본 연구에서는 해양생물 중 대표적 패류에 속하며 게두라고 불리우는 키조개를 추출, 각 용매별로 분획하여 암세포 성장억제 효과와 QR 유도활성 효과 등 각 생리활성효과에 대해 살펴보았다. 단백질이 많은 저칼로리 식품으로, 필수 아미노산과 철분이 많아 동맥경화와 빈혈예방에 좋다고 알려진 키조개의 암세포 성장억제에 대한 실험결과, 4종의 인체 암세포주 HepG2, HeLa, MCF-7 및 HT-29에서 모두 시료첨가 농도에 의존적으로 성장저지 효과가 나타났고, methanol 분획층인 APMM에서 괄목할 만한 높은 효과를 나타냈다. 특히 HeLa 세포주에서는 저첨가농도인 120 $\mu$g/mL에서 이미 $90.45\%$의 높은 세포독성 효과를 보였고, 다른 세포주들에서도 첨가농도별 효과의 차이는 있었으나 거의 유사한 세포성장 억제효과를 볼 수 있었다. 한편, 사용한 4가지 암세포주중 유일하게 quinone reductase를 가지고 있는 HepG2를 이용하여 quinone reductase 효소유도 활성여부를 측정한 결과 분획물 첨가농도를 20, 40, 60 및 80 $\mu$g/mL로 소량을 첨가하였음에도 40 $\mu$g/mL에서 이미 1.5배의 높은 QR 유도효과가 나타났으며, 농도를 증가시킬수록 그 효과가 증가하여 최종농도인 80 $\mu$g/mL에서는 약 2.0배의 QR 유도활성을 나타내었다. 이와 같은 실험결과에서, 패류인 키조개의 생리활성을 이용한 여러 유용한 기능성 식품의 개발이 기대되어진다.
자유생활 아메바인 Naegleria fowleri는 비강을 통해 인체에 들어와 출혈성 수막뇌염을 일으켜 감염된 사람의 대부분을 일주일 이내에 사망하게 하는 원충이다. 이 실험에서는 N. fowleri에 특이한 단세포군 항체를 만들어 이의 특성 및 그 이용 가능성을 알아보고자 하였다. 7 종류의 단세포군 항체(Nf 1, Nf 2, NE 256, Nf 279, Nf 27, Nf 154, Nf 137)를 제조하였는데 각각의 isotope은 IgGl이 두 종류(Nf 27, Nf 154), IgG3가 1 종류(Nf 137), IgA가 4 종류(Nf 1, Nf 2, Nf 256, Nf 279)이었다. 이들 항체를 N. fwoleri와 다른 종류의 아메바를 항원으로 하여 효소표식 면역검사법을 시행하여 Nf 1 및 Nf 256 항체를 제외한 5종류의 항체가 N. fowleri에 특이한 항체임을 확인하였다. 또한 간접 형광항체법을 통하여 NF 256 항체를 제외한 6 종류의 단세포군 항체가 세포막의 일부에 결합하였음을 관찰하였다. Nf 154 항체를 이용한 immunoperoxidase 염색에서도 세포막의 반응을 관찰하였다. 단세포를 항체가 N. fowleri를 응집시키는지 알아보고자 항체를 N. fowleri 영양형과 반응시켰더니 Nf 27 항 체를 제외한 5 종류의 단세포를 항체에 의해 응집이 일어남을 알 수 있었으며 응집된 덩 양형을 보체로 처리한 후 CGVS배지에서 배양하였더니 영양형의 증식이 억제되었다. 또한 2종류의 단세포군 항체(Nf 2, Nf 154)는 조직 세포(Chinese hamster ovary cell: CHO)에 대한 N.fowleri의 세포독성을 저하시켰다. 단세포군 항채와 반응하는 항원의 분자량을 알아보고자 EITB(Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot)를 시행하였는데 Nf 279 항체는 25 kDa 및 28 kDa, Nf 154 항체는 43 kDa, N( 137 항체는 29 kDa에 해당되는 분획에서 항원항체반응을 나타내었다. 이상의 성적을 종합하면 N. fowleri에 대한 7종류의 IgG., IgG3 및 IgA 단세포군 항체를 생산하였다. 그중 Nf 256 항체를 제외한 6 종류는 N. fowleri이 세포막 성분중 28 kDa-43 kDa의 항원과 반응하는 특이한 항체임을 관찰할 수 있었다. 또한 이 단세포를 항체들은 영양형을 응집시키며, 시험관 내에서의 증식을 억제시키고 CHO 세포에 대한 N. fowleri의 세포 독성을 저하시키는 성질을 가지고 있음을 알 수 있었다.
본 연구에서는 지금까지 알려진 바와 달리 항균활성의 적용범위가 모호한 actinonin을 대표적 식중독균인 B. cereus에 적용함으로써 식중독균에 대한 항균 효과에 대해 연구하였다. 계대배양된 대수기의 B. cereus에 actinonin을 처리하여 생장 저해 여부를 확인하였고, 96-well plate를 이용한 broth micro-dilution 방법과 agar disk diffusion 방법을 통해 actinonin의 B. cereus에 대한 항균활성을 측정해본 결과, actinonin의 농도에 비례하여 B. cereus의 생장이 저해되는 것으로 나타났다. 또한, actinonin의 처리에 따른 B. cereus의 세포 독성 측정 결과 actinonin이 B. cereus의 세포 독성 또한 억제하는 것을 확인하였다. 따라서, actinonin은 천연항균물질로서 B. cereus에 의한 식품 오염을 억제하고 식중독 예방 및 잠재적 치료제로서 적용 될 가능성이 있는 것으로 관찰되었으며, 나아가 다른 식중독균들에 대한 적용 가능성 탐색과 관련한 연구가 필요할 것으로 생각된다.
고혈당으로 유도된 염증반응 모델에서 유황양파즙(onion juice)의 항염증 효능을 평가하였다. 고혈당(HG, 25 mM glucose) 조건하에서 48시간 배양된 THP-1 세포들은 정상혈당(NG, 5.5mM glucose) 조건의 세포들에 비해 유의적으로 낮은 세포 생존율을 보였으나, $50-150{\mu}L$ 유황양파즙을 함께 처리하자 NG군 수준으로 회복되었다. 이는, 유황양파즙이 고농도 당에 의한 세포독성을 완화시켜 주었음을 시사한다. 고혈당으로 유도된 HG군에서 염증성 사이토카인 TNF-${\alpha}$는 NG군의 290% 수준까지 분비되어 유의적으로 증가하였으나, $50{\mu}L$ 유황양파즙 처리로 TNF-${\alpha}$의 분비 수준이 전반적으로 저해되었으며, TNF-${\alpha}$의 발현 수준 역시 낮아져, 유황양파즙이 고혈당에 의한 염증반응을 저해하였음을 시사해 주었다. 이는 유황양파즙에서 보고된 높은 수준의 플라보노이드에 의한 효과로 일부 해석되었다. 본 연구는 식품 섭취를 통한 당뇨 및 당뇨합병증 예방의 가능성을 보여줌으로써, 식이인자의 항염증 효능에 관한 향후 연구들의 기초적 근거 자료로 활용될 수 있다.
홍삼추출액의 신경성체줄기세포 성장과 생존에 미치는 영향을 분석하고자 human neuronal stem cell line인 F3 cell을 배양한 후 홍삼추출액을 여러 농도로 희석하여 MTT assay로 cell viability를 측정하였고 FACS analysis로 cell Cycle변화를 측정하였다. 특정한 농도에서는 세포가 증식되는 경향을 보였으며 농도가 증가되면서 viability가 감소되는 현상을 확인할 수 있었다. Cell cycle 분석상 세포증식시에는 5 phase 및 G2/M phase가 증가되는 경향을 보였고, viability가 감소되면서 S phase가 감소되고 G0/G1 phase 가 증가 되었다. 한편 DNA fragmentation이 cell viability감소에 따라 증가되었으나, Caspase 3 activation 또는 Bax expression과는 관련성이 적었다.
The present study was carried out to sex effectively mouse and rabbit embryos using rat H-Y antiserum and to improve the rate of rat producing H-Y antiserum with H-Y antibody. The H-Y antiserum was prepared from inbred SD strain female rat immunized by intrasplenic injection and subsequent intraperitioneal booster of testis cell of syngenic male newborn rat. the titer of antiserum was identified by in vitro cytotoxicity test of mouse embryos. The rabbit embryos exposed to the H-Y antiserum was classified to the developed (H-Y negative) or delayed (H-Y positive) group. The H-Y negative rabbit embryos were transferred to recipients and sex of offspring was examined. 1. When mouse embryos were exposed to the rat H-Y antisera, the ratio of embryos developed vs delayed was various. The H-Y antisera where the ratio of embryos developed vs delayed showed the range of 40~60% were recognized as having titer of H-Y antibody. 2. When the subsequent intraperitioneal boosters were followed after priming of intrasplenic injection of H-Y antigen, the rate of rat producting the H-Y antiserum with H-U antibody was 13, 27, 70 and 73% in control, 1st B, 2nd B and 3rd B, respectively. The rate in 2nd B and 3rd B was significantly(P<0.05) higher than that in control and 1st B. 3. When the rabbit morulae were exposed to the rat H-Y antiserum with H-Y antibody, the ratio of morulae developed versus delayed was 42:58% and it was close to the natural sex ratio 50:50%. It was confirmed that the rat H-Y antiserum was cross reactive to the rabbit morulae. 4. When the H-Y negative rabbit embryos were transferred to the recipients, the pregnancy rate was 50% and 83% of the newborns were females. In conclusion, the rat H-Y antiserum with high titer of H-Y antibody was able to be obtained from the female rat immunized by the intrasplenic injection followed by the second intrapent oneal booster of testis cells at a week interval. When the rabbit embryos negative to the rat H-Y antiserum were transferred, 83% of the newborns were females.
Objectives : NK cells are spontaneously cytotoxic lymphocytes. These are not only important parts in the first line of defence against bacterial and viral infections of outside, but they may also play a critical role in chronic viral diseases. NK cells kill their targets spontaneously, without the need for prior sensitization and class I MHC restriction by the regulation of cytolytic functions and secretion of a variety of cytokines, such as interleukin-12(IL-12), MCP-1, IL-6, TNF-${\alpha}$, IFN-${\gamma}$. In addition, macrophage and NK cells cooperate through the production of cell mediates. These cooperation and modulation are one of major factors to prevent for evading immune surveillance of cancer. Hence, it could be assumed that if any candidate to enhance activities of macrophage and NK cell, it is considered as a potentially useful agents against cancer. Methods : In our study, to investigate effect of fermented soybean extracts by Lactic acid bacteria (SFE, soybean fermented extracts) work on intestinal immune cell to maintain general immune modulating and anti-cancer activity. We analyzed NK cytotoxicity assay and gene expressions of cytokine related with macrophage and NK cell activity. Results : In vitro experiment, SFE was verified as safety material for cell toxicicty to tumor cell strain without any toxicity of tumor growth inhibition and various cell strain. Effects of macrophage activity stimulating directly by SFE measured induced cytokine. The studies showed that IL-12 production by stimulation of SFE depended on concentration from 0.16mg/mL to 0.63mg/mL with non toxicity to cell, and it was the best activity at 0.63mg/mL. Besides, the effective concentration of SFE producing TNF-${\alpha}$ is similar to IL-12, but it was the best activity at 1.25mg/mL. The level of MCP-1, IL-6 and IFN-${\gamma}$ depended on concentration from 0.16mg/mL to 10mg/mL, IFN-${\gamma}$ showed the best activity at the effective concentration of 0.63mg/mL. With the result of NK cell activity measurement, the spleen cell of mouse injected SFE had 1.5 times higher killing effect than non injected cell. Conclusions : The result of this studies is that Soybean fermetated extracts(SFE) has possibility to immune aided material for the function not only inhibition of microbial infection to macrophage but also activity of adaption immune and cellular immune system.
면역 기능의 저하는 각종 감염에 대한 저항력의 부족을 초래하여 다양한 질병 유발에 기여하며, 면역 억제제의 부작용을 감소시키거나 면역력을 높이기 위해 면역 조절 생체 물질이 사용되고 있다. 침향은 침향나무의 방향족수지 부분이며 전통적으로 다양한 질병을 치료하기 위한 목적으로 사용되어왔다. 비록 선행 연구들에 의하여 침향이 신체의 면역력을 향상시킬 수 있다는 사실이 밝혀졌지만 이에 대한 근거는 여전히 부족한 실정이다. 본 연구에서는 인도네시아에서 구입한 A. malaccensisd 침향 메탄올 추출물의 면역 자극 효과를 RAW 264.7 대식세포 모델에서 평가하였다. 본 연구의 결과에 의하면 침향 추출물은 세포 독성이 없는 조건에서 식작용을 현저하게 향상시켰으며다. 또한 침향 추출물 처리된 RAW 264.7 세포는 활성화된 대식세포의 전형적인 형태를 보였으며, iNOS 발현 증가에 따른 NO 생성의 생성을 크게 증가시켰다. 아울러 TNF-α, IL-1β 및 IL-6과 같은 cytokine의 발현과 분비를 증가시켰으며, MAPKs 신호 전달 경로를 활성화시켰다. 따라서 본 연구의 결과는 고대 서적을 기반으로 침향의 효과를 확인하는 데 중요한 의미가 있으며, 침향이 잠재적인 면역 강화 효과가 있다는 근거를 제시하는 것이다.
Purpose: In this study, we investigated anti-thrombotic effects of Gamihyunbooleekyungtang currently used clinical treatment of dysmenorrhea and compared effects by decoction methods. Methods: Gamihyunbooleekyungtang was extracted by pressure extractor (GHYT) and nonpressure extractor(GHYT-1). Inhibitory effect of platelet cohesion, suppression effect of GPIIb/IIIa activity, inhibitory effect of $TXB_2$ and $PEG_2$ biosynthesis, and oxidative damage suppression effect were tested in vitro. Also suppression of pulmonary embolism was studied in vivo. Results: In this study, both GHYT and GHYT-1 extract showed a safety in cytotoxicity of hFCs. Both showed dose-dependent inhibitory effect on platelet coagulation. GHYT-1 extract is usually higher than GHYT, especially for $E_{max}$. GHYT and GHYT-1 extract showed dose-dependent inhibitory effect on GPIIb/IIIa activities. GHYT extract suppressed significantly $TXB_2$ biosynthesis at 1000, $500{\mu}g/m{\ell}$ and also suppressed significantly $PEG_2$ biosynthesis at $1000{\mu}g/m{\ell}$ as compared with the control group. GHYT-1 suppressed significantly $TXB_2$ biosynthesis at $1000{\mu}g/m{\ell}$ as compared with the control group. Also it suppressed pulmonary embolism triggered by collagen and epinephrine by respectively 50%, 75% as compared with the control group. Both GHYT and GHYT-1 extract showed dose-dependent decrease of oxidative damages caused by DPPH, whereas dose-dependent increase of superoxide dismutase like activity was observed. Conclusion: These results suggest that Gamihyunbooleekyungtang can be used for treating dysmenorrhea caused by thrombosis. Nonpressure decoction method is a little more effective, but more detailed studies would be needed.
생식용 씀바귀의 섭취의 일환으로 생즙의 생리활성을 검색하기 위하여 본 실험을 실시하였다. DPPH free radical 소거법에 의한 항산화활성을 검정한 결과 에칠아세테이트 분획물이 RC$_{50}$값이 28$\mu\textrm{g}$/mL로 강한 활성을 나타내었다. 항미생물 활성 실험에서는 곰팡이 균주에 대해서는 생즙 농축액이 분획물에 비하여 우수한 활성을 나타냈으며, Hypocrea nigri-cans에 대해서는 대조구보다 우수한 활성을 나타낸 반면세균 균주에 대해서는 에칠아세테이트 분획물이 우수한 활성을 나타내었다. 또한 각 균주에 대하여 씀바귀 생즙이 독성을 나타내지 않는 범위에서 직접 돌연변이원(MNNG, ANQO)과 간접 돌연변이원(B(a)P, Trp-P-1)에 대하여 실험을 실시한 결과 강력한 발암물질로써 직접 변이원으로 사용된 MNNG(0.4$\mu\textrm{g}$/plate)의 경우 S. typhimurium TA100균주에서 시료농도과가 나타냈으며, 4NQO(0.15 $\mu\textrm{g}$/plate)에 대한 S. typhymur-ium TA98 균주에서는 에칠아세테이트 분획층이 74.21%로 가장 높은 억제 효과를 나타냈으며, TA100 균주의 경우에는 부탄올 분획물(75$\mu\textrm{g}$/plate)에서 73.11%로 가장 높은 억제 효과를 나타내었다. Trp-P-1(0.15 $\mu\textrm{g}$/plate)을 사용한 S. typhimur-ium TA98 균주에서는 시료농도 100 $\mu\textrm{g}$/plate에서 물 분획물(75 $\mu\textrm{g}$/plate)에서 83.09%의 가장 높은 억제 효과를 보였고, TA100 균주의 경우, 시료농도 100 $\mu\textrm{g}$/plate에서 부탄올 분획물에서 68.88%의 가장 높은 억제 효과를 보였고, B(a)P(10$\mu\textrm{g}$/plate)에서는 TA98 균주 100$\mu\textrm{g}$/plate의 시료농도에서는 에칠아세테이트 분획물이 78.83%로 가장 높은 억제 효과를 보였으며, TA100 균주 100$\mu\textrm{g}$/plate의 시료농도에서는 핵산 분획물이 75.96%로 가장 높은 억제 효과를 보였다. 각종 암세포주(A549, Hep3B, MCF-7)에 대한 증식 억제 효과를 실험을 한결과, 폐암세포주인 A549세포에서는 부탄올 분획물 (375$\mu\textrm{g}$/mL)이 93.75%로 가장 높은 억제 효과를 나타내었고, 간암세포주인 Hep3B에서는 핵산 분획물(500$\mu\textrm{g}$/mL)이 84.91%로 가장 높은 억제 효과를 보였다. 또한, 유방암 세포주인 MCF-7에서도 핵산 분획물(500$\mu\textrm{g}$/mL)이 58.56%의 높은 억제 효과를 보였다. 씀바귀 추출물은 인간 정상 간세포 293에서 시료 농도에 따른 증식 억제 효과를 보였다. 1000$\mu\textrm{g}$/mL 시료 첨가시 암세포에 대하여 대부분 60% 전후의 성장 억제를 하였고, 정상인 293세포에 대해서는 32% 이하로 생육을 억제하였다. 이는 씀바귀 추출물이 암세포의 성장억제 대한 높은 효과에 비해 정상세포에 대해서는 비교적 낮은 독성을 나타냄을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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