The effect of silver sulfadiazine (SSD) on the proliferation of human dermal fibroblast (HDF) was studied to determine the impact of the drug on the wound healing process and dermal mechanical strength. Human dermal fibroblasts were cultured to 80% confluency using DMEM with 10% FBS and viability of the cell was estimated using neutral red assay. In addition, the $2^{nd}$ degree burn wound was prepared on the anterior part of rabbit ear skin and dressings containing SSD were applied for 96 h. Presence of inflammatory cells and degree of re-epithelialization were investigated in the wound. After 15 day of the induction of burn wounds, the treated area was excised and dermal mechanical strength was quantitatively measured with a constant speed tensiometer. SSD was found to be highly cyto-toxic in cultured HDF cells. The topical application of SSD (2%) could control the infection as evidenced by the lack of accumulation of inflammatory cells in histological evaluation. Therefore, these observations suggested that the impairment of dermal regeneration and decreased mechanical strength of dermal tissue was resulted from the cyto-toxic effect of SSD on dermal cells. Since the decreased mechanical strength may lead to reduction in resilience, toughness and maximum extension of the tissue, the identification of optimum dose for SSD that limits infection while minimizes the cyto-toxic effect may be clinically relevant.
The production of matrix matalloproteinases(MMPs) by the UV irradiated skin fibroblast and the degradation of extracellular matrix(ECM) by these enzymes is known as one of the main reasons of photoaging. Recently, Fisher group showed that the MMP expression is mainly regulated by the mitogen-activated protein(MAP) kinas family, such as extracellular signal-regulated kinase(ERK), c-Jun amino-terminal kinase(JNK) and p38, each of which forms a signaling pathway. In this work we first examined the effect of nitric oxide (NO) on the production of MMP-1 and MMP-2 by the human dermal fibroblasts (HDFs). NO is a multifunctional messenger molecule generated from L-arginine and involved in many kinds of signaling pathway. We found that the treatment of HDF with NO donor, sodium nitroprusside (SNP) enhanced the expression of MMPs with or without UV irradiation and the treatment with nitric oxide synthase (NOS) inhibitors resulted in the significant decrease of MMPs production. From these results, we concluded that the production of MMPs by the UV irradiated HDF is regulated through the signaling pathway involving NO and cyclic GMP.
In order to reveal immunopathogenesis of periodontal tissue destruction, it is important to clarify the molecular mechanism of trafficking and retention of activated leukocytes, including monocytes/macrophages. Gingival fibroblasts may be involved in the regulation of inflammatory cell accumulation in the extravascular periodontal connective tissues via cytokine production and surface expression of adhesion molecules. In this study, it was investigated the molecular basis for the adhesive interactions between monocytes and fibroblasts such as peri-odontal ligament fibroblast(PDLF), human gingival fibroblast(HGF), and human dermal fibroblast(HDF). First, it was examined the evidence whether monocyte-fibroblast cell contact may cause signal transduction in fibroblasts. Being directly in contact with fixed human monocyte cell line THP-1, or U937, upregulation of IL-6 production, $TNF-{\alpha}$ mRNA expression and increased cell proliferation could be seen for fibroblasts. IL-6 production induced by monocyte- fibroblast coculture were further increased when fibroblasts had been pretreated with $IFN-{\gamma}$ or $IL-1{\beta}$ , and monocytes with LPS. Next, it was examined the expression of ICAM-1 which has been known to be involved in accumulation and activation of leukocytes in inflammatory diseases such as periodontitis. ICAM-1 was upregulated up to 10-fold on PDLF, HGF, and HDF by exposure to $IFN-{\gamma}$ or $IL-1{\beta}$. Furthermore, anti-ICAM-1 monoclonal antibody clearly blocked cocultureinduced IL-6 production by fibroblasts, suggesting that $ICAM-1/{\beta}_2$integrin pathway is involved in periodontal fibroblastmonocyte interaction. Overall, these findings provide evidence that periodontal fibroblasts could be involved in the accumulation and retention of monocytes/macrophages in periodontal inflammatory lesion at least in part by ICAM-1 expression. In addition, periodontal fibroblast-monocyte interaction could cause activation signals in fibroblasts intracellularly which result in cytokine production and cell proliferation. Thus, periodontal fibroblasts are speculated to play an important role in immunoregulation and tissue destruction in chronic periodontal diseases by interaction with monocytes/macrophages.
피부재생에 대한 지방줄기세포 배양상등액(ADSC-CM)의 효능에 대한 연구를 진행하였다. ADSC-CM이 피부재생에 기여하는 기작은 명확하지 못하지만, ADSC-CM은 다양한 분비물을 포함하고 있고 따라서 피부트러블 처리를 위한 훌륭한 재료이다. 저 산소 상태에서 생산된 ADSC-CM, 즉 advanced adipose-derived stem cell protein extract (AAPE)는 피부재생에 보다 좋은 재료이다. 본 연구는 피부 재생에 결정적 역할을 하는 인체 primary 세포인 섬유아세포(HDF)와 케라티노사이트(HK)를 이용하여 AAPE의 효능을 검증하였다. 0.32 ${\mu}g/ml$ AAPE에서 콜라겐 합성이 관찰 되었으며 AAPE는 stress fiber 형성을 강화하였다. DNA microarray 결과에서는 세포증식, 세포이동, 세포부착, 상처반응에 관여하는 133개의 유전자 발현이 조절되는 것을 알았다. Antibody array를 통해 CD54, FGF-2, GM-CSF, IL-4, IL-6, VEGF, TGF-${\beta}2$, TGF-${\beta}3$, MMP-1, MMP-10, 그리고 MMP-19와 같은 MMP, 성장인자, 사이토카인등 25개의 알려진 단백질이 포함되어 있다는 것을 알았다. 따라서, AAPE는 HK의 세포생물학적 기능을 활성화 할 수 있다고 사료되며 HDF에서는 콜라겐 합성을 유도하였다. 이러한 결과는 AAPE가 피부재생에 임상적 적용이 가능하리라는 것을 의미한다.
본 연구는 인체에 무해하고 안정성이 높은 천연 항산화제를 개발하고자 그라비올라 잎을 열수 추출하여 항산화 활성을 알아보았다. 총 폴리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량, DPPH radica 소거능과 MTT assay 세포 독성 활성을 측정하였다. 그 결과 그라비올라 잎 분말 300 g을 사용하여 $98^{\circ}C$ 온도에서 열수 추출물 62.3 g을 얻었으며 그라비올라잎 1 mg/mL 추출물 내에 총 폴리페놀 함량은 $291.92{\pm}2.39{\mu}g/mL$과 총 플라보노이드 함량은 $161{\pm}7.85{\mu}g/mL$의 함량을 나타내었다. DPPH radical 소거능은 농도 1, 2.5, 5, 10 및 15 mg/mL에서 51.6%, 67.8%, 79%, 82.4% 및 83.9% 농도 의존적 소거능을 나타내었으며 의미 있는 항산화 효과를 보였다. 인간 진피 섬유아세포 (Human Dermal Fibroblasts ; HDF)에 대한 세포 독성을 측정한 결과, 150 mg/ml 농도에서 대조군과 같은 100%의 세포 생존율을 나타내었고 이보다 적은 농도에서는 더 높은 세포 생존율을 나타내었다. 이상의 결과를 종합하면 그라비올라 잎 추출물은 천연 항산화제를 함유한 식품이나 화장품 성분 개발에 이용가치가 있을 것으로 판단된다.
본 연구는 장내세균 Bifidobacterium bifidum 배양액과 추출액을 사용하여 자외선B를 조사한 인간 진피섬유아세포에서 세포생존율과 세포 노화 및 세포주기의 변화를 살펴봄으로써 자외선B에 의한 세포 보호 효능을 평가하였다. 우선 자외선B를 조사한 결과 광량에 비례하여 HDFs의 생존율이 감소하였으며 $100mJ/cm^2$ 조사 시 67.3%로 떨어졌으나 B. bifidum 배양액과 추출액 처리 후 세포생존율을 증가시켜 자외선B에 대한 보호 효능이 있었다. 그리고 $SA-{\beta}-gal$ activity 변화를 측정한 결과에서 세포 노화율을 감소시켰음을 확인하였다. 또한, propidium iodide staining을 통하여 세포주기상 Sub-G1기 세포 수가 감소하였으므로 apoptosis를 억제하였고 이는 세포주기를 정상화하는 데 긍정적인 영향을 미쳤다. B. bifidum 배양액과 추출액 처리한 결과 세포 내 활성산소종이 감소함에 따라 p53과 p21의 발현을 감소시켰으며, 따라서 이에 본 연구에서 B. bifidum 배양액과 추출액은 UV-B로 인한 손상을 보호하는 효과가 있음을 규명하였다.
Hwang, Su Jin;Ha, Geun-Hyoung;Seo, Woo-Young;Kim, Chung Kwon;Kim, KyeongJin;Lee, Sang Bae
BMB Reports
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제53권10호
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pp.539-544
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2020
Skin aging appears to be the result of overlapping intrinsic (including genetic and hormonal factors) and extrinsic (external environment including chronic light exposure, chemicals, and toxins) processes. These factors cause decreases in the synthesis of collagen type I and elastin in fibroblasts and increases in the melanin in melanocytes. Collagen Type I is the most abundant type of collagen and is a major structural protein in human body tissues. In previous studies, many products containing collagen derived from land and marine animals as well as other sources have been used for a wide range of purposes in cosmetics and food. However, to our knowledge, the effects of human collagen-derived peptides on improvements in skin condition have not been investigated. Here we isolate and identify the domain of a human COL1A2-derived protein which promotes fibroblast cell proliferation and collagen type I synthesis. This human COL 1A2-derived peptide enhances wound healing and elastin production. Finally, the human collagen alpha-2 type I-derived peptide (SMM) ameliorates collagen type I synthesis, cell proliferation, cell migration, and elastin synthesis, supporting a significant anti-wrinkle effect. Collectively, these results demonstrate that human collagen alpha-2 type I-derived peptides is practically accessible in both cosmetics and food, with the goal of improving skin condition.
In this study, the effect of plant extract on the senescence action and cell survival rate in two types of cells, in which aging was derived by adriamycin, was analyzed to find the materials for suppressing cell senescence from natural resources. The results are as follows. For human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), the fruit of Physalis angulata L. and the aerial part of Synurus deltoides (Aiton) Nakai showed excellent cell-senescence inhibition activities in a treatment concentration-dependent manner, demonstrating the high possibility for utilization as a material for prevention and treatment for vascular diseases. The water extract from the root of Polygonatum odoratum var. pluriflorum for variegatum Y. N. Lee showed potent cell-senescence inhibitory effect for human dermal fibroblasts (HDFs). Thus it is considered that the additional study on the plant needs for elucidating the possible utilization as material for skin health improvement.
본 연구는 magnolol에 의한 UVB 유도 세포 손상의 복구를 조사하였다. 우리는 약물재배치를 위해 STAT3 기작을 분석하였고, magnolol HDF 세포에서 세포 생존력을 향상시키며, STAT3의 억제제인 것을 확인하였다. IL-6, UVB 및 IFNγ로 처리 된 HDF 세포는 Jak2 및 인산화 된 STAT3 (p-STAT3)의 높은 발현을 나타냈다. Magnolol 의 처리는 UVB 유도 세포에서 Jak2 및 p-STAT3의 발현을 감소시킬 수 있었다. 또한, UVB- 손상된 세포 성장은 용량 의존적 방식으로 재 활성화 및 magnolol 과의 상관 관계가 상당히 증가되었다. UVB 처리 된 HDF 세포에 대한 AG490 (Jak2 억제제) 처리와 비교하여, 세포 증식이 유의하게 증가 하였다. 우리는 AG490 및 magnolol 이 TNF-α 농도를 감소시키는 것을 확인했다. Western blot (단백질 수준)은 오직 magnolol 처리 된 세포에서만 Jak2 및 p-STAT3 발현의 감소를 나타냈고, Jak2, p-STAT3 및 SOCS3의 발현은 또한 magnolol 처리한 세포에서만 증가하였다. 세포를 magnolol 및 ML385 (NRF2 억제제)로 동시 처리시 세포 증식 및 NRF2 발현을 감소시켰다. MMP9의 양은 magnolol 및 ML385 로의 처리에 의해 증가되었다. 종합적으로, 이들 결과는 NRF2, SOCS3, Jak2 및 STAT3의 발현을 조절함으로써 UVB 손상 후 세포를 회복시키는데 있어 magnolol의 가능성을 입증한다.
Ultraviolet B (UVB) exposure is a risk factor for skin damage resulting in oxidative stress, inflammation, and cell death. The purpose of this study was to investigate the physicochemical properties of Platycodon grandiflorum (PG) to improve its biological activities using a three-step steaming process. We investigated the protective effects of PG and steamed PG extracts on human dermal fibroblasts (HDFs) against UVB radiation-induced oxidative stress and inflammation as well as the underlying mechanisms. The antioxidant potential of the PG extracts was evaluated by measuring the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) scavenging activity. ABTS and DPPH were shown by the 0, 30, and 70% ethanol extracts of 2S-PG and 3S-PG ($IC_{50}$, 28~45 and $27{\sim}30{\mu}g/mL$, respectively). Treatment of UVB-irradiated cells with steamed PG ($25{\sim}400{\mu}g/mL$) did not affect their viability. The streamed PG extract suppressed UVB-induced generation of reactive oxygen species (ROS). In addition, streamed PG extract reduced cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) protein expression in UVB-irradiated HDF, regulating nuclear factor $(NF)-{\kappa}B$ expression. These findings suggest that steamed PG extract may be potentially effective against inflammation associated with UVB-induced oxidation stress.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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