The $pK_{a}$ of $-NH_{3}^{+}$ group of chitosan in water was 6.2, while that of D-glucosamine-HCl, monomer of chitosan, was found to be 7.8. The difference of $pK_{a}$ values between chitosan and D-glucosamine was attributed to the strong electrostatic interaction between $-NH_{3}^{+}$ groups in chitosan. The apparent binding constant of $Cu^{2+}$ to D-glucosamine was estimated to be $1{\times}10^{4}$. For chitosan, no significant binding of $Cu^{2+}$ to the polymer was observed when pH < 5, but strong cooperative binding was observed near pH 5.1. The mechanism of such cooperativity was proposcd. Chitosan in solution exhibited typical polyelectrolytic behaviors: viscosity increases with increased amount of charged group, and decreases with addition of salt. The concentration dependence of viscosity was measured, and the Huggins parameters and intrinsic viscosity were calculated at various ionic strength. The results were interpreted in terms of molecular properties of the chitosan molecule.
We evaluated the anti-arthritic effect of a new diet-supplement product containing red ginseng, glucosamine, shark cartilage, ascorbic acid and manganese chloride for the relieving arthritic symptoms. Anti-inflammatory activities of the aqueous extract of red ginseng (250 and 500 mg/kg), glucosamine (240 mg/kg) and shark cartilage (240 mg/kg) were tested individually on vascular permeability and carrageenan-induced paw edema. Glucosamine and shark cartilage showed the inhibition of vascular permeability by 29.6 and 32.9%, respectively. Red ginseng (500 mg/kg) and shark cartilage showed the inhibition of carrageenan-induced paw edema at 0.5, 1, 2 and 3 hr. The supplement (red ginseng mixture: RGM) composed of red ginseng (43.5%), glucosamine (25.0%), shark cartilage (25.0%), ascorbic acid (5.0%) and manganese chloride (1.5%) was prepared and its inhibitory activities including vascular permeability and carrageenan-induced paw edema were comparable to anti-inflammatory drugs such as diclofenac and ibuprofen. It was also tested on adjuvant-induced arthritis in rats as one of chronic arthritic tests and Randall-Selitto assay as an analgesic test. RGM showed the inhibition against the swelling of rat paws induced by Mycobacterium tuberculosis at a dose of 1,500 mg/kg. Determination of cytokines of the sera sampled from arthritis-induced animals indicated that RGM increased the levels of $interferon-{\gamma}$ and interleukin-6, representing the immunostimulatory effect by red ginseng. RGM treatment moderately reduced the production of NO in RAW 264.7 cells in a dose-dependent manner. Taken together, these results support that RGM can be applicable for the improvement of arthritic as a new diet-supplement.
글루코사민의 관절건강 기능성을 건강기능식품 재평가 기준에 맞추어 체계적 고찰을 실시하였다. 2012년 5월 기준 DB 검색을 통해 703건의 자료를 수집하여, 선정/제외 기준에 따라 선별한 결과 총 34건의 연구가 평가되었다. 34건 중 28건(4,225명)의 연구에서 통계적으로 유의한 개선 효과가 나타났으며(P<0.05), 일일 섭취량은 1.5~2 g으로 공전에서 제시되어 있는 섭취량 범위에 해당하였다. 글루코사민의 기능성 재평가 이후의 연구 결과는 16건이었고, 이 중 1,158명 대상 14건의 연구에서 유의한 관절건강 개선효과를 보였다(P<0.05). 연구대상자에 따른 분석 결과, 방사선 검사 기준에 따라 관절 연골의 손상 정도가 심한 대상자를 제외한 연구는 11건이었으며, 이 중 2,934명 대상 10건의 연구에서 글루코사민이 관절건강에 유의한 개선 효과를 보였다(P<0.05). 따라서 현시점에서 건강기능식품인 글루코사민의 관절건강 기능성은 인정될 것으로 판단되나 향후 연구 결과 추이를 지속적으로 지켜볼 필요가 있다.
중합도 n$\leq$10을 갖는 N-아세틸-D-글루코사민(GlcNAc)을 미생물 Serratia marcesce-ns QM B14f6의 최소배지 회분식 발효를 이용하여 키틴 및 키토산을 분해하는 효소 키티나제(1.5 unit/mL) [키토바이아제(3.48 unit/mL)가 포함됨]를 생성시킨다. 효소 반응에 의한 키토올리고당의 생성 활성을 규명하기 위하여 부분적으로 탈아세틸화된 키토산을 효소적 가수분해 반응시킴으로써 생성된 N-아세틸-D-글루코사민과 D-글루코사민의 키토올리고당의 생성 패턴을 확인 조사한다. 이 혼합 올리고머로부터 CM-Sephadex의 컬럼 크로마토그래피에 의하여 당별로 분획시켜 추출한 헤테로 키토 올리고당들을 각각 N-아세틸화하고 이 최종 생성물을 전기투석 장치로서 정제하여 키토올리고 1-7당을 제조하였다. 부분적으로 탈아세틸화 키토산(환원당으로서 2697 mg/mL)을 효소반응에 의해 생성시킨 키토올리고당은 1당으로서 GlcNAc=4.25%, 2당 $(GlcNAc)_2$=4.49%, 3당 $(GlcNAc)_3$=11.1%, 4당 $(GlcNAc)_4$=2.5%, 5당 $(GlcNAc)_{5}$ =0.64%, 6당$(GlcNAc)_{6}$=2.12%, 7당 $(GlcNAc)_{7}$=1.21%가 각각 제조되었다.
Objectives : The purpose of this study was to evaluate the efficacy of HT008 on pain relief and functional improvement in participants with mild knee osteoarthritis (OA) in comparison with that of glucosamine sulfate. Methods : This randomized double-blind trial was conducted at Kyung Hee University Medical Center in Seoul where participants with knee pain for more than 6 months and degenerative osteoarthritis were enrolled. The 100 participants were received either HT008 or glucosamine sulfate 750 mg twice daily for 8 weeks and evaluated at baseline, 4 and 8 weeks after the treatment. We primarily evaluated the differences between two groups with respect to changes in the visual analogue score (VAS) for pain, Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index (WOMAC) pain score from baseline to week 8. Secondarily the difference between and within two groups with respect to changes in WOMAC stiffness and physical function score, and Lequesne Functional Severity Index (LFI) were also evaluated. Results : At week 8, treatment with HT008 resulted in a significant reduction of the VAS for pain and WOMAC pain scores compared to the glucosamine sulfate (both p=0.003). Patients receiving HT008 experienced statistically significantly greater improvements in WOMAC physical function scores and LFI (p = 0.014 and p=0.016, respectively) than glucosamine sulfate-treated group. The within-group change in WOMAC physical function and stiffness, and LFI during the 8-week intervention revealed significant improvements in HT008-treated group. Conclusions : HT008 treatment allows significant pain reduction and functional improvement compared with glucosamine sulfate. These data confirm HT008 as an effective and safe symptomatic drug for knee OA.
The purified endochitosanase(Mw 41 kDa) from bacterium Bacillus cereus D-11 hydrolyzed chitooligomers $(GlcN)_{5-7}$ into chitobiose, chitotriose, and chitotetraose as the final products. The minimal size of the oligosaccharides for enzymatic hydrolysis was a pentamer. To further investigate the cleavage pattern of this enzyme, chitooligosaccharide alcohols were prepared as substrates and the end products of hydrolysis were analyzed by TLC and HPLC. The chitosanase split $(GlcN)_4GlcNOH$ into $(GlcN)_3+(GlcN)_1GlcNOH$, and $(GlcN)_5GIcNOH$ into $(GlcN)_4+(GlcN)_1GlcNOH$ and $(GlcN)_3+(GlcN)_2GlcNOH$. The heptamer $(GlcN)_6GlcNOH$ was split into $(GlcN)_5$ [thereafter hydrolyzed again into $(GlcN_3+(GlcN)2]+(GlcN)_1GlcNOH$, $(GlcN)_4+(GlcN)_2GlcNOH$, and $(GlcN)_3+(GlcN)_3GlcNOH$, whereas $(GlcN)_{1-3}GlcNOH$ was not hydrolyzed. The monomers GlcN and GIcNOH were never detected from the enzyme reaction. These results suggest that D-11 chitosanase recognizes three glucosamine residues in the minus position and simultaneously two residues in the plus position from the cleavage point.
Chitin deacetylase(CDA; EC 3.5.1.41)는 키틴의 N-acetamide bonds를 가수분해하여 이를 키토산으로 전환시키는 효소다. 한편, 키토산은 의약, 화장품, 식품, 농업 등의 분야에서 다양하게 응용되는 고분자 다당류이다. 본 논문에서는 미생물 유래 CDA의 분포, 분석법, 효소적 특성, 기질 특이성, 작용기작, 유전자의 구조, 생물학적 역할, 응용 등의 최신 지견을 기술하고자 하였다. 미생물 CDA가 세포벽 형성과 식물-미생물 상호작용에 관여한다는 연구결과들을 제시하였으며, CDA의 유전자 구조를 다양한 acetylated poly/oligo-saccharides를 탈아세틸화하는 family 4 carbohydrate esterase의 유전자 구조와 비교하였다. 키틴의 탈아세틸화로 키토산을 제조하는 과정에 CDA의 활용 가능성과, CDA를 포함한 고활성의 키틴 대사효소들을 분비하는 곤충 병원균의 활용 가능성도 살펴보았다.
The antifungal activity of crude methanolic extract and fractions from Yucca smalliana Fern. leaves, roots and flowers were investigated in vitro against a panel of plant pathogenic fungi. The minimal inhibitory concentration(MIC) was determined by an agar dilution method. Preliminary liquid culture and agar plate assays showed that the growth of Fu sarium oxysporum, Phytophthora capsici, Rhizoctonia solani and Botrytis cinerea were inhibited by Y. smalliana extracts. The extracts from flowers and leaves showed antifungal activity of 64.0% and 34.0% against F. oxysporum, 66.0% and 62.0% against P. capsici, and 27.0% and 41.0% against B. cinerea, respectively. The methanolic extract from Y. smallina leaves in distilled water was fractionated using solvents of increasing polarity: hexane, ethyl acetate and butanol. These fractions had a broad spectrum of antifungal activity, found to reside entirely in the butanol and aqueous fraction. The aqueous fraction showed inhibition rate of 60.0, 67.8, 84.6 and 58.3% against F. oxysporum, R. solani, C. gloeosporioides, and B. cinerea, respectively, and the butganol fracgtion showed 36.0, 46.0, 66.1 and 58.3%, respectively. Phenolics(e.g. flavonoids, steroids and terpenoids) were observed in the thin layer profile of the different fractions. Leave extract showed a prominent antioxidant activity totally scavenging the free radical of DPPH at a concentration of 1 mg/ml.
Jiang, Zhu;Lv, Xueqin;Liu, Yanfeng;Shin, Hyun-dong;Li, Jianghua;Du, Guocheng;Liu, Long
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제28권11호
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pp.1850-1858
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2018
Glucosamine (GlcN) is widely used in the nutraceutical and pharmaceutical industries. Currently, GlcN is mainly produced by traditional multistep chemical synthesis and acid hydrolysis, which can cause severe environmental pollution, require a long prodution period but a lower yield. The aim of this work was to develop a whole-cell biocatalytic process for the environment-friendly synthesis of glucosamine (GlcN) from N-acetylglucosamine (GlcNAc). We constructed a recombinant Escherichia coli and Bacillus subtilis strains as efficient whole-cell biocatalysts via expression of diacetylchitobiose deacetylase ($Dac_{ph}$) from Pyrococcus furiosus. Although both strains were biocatalytically active, the performance of B. subtilis was better. To enhance GlcN production, optimal reaction conditions were found: B. subtilis whole-cell biocatalyst 18.6 g/l, temperature $40^{\circ}C$, pH 7.5, GlcNAc concentration 50 g/l and reaction time 3 h. Under the above conditions, the maximal titer of GlcN was 35.3 g/l, the molar conversion ratio was 86.8% in 3-L bioreactor. This paper shows an efficient biotransformation process for the biotechnological production of GlcN in B. subtilis that is more environmentally friendly than the traditional multistep chemical synthesis approach. The biocatalytic process described here has the advantage of less environmental pollution and thus has great potential for large-scale production of GlcN in an environment-friendly manner.
N-Acetyl-D-glucosamine (NAG)는 보습제로 사용되어지는 히아루론산의 구성물질인 뮤코 다당류의 일종이며, 특히 화장품으로서 응용은 보습제로서의 사용이 최초이다. 본 실험에서는 게나 새우의 껍데기에서 추출된 키틴을 탈아세틸화 하여 얻은 NAG를 화장품 원료로서 적용하고자 하였다. 현재 기능성 주름 원료로 알려진 레티놀(retinol)과 NAG를 비교하기 위하여 섬유아세포의 활성능력 및 콜라겐 생성촉진 효과를 비교 실험하였으며, 제형 내에서의 안정성을 위하여 HPLC로 역가를 측정하였다. 실험결과, 게의 껍질로부터 유도된 NAG는 피부에 자극을 전혀 주지 않으면서 섬유아세포의 세포활성 및 콜라겐의 생성을 촉진시키는 효과를 나타내었으며, 헤어리스 마우스를 대상으로 실험을 실시한 결과 피부층의 변화를 통하여 주름의 감소 효능을 볼 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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