차가버섯 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 및 물 분획물 그리고 수용성 다당과 불용성 다당 I, II에 대하여 항돌연변이원성 실험과 암세포성장억제 실험을 행한 결과, 각 시료에서 돌연변이원성은 없는 것으로 나타났으며 직접변이원인 MNNG와 4NQO, 간접변이원인 B[a]P와 Trp-P-1 모두에서 시료농도 50$\mu\textrm{g}$/plate에서 불용성 다당 II가 90% 이상의 높은 억제효과를 나타내었다. 또한 암세포 성장 억제 실험에서는 에틸아세테이드 분획물에서 다른 분획이나 시료들보다 시료농도 4 mg/mL에서 A549, AGS, 그리고 MCF-7극 세포에 대하여 각각 90.8%, 94.3%, 83.5%의 높은 암세포 성장억제 효과를 나타내었다.
차가버섯(Inonotus obliquus) 종균을 살아있는 자작나무(Betula platyphylla var. japonica)에 접종하여 자실체 덩어리가 형성되는 것을 확인할 수 있었다. 형성된 자실체 덩어리는 국내에서 채집한 자실체 덩어리와 비슷한 모양이었으며 단지 그 크기가 작았다. 직경은 1.1~4.8 cm를 나타내었고, 높이는 0.5~2.0 cm이었다. 접종 후 5년 정도의 기간이면 자실체의 수확이 가능하리라고 예상되었지만, 자실체의 생장 등을 고려하여 경제적으로 적정한 수확시기 결정이 필요하다.
Streptozotocin으로 당뇨가 유발된 흰쥐에 차가버섯 균사체를 2주간 체중 ka당 200 mg으로 경구투여시킨 후 혈장 glucose, total cholesterol, triglyceride, ALT, 및 AST 활성을 관찰하였고, 차가버섯 균사체의 일반성분을 조사하였다. 그 결과 체증증가는 당뇨 대조군에 비해 약 23.5% 증가하였고, 식이섭취량은 21.0% 낮게 나타났으며, 간장 무게는 18.1% 정도 감소하였다. 혈장 glucose 농도는 차가버섯 균사체 투여군이 당뇨 대조군보다 23.1%가 유의하게 감소하였으며, 혈장 total cholesterol과 triglyceride는 각각 12.6%와 22.6%로 낮게 나타났다. 또한 혈장 ALT와 AST 활성은 당뇨 대조군에 비해 차가버섯 균사체 투여군이 27.6%와 21.9% 낮은 활성을 보였다. 상기와 같은 항당뇨 활성을 가진 차가버섯 균사체의 일반성분을 분석한 결과 조회분 5.55%, 조지방 2.35%, 조단백 28.29%, 탄수화물 9.53% 및 식이섬유 54.28%로 구성되어 있었다.
차가버섯의 균사체 생장과 세포외 다당체 생산을 위한 최적의 배양조건을 조사하고, 세포내 외 다당체의 항보체 활성과 대식세포의 lysosomal enzyme 활성을 관찰하였다. 균사체 생장과 세포외 다당체 생산을 위한 최적 pH, 온도, 및 교반속도는 각각 5.5, $25^{\circ}C$, 150 rpm으로 나타났으며, 배양기간은 11일째 최대 균사체 생장(10.89 g/l)과 세포외다당체 생산(1.25 g/l)을 보였다. 항보체 활성은 세포내 외 다당체의 처리 농도가 높을수록 활성이 증가함을 보였고, 대식세포의 lysosomal enzyme 활성은 $100{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군에 비해 세포내 다당체는 약 2.2배, 세포외 다당체는 약 2배 정도 증가하였다.
Water vapor adsorption kinetics of Inonotus mushroom powders were investigated in temperature and water activity ranges of 20 to 40$^{\circ}C$ and 0.30 to 0.81, respectively. Initial water vapor adsorption rate of mushroom powders increased with increases in temperature and water activity. The temperature dependency of water activity followed the Clausius-Clapeyron equation. The net isosteric heat of sorption increased with an increase in water activity. Water vapor adsorption kinetics of the mushroom powders can be well described by a simple empirical model. Temperature dependency of the reaction rate constant followed the Arrhenius relationship. The activation energy ranged from 56.86 to 91.35 kJ/mol depending on water activity. Kinetic compensation relationship was observed between k$_o$ and E$_a$ with the isokinetic temperature of 790.27 K.
오대산의 1,100 m 부근에 자생하는 사스래나무에서 차가버섯을 채집하였다. 나무의 흉고직경은 $10{\sim}50$ cm이었으며, 차가버섯 균핵의 크기는 $8{\times}5{\sim}20{\times}16$ cm이었다. 시험 균주들과 NCBI에 등록되어 있는 Inonotus obliquus 균주 간의 유연관계가 아주 가까운 것으로 확인되었다. 그리고 NCBI 등록균주들을 제외한 10가지 균주 모두 ITS 분석에서 높은 상동성을 보였다. 균사생장력은 균주간에 큰 차이를 보였다. KFRI 744가 가장 빠른 생장력을 보였으며, KFRI 739가 가장 낮은 생장력을 보였다. 그리고 KFRI 744와 739 간에는 거의 두 배 가까운 생장력의 차이가 발생한 반면에 KFRI 735와 738 간에는 차이가 거의 없었다. 중량감소율은 KFRI 744가 가장 높았으며, KFRI 741이 가장 낮았다. 대부분의 대치배양 조합에서 대치선이 형성되었지만 KFRI 740과 741, KFRI 742와 743 조합에서는 대치선이 형성되지 않았다.
The effects of various carbon sources on mycelial growth and polysaccharide synthesis of the medicinal fungus Inonotus obliquus in liquid fermentation were investigated. After 12-d fermentation, mycelial biomass, polysaccharide yield, and polysaccharide content were significantly higher in Glc+Lac group (glucose and lactose used as combined carbon source) than in other groups. Crude polysaccharides (CIOPs) and the derivative neutral polysaccharides (NIOPs) were obtained from mycelia fermented using Glc, fructose (Fru), Lac, or Glc+Lac as carbon source. Molecular weights of four NIOPs (termed as NIOPG, NIOPF, NIOPL, and NIOPGL) were respectively 780.90, 1105.00, 25.32, and 10.28 kDa. Monosaccharide composition analyses revealed that NIOPs were composed of Glc, Man, and Gal at different molar ratios. The NIOPs were classified as α-type heteropolysaccharides with 1→2, 1→3, 1→4, 1→6 linkages in differing proportions. In in vitro cell proliferation assays, viability of RAW264.7 macrophages was more strongly enhanced by NIOPL or NIOPGL than by NIOPG or NIOPF, and proliferation of HeLa or S180 tumor cells was more strongly inhibited by NIOPG or NIOPGL than by NIOPF or NIOPL, indicating that immune-enhancing and anti-tumor activities of NIOPs were substantially affected by carbon source. qRT-PCR analysis revealed that expression levels of phosphoglucose isomerase (PGI) and UDP-Glc 4-epimerase (UGE), two key genes involved in polysaccharide synthesis, varied depending on carbon source. Our findings, taken together, clearly demonstrate that carbon source plays an essential role in determining structure and activities of I. obliquus polysaccharides by regulating expression of key genes in polysaccharide biosynthetic pathway.
각종 산소 라디칼들이 생체내의 호흡효소계나 산화환원계에서 생성되어 노화와 각종 질병과 유관한 사실이 밝혀져 감에 따라 이들의 소거를 위한 항산화물질에 대한 관심이 높아지고 있는 시점에서, 본 논문에서는 차가버섯의 대표 유효성분인 항산화 성분을 최대로 추출해내기 위한 효과적인 추출법을 시도하고자 실행하였다. 차가버섯 건조분말을 8$0^{\circ}C$에서 8시간 추출한 것을 1차 추출물, 1차 추출 후 그 잔사물에 물을 첨가하여 10$0^{\circ}C$에서 8시간 추출한 것을 2차 추출물, 2차 추출 후 남은 잔사물에 물을 첨가하여 12$0^{\circ}C$에서 8시간 추출한 것을 3차 추출물로 하여서, DPPH자유 라디칼에 대한 전자공여능, ABTS$.$$^{+}$ 라디칼 양이온 소거능, 리놀레산 자동산화 저해 효과를 봄으로서 항산화능을 측정하였다. 결과에서 항산화력은 1차 추출물이 가장 낮았고 3차 추출물이 가장 높았고, 3차 추출물은 페놀 화합물과 플라보노이드 함량이 1차나 2차 추출물보다 유의적으로 많았고, 페놀화합물 합량은 라디칼 소거능 및 리놀레산 자동산화 저해효과와 상관관계가 높은 것(r=0.960∼0.980, regression analysis)으로 나타났다. 또한 각 온도에서의 추출물을 혼합하여 지방산화 촉진인자인 3종의 활성산소종(KO$_2$, $H_2O$$_2$, $.$OH)과 금속 이온(Fe$^{2+}$, Cu$^{2+}$) 존재 하에서 항산화 효과를 TBARS값으로 측정한 결과, 차가추출물이 모두의 경우에서 TBARS값을 낮추었으며 특히 $.$OH와 Fe$^{2+}$ 이온에 대하여 탁월한 항산화능을 보였다. 이상의 결과로 미루어 보아 자유 라디칼로 인해 야기되는 지방을 비롯한 그 산화물에 대하여 3단계 온도 추출법에 의한 차가버섯 추출물은 매우 유효한 항산화제로서 작용할 수 있을 것으로 사료되어진다.
Objectives : This study was conducted to investigate the effects Innotus obliquus on the cytokine expression in Raw 264.7 cells. Methods : In Raw 264.7 cells stimulated with lipopolysaccaride(LPS) to Mimic inflammation, Innotus obliquus ethanol extract inhibited nitric oxide production in a dose-dependent manner and abrogated inducible nitric oxide sythase(iNOS) and cyclooxigenase (COX-2). The levels of cytokines were analyzed by sandwich immuno assays. Results and Conclusions : Results provided evidence that Innotus obliquus inhibited the production of IL-b, and IL-6 in Raw 264.7 cells activated with lipopolysaccharide (LPS). These finding suggested that Innotus obliquus can produce anti-inflammatory effect, which may playa role in adjunctive therapy in Gram-negative bacterial infections.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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