A DOTAP analog labeled by NBD on the head group (DTNBD) was designed and synthesized to label DOTAP liposome. The structure was confirmed by $^1H$ NMR and FAB-MS, and the fluorescence of the newly synthesized DT-NBD was observed by fluorescent microscopy. The transfection efficiency of DOTAP liposome containing DT-NBD was comparable to commonly used NBD PE in COS7 and MCF7 cells. Furthermore, the level of cellular uptake and fluorescent intensity of fluorescent liposome containing DT-NBD was higher than NBD PE. Therefore, the novel NBD-labeled DOTAP analog seems to be effectively used for investigation of the cellular interaction and transfection mechanism of DOTAP liposome.
Precolumn orthophthaldehyde (OPA) labeling method of sphingoid bases, sphingosine and sphinganine, was investigated to obtain high fluorescent detectability. In order to improve the fluorescent yield, we investigated the optimal solubility of sphingoid bases for five pre-incubation solvents by incorporating the heating procedure before OPA derivatization. The pre-incubation in ethanol prominently increased the fluorescent peak height of OPA derivative for each sphingoid bases in high performance liquid chromatography. About tenfold increase of detectability was archived by pre-incubating lipid extracts pellets in ethanol at $60^{\circ}C$ for 30 min. Optimal derivatization was performed in 30 min at ambient temperature and the fluorescent intensity of OPA derivative was stable for two weeks at $4^{\circ}C$. The detection limit of sphingosine was 0.1 pmol as injected amount. This method was applied to the determination of cellular sphingosine and sphinganine in various human lung cancer cells. This OPA procedure was prospective to be useful for quantitating the amount of sphingoid bases in other cancer cells.
Fluorescent anionic oligo surfactants were synthesized by the condensing products of long chain alkylvinylether-maleic anhydride cooligomers and resorcinol including dye structures. Their various surface activities and dispersing action were studied on the aqueous solution. These oligo surfactants exhibited a remarkable surface tension lowering property, lower foaming and a large dispersing action for the particles of ${\alpha}-copper$ phthalocyanine blue. Further it was ascertained that the binding of oligo surfactant onto the pigment surface caused the deviation towards lower wavelengths at the maximum fluorescent intensity as compared with aqueous oligo surfactant solutions, These surface active properties of the oligo surfactants may be attributed to rigid and hydrophobic structure of dye groups, besides surface-active groups of alkylether groups and carboxylic group of the anionic oligo surfactants.
CHO/dhfr- 세포에 대해 LipofectAmine$^{TM}$을 이용한 유전자 이입 효율을 증가시키기 위하여 지질과 DNA의 최적 농도를 구하였다. Reporter 유전자로서 GFP 유전자를 이용하였으며, 여러 농도의 지질 DNA로 유전자 이입된 각 세포군에서 나타나는 green fluorescence intensity를 FACS 분석함으로써 유전자 이입 효율을 정량화 할 수 있었다. 그 결과 24-well plate에서 $2.0{\mu}L$LipofectAmine$^{TM}$과 $0.4{\mu}g$ DNA를 조합하여 사용했을 때 최적의 유전자 이입 효율이 나타남을 알 수 있었다. 또한, GFP는 유전자 이입 최적화를 수행하는 데에 여러가지 면에서 유용한 수단이 될 수 있음을 확인할 수 있었다.
한국가시화정보학회 2004년도 Proceedings of 2004 Korea-Japan Joint Seminar on Particle Image Velocimetry
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pp.65-74
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2004
Measurement of concentration distributions of suspended particles in a micro-channel is out of the most crucial necessities in the area of Lab-on-a-chip to be used for various bio-chemical applications. One most feasible way to measure the concentration field in the micro-channel is using micro-LIF(Laser Induced Fluorescence) method. However, an accurate concentration field at a given cross plane in a micro-channel has not been successfully achieved so far due to various limitations in the light illumination and fluorescence signal detection. The present study demonstrates a novel method to provide an ultra thin laser sheet beam having five(5) microns thickness by use of a micro focus laser line generator. The laser sheet beam illuminates an exact plane of concentration measurement field to increase the signal to noise ratio and considerably reduce the depth uncertainty. Nile Blue A was used as fluorescent dye for the present LIF measurement. The enhancement of the fluorescent intensity signals was performed by a solvent mixture of water $(95\%)$ and ethanol (EtOH)/methanol (MeOH) $(5\%)$ mixture. To reduce the rms errors resulted from the CCD electronic noise and other sources, an expansion of grid size was attempted from $1\times1\;to\;3\times3\;or\;5\times5$ pixel data windows and the pertinent signal-to-noise level has been noticeably increased accordingly.
We present a non-invasive technique to the measure temperature distribution in nano-sized porous thin films by means of the two-color laser-induced fluorescence (2-LIF) of rhodamine B. The fluorescence induced by the green line of a mercury lamp with the makeup of optical filters was measured on two separate color bands. They can be selected for their strong difference in the temperature sensitivity of the fluorescence quantum yield. This technique allows for absolute temperature measurements by determining the relative intensities on two adequate spectral bands of the same dye. To measure temperature fields, Silica (SiO2) nanoporous structure with 1-um thickness was constructed on a cover glass, and fluorescent dye was absorbed into these porous thin films. The calibration curves of the fluorescence intensity versus temperature were measured in a temperature range of $10-60^{\circ}C$, and visualization and measurement of the temperature field were performed by taking the intensity distributions from the specimen for the temperature field.
Fluorescence of green fluorescent protein mutant, 2-5 GFP is observed during denaturation by guanidine. The fluorescence intensity decreases exponentially but the fluorescence lifetime does not change during denaturation. The fluorescence lifetime of the denatured protein is shorter than that of native form. As the protein structure is modified by guanidine, solvent water molecules penetrate into the protein barrel and protonate the chromophore to quench fluorescence. Most fluorescence quenchers do not affect the fluorescence of native form but accelerate the fluorescence intensity decay during denaturation. Based on the observations, a simple model is suggested for the structural change of the protein molecule during denaturation.
Basic drugs could be extracted as ion-paired complexes with Lumogallion, Superchrome Garnet Y and their alkyl derivatives from aqueous acid solution, and then determined fluoro-metrically after addition of aluminum ion. The analysis was carried out as follows; To a 1 ml portion of basic drugs (10$^{-9}$~2$\times$0$^{-8}$mole/ml), 1ml of 0.01w/v% fluorescent reagent solution, and 10ml of dichloroethane are added. The mixture is stirred for 1 minute. After standing for a few minutes, the dichloroethane layer is transfered to 1 ml of 0.1w/v% Al(NO$_{3}$)$_{3}$ ethanol solution. After mixing, and standing for 30 minutes at room temperature, the fluorescence intensity is measured with each maximum excitation and emission wavelength. The reagent blank is run through the whole procedure. From the degree of enhancement of fluorescence intensity, hexyl and dodecyl lumogallion and Superchrome Garnet Y were judged to be the useful one of fluorescent reagent for basic drugs analysis.
In place of $Alq_3$ for EL, various Zn-Complex with fluorenscent chromophores were synthesized. PL of Zn-Complex substituted with electron donor group at 2 or 4 position occurred to bathochromic shift of emission$(\lambda_{max})$ and PL intensity was weaker than Zn-Complex non-substituted with electron donor group.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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