, 가장 분리가 잘 이루어진 pH에서 온도를 $5^{\circ}C$ 간격으로 $25{\sim}40^{\circ}C$로 변화시켜 실험하였다. RP-HPLC (Reversed phase High Performance Liquid Chromatography) 분석을 통해 라이소자임의 체류 시간을 확인하였고, OriginPro 8을 이용해 용출 단계에서 크로마토그램의 면적을 비교하여 라이소자임의 양을 정량분석하였다. 결과를 분석한 결과, pH 5일 때, 온도가 $25^{\circ}C$에서 가장 많은 양의 라이소자임이 분리되었다.
To improve the extractability of carnosine and the levels of pro-oxidants such as iron in eel (Anguilla japonica) extracts, we examined the effects of extraction time, temperature, ion exchange chromatography and ultrafiltration (UF). The respective protein and total iron were reduced approximately 55 and 60% at 60$^{\circ}C$, 63 and 70% at 80$^{\circ}C$, 68 and 76% at 100$^{\circ}C$ and 82 and 48% with ion exchange chromatography, respectively, compared to the untreated extract. However, there was no significant difference in the carnosine levels in the eel extracts. Ultrafiltration reduced the protein content of the extract by 52% compared with the untreated extract. UF reduced the protein contents of the samples from 60, 80, and 100% heat treatment and ion exchange chromatography treatment by 27, 50, 46 and 47%, respectively. UF reduced the total iron contents of the identical four treatments by 14, 22, 23, and 43%, respectively, while UF increased the carnosine by 23, 17, 20, and 6%, respectively.
저온에서 최적 생육을 보이는 저온성 균주를 남극해양에서 분리하여 생화학적 특성 및 165 rRNA 염기서열로부터 Shewanella sp.에 속하는 균주로 동정하고 Shewanella sp. L93으로명명하였다. 본 균주에서 생산되는 저온성 세포외 단백질 분해 효소(extracellular protease)를 ammonium sulfate precipitation, High-Q column chromatography, 일차 gel permeation chromatography, BioScale Q2 ion exchange chromatography 및 gel permeation chromatography를 통하여 purification fold 19.3, yield 0.7 %로 정제하였고 그 특성을 조사하였다.
인삼 성분중 생리적 활성을 가지고 있는 oligopeptide를 검출하고 분리하기 위하여 물 추출액을 ultra-filtration 한 후 gel filtration, ion-exchange chromatography 및 thin layer chromatography 등을 행하였다. 인삼 물 추출액으로부터 고분자 물질을 제거한 ultra-filtrate는 epinephrine에 의해 유도된 fat cell의 lipolysis를 저해하는 antilipolytic activity를 보유하고 있었으며 Sephadex G-25 gel filtration에 의해 3개 fraction으로 나뉘어졌다. 이중 첫번째 fraction(S-FI)만이 peptide 성분을 함유하고 있었으며 saponin 및 당도 검출되었다. S-FI fraction은 $Dowex\;50{\times}2\;ion-exchange\;chromatography$에 의하여 6개의 $fraction(P-F1{\sim}P-F6)$으로 분리되었고 TLC검정 결과 P-F2 fraction이 peptide fraction으로 antilipolytic를 보유하고 있었으며 TLC로 분리한 6개 spot는 각각 가수 분해한 전후의 TLC pattern을 비교해 본 결과 모두 oligopeptide임이 밝혀졌다. S-FI fraction에 존재한 saponine과 당은 P-F1 fraction 에서 모두 용출되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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