Type I allergic reaction and it's related clinical manifestations are known to occur by the effects of various chemical mediators. These chemical mediators are released from circulating basophils and tissue mast cells, which become 'sensitized' through the binding of antigens and antibodies of the IgE type to their cell surface receptors. Efforts to elucidate the mechanism of the release of these mediators, especially that of histamine, have been persued for years. The mechanism is not yet clarified at the present time. Recent reports of hyaluronidase, an enzyme known to be involved in the tissue inflammatory process, as possible participant in type I allergic reaction, initiated this study. Relationships between the hyaluronidase activity and histamine release from the sensitized rat peritoneal mast cells were investigated. Also anti-allergic agents, tranilast and disodium cromoglycate, along with known histamine releasers, morphine and compound 48/80, were used to observe the inhibitory and stimulatory effects of these substances on the hyaluronidase activity as well as histamine release from the rat mast cells. The results obtained are summarized as follows: 1) Hyaluronidase activity and histamine release from sensitiaed rat peritoneal mast cells started to increase on the 4th day of postsensitization. Hyaluronidase activity reached it's peak value on the 7th day of postsensitization and that of histamine release on the 14th day of postsensitization. 2) Hyaluronidase activity and histamine release from sensitized rat peritoneal mast cells, pre-treated with tranilast revealed significant decrease in comparison with those of non-treated cells. 3) Hyaluronidase activity and histamine release from sensitized rat peritoneal mast cells, pre-treated with tranilast, followed by morphine injection, revealed significant increase in comparison with those of tranilast treated cells. 4) In vitro study of hyaluronidase activity and histamine release from un-sensitized rat peritoneal mast cells, using morphine and compound 48/80 as activators, revealed significant increase compared to those of non-activator used cells. 5) In vitro study of hyaluronidase activity and histamine release from un-sensitized rat peritoneal mast cells, pre-treated with tranilast and disodium cromoglycate, using confound 48/80 and morphine as activators revealed significant decrease in comparison with those of tranilast and disodium cromoglycate treated cells. From above results, participation of enzyme hyaluronidase in the process of histamine release from sensitized rat pertioneal mast cells, could be suggested. It was also quite evident that the clinically used anti-allergic agents, tranilast and disodium cromoglycate, have significant inhibitory function on the hyaluronidase activity and histamine release from sensitized rat peritoneal mast cells, while morphine significantly increased the hyaluronidase activity and histamine release from sensitized rat peritoneal mast cells.
This study was conducted to investigate tyrosinase inhibitory effect, hyaluronidase inhibitory effect and antioxidant activity by DPPH radical scavenging method on the MeOH extract of 50 species medicinal plant for screening of functional properties. As a result, Chaenomeles sinensis Koehne extract among 50 species medicinal plant turned out to be having tyrosinase, hyaluronidase inhibitory effect and antioxidant activity. The major component of tyrosinase and hyaluronidase inhibitory effect was isolated from EtOAc extract of Chaenomeles sinensis Koehne. And the component of antioxidant activity was isolated from n-BuOH extract of Chaenomeles sinensis Koehne. Their structure of compounds were identified as oleanolic acid and (-)-epicatechin by spectroscopic evidence, respectively.
This study was carried out to evaluate glutathione S-transferase (GST) activity and hyaluronidase inhibitory effect of medicinal plants. The EtOH extracts of 20 species plants were tested. As the result, Acorus gramineus and Pueraria lobata exhibited GST activity. On the continuous experiment, the n-BuOH fraction of Acorus gramineus and the $H_2O$ fraction of Pueraria lobata showed the elevation of GST activity. On the experiment of hyaluronidase inhibitory effect, Acorus gramineus exhibited a potent inhibitory activity. These results suggest that the extract of Acorus gramineus can be applicable for the development of a new anti-inflammatory agent.
소 고환 유래의 hyaluronidase 효소 PH-20을 pPIC9 expression vector를 사용하여 Pichia pastoris에서 발현하였다. 생산된 재조합 단백질 rPH-20b는 75 kDa의 분자량을 보였고 7460 units/L의 효소활성을 보였다. 세포내보다 세포외의 효소활성이 두배 높았다. pH 의 경우 buffer를 사용 안 한 경우가, 또한 $30^{\circ}C$ 배양 조건에서 높은 활성을 보였다. 1 M sorbitol 삼투압조건과 0.3% 메탄올의 생산유도인자를 사용시 성장과 생산에 유리하였으며 0.4 M 아르기닌을 첨가시 재조합 단백질의 분해가 감소하였다.
본 연구에서는 항염증 및 항산화 활성을 갖는 유용한 물질을 검색하기 위해 40여 가지 생약재를 에탄올을 이용하여 추출한 후 hyaluronidase 억제 및 라디칼 소거 활성을 측정하였다. hyaluronidase 활성을 저해시키는 물질로서 황기, 목단피, 오미자 등이 높은 효과를 보였고, 목단피, 백작약, 복분자 등은 유리 라디칼종에 대해 높은 소거활성을 나타내어 조직 손상 및 염증 질환에 매우 유효한 소재로서 이용될 수 있으리라 사료된다.
최근 여러 생리활성이 알려지면서 많은 연구가 진행되어 온 발효식품의 우수성을 확보하기 위하여 전통 발효식품인 된장, 청국장 그리고 미소의 hyaluronidase 저해활성을 조사하였다. 저해활성 측정을 위하여 각 시료는 물과 MeOH로 추출하여 사용하였다. 각 추출물은 감압 건조하여 50 mg/mL의 농도로 0.1 M acetate buffer에 녹여 시료 액으로 사용하였다. 된장, 청국장 및 미소의 물 추출물은 hyaluronidase의 활성을 각각 62$\%$, 70$\%$, 56$\%$저해하였으며 원료성분인 대두의 물 추출물은 24$\%$ 저해하였다. 동일한 조건하에서 양성대조구로 항알레르기 약물인 disodiumcromoglycate(0.35 mg/mL)는 46$\%$의 저해활성을 나타냈다. 한편 된장, 청국장 및 미소의 MeOH추출물은 hyaluronidase의 활성을 각각 48$\%$, 52$\%$, 70$\%$ 저해 함으로서, 46$\%$를 저해한 대두의 MeOH 추출물과 유사한 저해활성을 보였다. 물과 MeOH 추출물 중 저해활성이 높게 나타난 각 시료에 대하여 100$^{\circ}C$에서 10분간의 가열 후 잔여저해활성을 측정하여 열 안정성을 조사하였다. 평균적으로 각 시료의 물 추출물은 50$\%$ 정도, MeOH추출물은 90$\%$ 정도의 저해활성을 유지하여 MeOH 추출물이 열에 대해 더 안정한 것으로 나타났다.
Hyaluronidase is one of the mucopolysaccharide-splitting enzyme and is related to the permeability of the vascular system and inflammation. An anti-hyaluronidase assay guided fractionation of the methanolic extract of Uncariae Ramulus et Uncus has furnished a pentacyclic triterpene, ursolic acid (compound I). Compound I exhibited hyaluronidase inhibitory activity with $IC_{50}$ value of 0.15 mM, and disodium cromoglycate showed the inhibitory activity with $IC_{50}$ value of 1.78 mM as a positive control.
Kim, Young-Soo;Noh, Young-Kyun;Lee, Gyeong-Im;Kim, Young-Ki;Lee, Kyong-Soon;Min, Kyung-Rak
생약학회지
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제26권3호
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pp.265-272
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1995
Inhibitory effects of 130 medicinal plants on hyaluronidase activity were analyzed. The medicinal plants are clinically used as herbal medicines for korean traditional prescriptions. Six out of the 130 herbal medicines exhibited more than 50% of inhibition on hyaluronidase activity by their total methanol extracts with 5mg/ml as a final concentration. The active total methanol extracts were prepared from cortex of Acantbopanax gracilistylus, lignum of Caesalpinia sappan, radix of Glycyrrhiza uralensis, radicis cortex of Morus alba, herba of Prunella vulgaris, and radix of Sanguisorba officinalis. These active total methanol extracts were sequentially fractionated with dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, and then water. Among the solvent-fractionated extracts, the butanol fractions of Acantbopanax gracilistylus and Glycyrrhiza uralensis with 1 mg/ml as the final concentration exhibited more than 50% of inhibition on hyaluronidase activity, and the other fractions with the same concentration did less than 20% of inhibition.
The aqueous and methanolic extracts of 110 crude drugs were screened for hyaluronidase inhibitory activity using a microplate assay. Among them, MeOH extract of 15 crude drugs inhibited more than 80% of hyauluronidase activity at the concentration of 5mg/ml. The active principles of Anemarrhenae Rhizoma, Rhei Rhizoma, Ephedrae Herba, Pteropi Faeces and Ginseng Radix alba were transferred into organic solvents.
Hyaluronidases are a family of enzymes that catalyse the breakdown of hyaluronic acid, which is abundant in the extracellular matrix and cumulus oocyte complex. To investigate the activity of recombinant bovine sperm hyaluronidase 1 (SPAM1) and determine the effect of the Asn-X-Ser/Thr motif on its activity, the bovine SPAM1 open reading frame was cloned into the mammalian expression vector pCXN2 and then transfected to the HEK293 cell line. Expression of recombinant bovine hyaluronidase was estimated using a hyaluronidase activity assay with gel electrophoresis. Recombinant hyaluronidase could resolve highly polymeric hyaluronic acid and also caused dispersal of the cumulus cell layer. Comparative analysis with respect to enzyme activity was carried out for the glycosylated and deglycosylated bovine sperm hyaluronidase by N-glycosidase F treatment. Finally, mutagenesis analysis revealed that among the five potential N-linked glycosylation sites, only three contributed to significant inhibition of hyaluronic activity. Recombinant bovine SPAM1 has hyaluronan degradation and cumulus oocyte complex dispersion ability, and the N-linked oligosaccharides are important for enzyme activity, providing a foundation for the commercialization of hyaluronidase.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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