Park, J.H.;Park, G.J.;Lee, S.W;Jang, K.S.;Park, Y.H.;Chung, Y.R.;Cho, K.Y.;Kim, J.C.
한국식물병리학회:학술대회논문집
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한국식물병리학회 2003년도 정기총회 및 추계학술발표회
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pp.95.2-96
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2003
In order to develop a new microbial fungicide for the control of vegetable diseases using endophytic bacteria, a total of 260 bacterial strains were isolated from fresh tissues of 5 plant species. After they were cultured in broth media, their antifungal activities were screened by in vivo bioassays against Botrytis cinerea(tomato gray mold), Pythium ultimum(cucumber damping-off), Phytopkhora infestans(tomato late blight), Colletotrichum orbiculare(cucumber anthracnose), and Blumeria graminis f. sp. hordei(barley powdery mildew). As the results of screening, 38 bacterial strains showed potent antifungal activities against at least one of 5 plant pathogens. A bacterial strain EB072 displayed potent disease control activities against 3 plant diseases. Among the bacterial strains with a potent antifungal activity against cucunlber anthracnose, three bacterial strains, EB054, EB151 and EB215, also displayed a potent in vitro antifungal activity against C. acutatum, a fungal agent causing pepper anthracnose. A bacterial strain EB215 obtained from roots of cucumber was identified as Burkholderia cepacia based on its physiological and biochemical characteristics and 165 rRNA gene sequence. An antifungal substance was isolated from the liquid cultures of B. cepacia EB215 strain by ethyl acetate partitioning, repeated silica gel column chromatography, and invitro bioassay, Its structural determination is in progress by various instrumental analyses.
항균균활성이 있는 4-isopropylphenol(I)과 2-isopropylphenol (II)을 출발물질로 하여 ester, sulfonyl ester, phosphoyl ester와 ether계열 유도체 42종을 합성하였으며, 확인은 IR, $^{1}H-NMR$과 GC/MS를 이용하였다. 이들 유도체들에 대한 in vitro 항균활성 실험을 오이탄저병균(Colletotrichum orbiculare) 외 9종에 대하여 실시하였다. 그 결과, 2-isopropylphenyl piperonyloate(II-7a)가 오이탄저병균(Colletotrichum orbiculare)과 토마토잎마름병균(Phytophthora infestans)에 효과가 있었으며, 4-isopropylphenyl bromoacetate(I-3a)가 오이잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea), 4-isopropylphenyl-4-methoxybenzenesulfonate(I-6b)는 벼도열병균(Pycularia oryzae)에 탁월한 효과를 나타내었으며, 4-isopropylphenylbenzyl ether(I-4d)가 오이탄저병균(Colletotrichum orbiculare)에 우수한 효과를 나타내었다. In vivo 실험에서는 2-isopropylphenyl piperonyloate(II-7a)가 오이탄저병(Colletotrichum orbiculare)과 토마토잎마름병(Phytophthora infestans), 4-isopropylphenyl 4-methoxybenzenesulfonate(I-6b)가 벼도열병(Pycularia oryzae)에 매우 우수한 항균활성을 나타내었다.
In a search for plant extracts with potent in vivo antifungal activity against various plant pathogenic fungi, the methanol extract of the Curcuma longa rhizomes effectively controlled the development of rice blast catised by Magnaporthe grisea and tomato late blight caused by Phytophthora infestans. Three curcuminoids such as curcumin, demethoxycurcumin, and bisdemethoxycurcumin were purified from the methanol extract of C. longa rhizomes as antifungal principles. Among the three curcuminoids, demethoxycurcumin was the most active to both rice blast and tomato late blight, followed in order by curcumin and bisdemethoxycurcumin. However, they all exhibited no or little in vivo antifungal activity against other fungal pathogens causing rice sheath blight (Corticium sasaki), tomato gray mold (Botrytis cinerea), wheat leaf rust (Puccinia recondita), or barley powdery mildew (Blumeria graminis f. sp. hordel).
아황산가스 발생제를 자가 제조하여 포도의 저장 중 병해발생 방지에 이용하는 방법을 확립하기 위하여 sulfite 화합물의 아황산가스 발생 정도와 지속 기간을 측정하고 아황산가스 발생 조절 및 간이 검출 방법을 개발하였다. 포도의 저장 중 잿빛곰팡이병을 일으키는 B. cinerea의 포자 발아와 균사생장은 각각 400 ppm과 3200 ppm의 아황산가스 농도 조건에서 억제되었다. 5종류의 sulfite 및 bisulfite 화합물 중 sodium hydrosulfite는 아황산가스 발생량이 가장 높았으며 이를 비닐 포장하여 포장의 pinhole수를 조절하거나 산 또는 알카리의 pH 조절제를 혼합하면 가스 발생량과 발생 지속 기간을 조절할 수 있었다. Malachite green 용액은 아황산가스에 의해 정량적으로 탈색되어 아황산가스 검출에 이용할 수 있었으며 여과지에 흡수하여 건조할 경우 아황산가스 검출지로 활용할 수 있었다. MBA 포도를 속효성과 지효성의 아황산가스 발생제를 동시에 처리하여 저온 저장할 경우 병해 발생을 감소시킬 수 있었다.
우리나라 참다래 주요 재배지인 전남과 경남 그리고 제주지역의 16개 포장에서 임의로 수집한 1600개 참다래 과실의 평균 저장병 발병율은 32.0%로 나타났지만, 저장병 발병율은 수확한 과수원에 따라서 5%에서 68%까지 다양했다. 저장병에 걸린 참다래 과실 중에서 15.4%가 외부 병징, 68.4%가 내부 병징을 나타내었고, 외부와 내부 모두에 병징을 나타내는 것은 16.2%였다. 저장병에 걸린 과실들에서 병원균의 검출율은 분리한 지역에 따라 차이가 있었으며, Botryosphaeria dothidea가 83.3%, Diaporthe actinidiae는 11.9%, Botrytis cinerea가 1.4%의 검출율을 보여 주요 저장병원균으로 밝혀졌다. 참다래 주요 저장병원균으로 확인된 B. dothidea와 D. actinidiae에 의해 발생하는 참다래 주요 저장병을 과실에 나타난 각 병징과 각 병원균들의 특성을 고려하여 과숙썩음병과 과실꼭지썩음병으로 각각 구분하여 명명하고자 한다.
This study takes strawberry-fruits as the test material and discusses the effect of Burkholderia contaminans B-1 on preventing postharvest diseases and inducing resistance-related substances in strawberry-fruits. Soaking and wound inoculating is performed to analyze the inhibitory effects of different treatment solutions on the gray mold of postharvest strawberry-fruits. The count of antagonistic bacteria colonies in the wound is found, and the dynamic growth of antagonistic bacteria and the pathogenic fungus is observed by electron microscopy. The results indicated that, either by soaking/wound-inoculating, the fermentation and suspension of antagonistic bacteria significantly reduced the incidence of postharvest diseases of strawberry-fruits. With wound inoculation, the inhibition rate of antagonist fermentation and suspension ($1{\times}10^{10}cfu/ml$) respectively reached 77.4% and 66.7%. It also led to a significant increase in the activity of resistance-related enzymes, i.e., phenylalanine ammonia lyase (PAL), 4-coumarate coenzyme A ligase (4CL), cinnamate-4-hydroxylase (C4H) and chalcone isomerase (CHI). On 1 d and 2 d post-treatment, the activity of 4CL was respectively 3.78 and 6.1 times of the control, and on 5 d, the activity of PAL was increased by 4.47 times the control. The treatment of antagonistic bacteria delayed the peaking of cinnamyl-alcohol dehydrogenase (CAD) activity and promoted the accumulation of lignin and total phenols. The antagonistic bacteria could be well colonized in the wounds. On 4-5 d post-inoculation, the count of colonies was $10^8$ times of that upon inoculation. Electronmicroscopy indicated that the antagonistic bacteria delayed the germination of pathogenic spores in the wounds, and inhibited further elongations of the mycelia.
포도 잎에서 병 발생을 경감하기 위한 수단으로 자외선의 활용 가능성을 확인하기 위하여, 자외선을 조사한 포도 잎에서 stilbene 화합물의 함량 변화와 Botrytis cinerea 생장의 차이를 조사하였다. 자외선의 조사는 포도 잎에서 resveratrol, piceatannol, piceid의 함량을 크게 증가시켰으며, 특히 resveratrol과 piceid는 B. cinerea의 포자 발아와 균사 생장을 억제하는 효과를 보였다. 자외선 조사에 의해 포도 잎에 축적되는 resveratrol과 piceid의 농도는 B. cinerea의 생장을 억제하기에 충분할 것으로 생각되며 자외선을 조사한 포도 잎에 B. cinerea의 포자를 접종하였을 때 괴사 반점의 형성이 억제되는 것으로 나타났다. 그러나 stilbene 화합물은 체내 이동성이 거의 없고 자외선에 직접 노출된 잎에서만 함량이 증가하므로 병 발생 경감의 수단으로 자외선을 활용하기 위해서는 수관 전체에 자외선을 균일하게 조사하는 방법의 도입이 필요해 보인다.
Biocontrol microbes have mainly been screened among large collections of microorganisms $via.$ nutrient-rich $in$$vitro$ assays to identify novel and effective isolates. However, thus far, isolates from only a few genera, mainly spore-forming bacilli, have been commercially developed. In order to isolate field-effective biocontrol microbes, we screened for more than 200 oligotrophic bacterial strains, isolated from rhizospheres of various soil samples in Korea, which induced systemic resistance against the soft-rot disease caused by $Pectobacterium$$carotovorum$ SCC1; we subsequently conducted in $planta$ bioassay screening. Two oligotrophic bacterial strains were selected for induced systemic disease resistance against the $Tobacco$$Mosaic$$Virus$ and the gray mold disease caused by $Botrytis$$cinerea$. The oligotrophic bacterial strains were identified as $Pseudomonas$$manteilii$ B001 and $Bacillus$$cereus$ C003 by biochemical analysis and the phylogenetic analysis of the 16S rRNA sequence. These bacterial strains did not exhibit any antifungal activities against plant pathogenic fungi but evidenced several other beneficial biocontrol traits, including phosphate solubilization and gelatin utilization. Collectively, our results indicate that the isolated oligotrophic bacterial strains possessing induced systemic disease resistance could provide useful tools as effective biopesticides and might be successfully used as cost-effective and preventive biocontrol agents in the field.
43종의 식물오일들을 대상으로 잿빛곰팡이병균 (Botrytis cinerea) 외 9종의 식물병원균에 대한 살균 효과로 이들의 생리활성 검증을 실시하였다. 이 중 thyme 오일이 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea), 잎집무늬 마름병균(Rhizoctonia solani), 고추역병균(Phytophthora capsici), 고추탄저병균(Glomerella cingulate), 사과점무늬 낙엽병균(Alternaria mali)과 벼도열병균(Magnaporthe grisea)에서 광범위하게 살균효과를 나타내었다. Thyme 오일의 주성분을 GC/MS로 분석한 결과 thymol, carvacrol, borneol, linalool과 p-cymene임을 확인하였다. 이 중 thymol과 carvacrol이 높은 살균활성을 나타내었다. 한편, 식물병원균에 대한 살균활성관련 작용기작을 실험한 결과, 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea), 잎집무늬마름병균(Rhizoctonia solani)과 사과점무늬낙엽병균(Alternaria mali)의 포자발아를 억제하는 것으로 나타났다. Thymol과 carvacrol은 in vivo에서 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea)과 잎집무늬마름병균(Rhizoctonia solani)에 대하여 높은 예방효과를 나타내었으며, thymol, carvacrol의 유사구조를 갖는 alkylphenol계 화합물들도 살균활성이 있음을 검정하였다.
기주, 분리 연도 및 장소가 다른 Botryis cinerea 20개 균주를 이용하여 오이세포벽을 탄소원으로 첨가한 배지에서 배양한 뒤 병원성과 관련이 있는 것으로 알려진 polygalacturomase, Iaccase, $\beta$-glucosidase의 활성을 측정하고 병원성과의 상관관계를 조사하였다. 조사된 효소들의 활성과 병원성과의 상관관계는 상관계수가 모두 0.5 이하로 직접적인 연관성을 인정할 수 없었다. 그러나 Bovendamm 배지에서의 균사생장 정도의 병원성은 r=0.522(p=0.05)로 정의 상관관계를 보였다. 또한 병원성이 강한 3균주와 약한 3균주를 선발하여 각 기주의 세포벽을 첨가하여 배양 후 poly-galacturonase 활성정도를 비교하였으나 뚜렷한 경향을 찾을 수 없었다. Exo-PG 항체를 이용한 면역혈청 blotting 결과 병원성이 다른 거의 모든 균주가 66kDa 크기의 1 band를 보이는 유사한 효소 pattern을 보였다. 이상의 결과로 볼 때 측정된 이들 효소는 병원성과 관련된 일차적 요인이 아닐 것으로 생각한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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