토끼 배아세포(Embryonic Stem Cell)를 분리하기 위해 토끼 1-cell embryo를 채란하여 in vitro에서 blastocyst까지 배양한 후 mouse embryonic fibroblasts(MEF), rabbit embryonic fibroblasts(REF) 및 STO cell expressing Leukemia Inhibition Factor gene(SNL) feeder cell과 공배양하였다. 외관상 충실한 토끼 배아세포 8 개를 확보하였고 분리된 토끼 ES cell의 모양은 주위에 분화된 세포가 없는 전형적인 colony모양으로 성장하고 액체질소에 동결보존 및 3∼5차례의 계대배양 후에도 이러한 모양은 계속 유지되었다. 충분히 자란 dish를 1 : 2로 계대배양을 한 후 다시 confluent하게 자라는 데에 걸리는 시간(doubling time)은 빠른 경우 84시간으로 나타났다. 분리 된 토끼 ES cell은 gelatin이 coating되지 않은 culture dish에 이식 배양하였을 때 부유상태로 증식하면서 내부에 강이 생기고 외배엽과 내배엽이 형성하는 전형적인 Embryoid body 모양을 나타내어 분리된 ES cell이 미분화상태의 stem cell임이 확인되었다. 본 연구를 통해 토끼에서의 수정란 배양을 통해 토끼 배아세포를 분리하여 특성을 규명하였다 현재까지의 연구성과로는 토끼 수정란의 배양기술을 완벽하게 개발했다는 점과 토끼에서 ES cell을 분리하여 앞으로 유전자 조작의 가능성을 열어 놓은 것이다. 토끼 ES cell system이 완벽히 확립되도록 분리된 ES cell에 대한 미분화상태의 연구 및 미분화상태를 식별할 수 있는 marker등에 대한 연구에 이용될 것이고 복제토끼 및 형질전환토끼의 생산 등을 위한 연구에 이용될 수 있다.
Historical control data have been shown to be valuable in the proper interpretation and validation of reproductive toxicology studies. The present data were compiled from rat fertility and early embryonic development studies conducted at Korea Institute of Toxicology during the 1994∼2001 period. These data were assembled in order to provide background information for the general and reproductive data collected in 11 fertility and early embryonic development studies using Sprague-Dawley rats obtain-ing from the Breeding Facility, Korea Institute of Toxicology, Korea. A total of 274 males and 274 females were used in these studies during the eight-year period. Parameters of fertility and early embryonic development included clinical sign, body weights, food consumption, organ weights, estrus cycle, copulation index, precoital time, fertility index, pregnancy index, sperm parameters, and early embryonic development parameters. Most of the values were comparable to the previous historical control data reported by other investigators. These data can be wed not only as a historical data base for the meaningful interpretation of data from reproductive and developmental toxicity studies, but also as a contribution to biological characterization of Sprague-Dawley rats.
Exposure to stress is known to precipitate or exacerbate many reproductive dysfunctions such as dysmenorrhea and infertility. Abnormalities of the reproductive system, as shown by reduced ovulation, fertilization and early embryonic development, are frequently seen in dysmenorrhea and infertility. It has been generally accepted that Gamisoyosan (GSS) is a useful prescription for treating insomnia, dysmenorrhea and infertility induced by a stress. Also GSS has been used traditionally to improve systemic circulation and biological energy production. Based on these, this study investigates whether GSS improved ovarian dysfunction caused by stress in mice. Mice were subjected to stress by electric shock on the foot for 30 min daily for a week and treated with GSS at 500 / body weight per day for one week. Thereafter, changes body weight, adrenal weight, ovulation rate, in vitro and in vivo fertilization, embryonic development and estradiol concentrations were measured. GSS markedly increased the body weight of mice with stress, but not normal mice. The administration of GSS caused a reduction in adrenal weight in stressed mice. GSS also had significant positive effects on ovulation rate, estradiol production, in vivo and in vitro fertilization rates and embryonic development. These results indicate that GSS can improve the reproductive dysfunctions caused by stress, and these may production biological energy.
To understand the effect of prenatal stress on sex-specific changes in embryonic and placental growth, a synthetic glucocorticoid (dexamethasone) was administered intraperitoneally at a dosage of 1 mg/kg body weight (BW) (Dex1) or 10 mg/kg BW (Dex10) to pregnant ICR mice at the gestational days 7.5, 8.5 and 9.5 post coitum (p.c.). Embryos and placentas were then harvested at days 11.5 and 18.5 p.c., and their body weight and size were measured following the determination of sex through PCR using Sry specific primers in tail tissues. As a result, female embryos presented reduced fetal body weight and size in Dex1- and Dex10-treated groups than those of control group at the embryonic day 11.5 p.c. Interestingly, the growth seems to be recovered at day 18.5 as there was no difference in growth between control and dexamethasone treated groups. In the case of males, Dex1 induced a decrease in fetal weight in day 11.5 and this pattern was maintained until day 18.5, whereas their growth was not affected by Dex10 treatment. Placental growth showed similar patterns to fetal growth in both sexes but the extent of reduction was not statistically significant in most cases. Placental weights in Dex1- and Dex10-treated group were decreased significantly in male only. The results imply that the effect of prenatal stress is largely sex dependent due to different strategies for growth and survival in a stressful environment.
Embryonic stem (ES) cells have potential for use in evaluation of developmental toxicity because they are generated in large numbers and differentiate into three germ layers following formation of embryoid bodies (EBs). In earlier study, embryonic stem cell test (EST) was established for assessment of the embryotoxic potential of compounds. Using EBs indicating the onset of differentiation of mouse ES cells, many toxicologists have refined the developmental toxicity of a variety of compounds. However, due to some limitation of the EST method resulting from species-specific differences between humans and mouse, it is an incomplete approach. In this regard, we examined the effects of several developmental toxic chemicals on formation of EBs using human ES cells. Although human ES cells are fastidious in culture and differentiation, we concluded that the relevancy of our experimental method is more accurate than that of EST using mouse ES cells. These types of studies could extend our understanding of how human ES cells could be used for monitoring developmental toxicity and its relevance in relation to its differentiation progress. In addition, this concept will be used as a model system for screening for developmental toxicity of various chemicals. This article might update new information about the usage of embryonic stem cells in the context of their possible ability in the toxicological fields.
Streptozotocin으로 당뇨를 유발한 쥐에서 거대배아미의 급여가 혈장 및 간조직의 지질과산화물과 항산화효소에 미치는 영향을 조사하였다. 실험기간동안 모든 당뇨군들의 체중증가는 정상군에 비해서는 유의적으로 낮았다. 거대배아미를 급여한 군은 당뇨대조군에 비해서 체중감소현상이 억제되었으며, 식이섭취량은 정상군에 비해 당뇨대조군들이 높게 나타났다. 장기무게는 당뇨군이 당뇨대조군보다 높았으나 거대배아미를 포함한 쌀식이군에서는 낮게 나타났고, 혈당의 변화는 당뇨대조군에 비해서 거대배아미군이 감소하는 경향을 보였다. 혈장 및 간조직 중의 지질과산화물은 당뇨대조군에 비해서 거대배아미가 낮은 수준의 지질과산화물 값을 보였다. 혈장중의 비타민 A와 E의 농도는 당뇨대조군이 정상군에 비해서 유의적으로 감소하였으며 당뇨대조군에 비해 거대배아미급여군이 유의적으로 높게 나타났다. 간조직의 항산화 효소 중 SOD의 활성은 거대배아미군이 당뇨대조군에 비하여 높았다. 이상의 결과에서 거대배아미를 급여한 당뇨쥐의 낮은 지질과산화물값과 높은 항산화계 효소의 활성이 간조직의 산화적 손상을 감소시키는 원인으로 생각된다.
The ICR pregnant mice were irradiated at 1.5Gy in every 6 hours in the period of organogenesis in order to classify the stage specificity of the embryonic effects of radiation and the stage of development differentiation of the primordium of each major organ. Intrauterine death, fetal body weight and external malformation in live fetuses were observed on day 18 of gestation. There was no statistically significant difference in the intrauterine mortality at any stage organogenesis. The fetal body weight of the mice irradiated in the intermediate stage of organogenesis showed significantly lower. There were specific highly sensitive stages in the incidences of each external malformation, that is exencephalia, open eyelid, cleft palate, anomalies of extremities and anomalies of the tail. At these stage, the primordia of the major organs are established in ICR mice.
The types of glia in the central nervous system (CNS) of the Drosophila embryo include longitudinal glia (LG), cell body glia (CBG), and peripheral glia (PG). Transcription factors, such as glial cell missing and reverse polarity, are well-established general glial cell markers. Only a few glial cell-specific markers have been identified in the Drosophila embryonic CNS, thus far. In the present study, we employed the glial cell-specific markers for LG (vir-1/CG5453 and CG31235), CBG (fabp/CG6783 and CG11902), and PG (CG2310 and moody/CG4322), and comprehensively analyzed their expression patterns, during the embryonic CNS development. Our study validated the specificity of a set of glial markers, and further revealed their spatio-temporal expression patterns, which will aid in the understanding of the developmental lineage, and investigating their role in the development and homeostasis of the Drosophila CNS in vivo.
We investigated the characteristics of embryonic and abnormal organ development in haploid olive flounder, Paralichthys olivaceus, by comparing egg development and histological sections in haploid and diploid individuals. After the mid-blastula transition, abnormal development was observed in haploid fish, including delayed epiboly and malformation of the germ ring and embryonic body. In haploid flounder, Kupffer’s vesicles are irregularly shaped and of variable size compared to diploids. The embryonic body of haploids was shorter and broader than that of diploids and the tail length and size were variable. Most haploid embryos failed to hatch and the few larvae that did, did not survive for more than 6 h. The histological analysis of haploid larvae revealed deformed development in diverse organs, including the eye, otic vesicles, notochord, and neural tube. These results may be related to an abnormality in the axial system of haploid larvae. This study confirmed that the abnormalities of haploid olive flounder were similar to the reported characteristics of haploid syndrome. The abnormalities are caused by delayed epiboly and involution and deformity of Kupffer’s vesicle during egg development.
A total of 120 male and 240 female quail (Coturnix coturnix Pharaoh) were used to determine the effect of feeding time on laying and reproductive performance of Pharaoh quail. They were fed ad libitum between 09:00 to 17:00 or full day, daily. Each female-male pair was housed in multiple-bird cages and colony cages. Initial and final body weight, quail-day egg production, feed consumption per egg and mortality were measured to determine laying performance of breeders. A total of 960 eggs were used to determine reproductive performance of quail in each treatment group. Eggs were incubated in a commercial setter and hatcher in standard conditions. Embryonic mortality, apparent fertility, hatchability of total and fertile eggs were calculated to determine the reproductive performance. Results indicated that feeding between 09:00 to 17:00 h reduced final body weight and egg production (p<0.001, p<0.001). Whereas, limited time of feeding improved hatchability of total (p<0.001) and fertile eggs (p<0.001) and reduced embryonic mortality (p<0.001) when compared with the effects of feeding full day. It was found that there were no significant differences for the egg production of quail housed in different cage systems. Quail caged in multiple-bird cages consumed less feed (p<0.01) compared to quail housed in colony cages. There were significant differences for the mortality (p<0.05), hatchability of total (p<0.001) and fertile eggs (p<0.001), and embryonic mortality (p<0.001) during the incubation due to main effect of cage systems. There were significant cage $systems{\times}feeding$ time interactions for hatchability of total and fertile eggs and embryonic mortality (p<0.001). As a conclusion; feeding from 09:00 to 17:00 reduced laying performance of quail and improved the reproductive traits compared to full day feeding of quail breeders. But, further investigations are needed to determine the optimum length of feeding time and egg production of breeders in quail fed limited time must be evaluated in comparison with its beneficial or detrimental effects.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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