Establishment of Embryonic Stem Cells Derived from Rabbit Embryos

토끼수정란으로부터 배아세포의 분리

To establish rabbit Embryonic Stem (ES) cells, rabbit one-cell embryos were collected and cultured in vitro to blastocysts. Blastocysts were co-cultured with mouse embryonic fibroblasts (MEF), rabbit embryonic fibroblasts (REF) or 570 cells expressing LIF (SNL). Although rabbit ES cells were isolated with low efficiencies, total 8 ES cell lines were kept in vitro with normal colony shape. The MEF was the best feeder for rabbit ES cell isolation in regard to growth rate and undifferentiated morphology. The doubling time of rabbit ES cells in MEF was about 84 hours and the undifferentiated morphology was maintained following passing and freezing processes. These rabbit ES cells were differentiated into embryoid body following the culture in the uncoated dishes, indicating that they were undifferentiated stem cells.

토끼 배아세포(Embryonic Stem Cell)를 분리하기 위해 토끼 1-cell embryo를 채란하여 in vitro에서 blastocyst까지 배양한 후 mouse embryonic fibroblasts(MEF), rabbit embryonic fibroblasts(REF) 및 STO cell expressing Leukemia Inhibition Factor gene(SNL) feeder cell과 공배양하였다. 외관상 충실한 토끼 배아세포 8 개를 확보하였고 분리된 토끼 ES cell의 모양은 주위에 분화된 세포가 없는 전형적인 colony모양으로 성장하고 액체질소에 동결보존 및 3∼5차례의 계대배양 후에도 이러한 모양은 계속 유지되었다. 충분히 자란 dish를 1 : 2로 계대배양을 한 후 다시 confluent하게 자라는 데에 걸리는 시간(doubling time)은 빠른 경우 84시간으로 나타났다. 분리 된 토끼 ES cell은 gelatin이 coating되지 않은 culture dish에 이식 배양하였을 때 부유상태로 증식하면서 내부에 강이 생기고 외배엽과 내배엽이 형성하는 전형적인 Embryoid body 모양을 나타내어 분리된 ES cell이 미분화상태의 stem cell임이 확인되었다. 본 연구를 통해 토끼에서의 수정란 배양을 통해 토끼 배아세포를 분리하여 특성을 규명하였다 현재까지의 연구성과로는 토끼 수정란의 배양기술을 완벽하게 개발했다는 점과 토끼에서 ES cell을 분리하여 앞으로 유전자 조작의 가능성을 열어 놓은 것이다. 토끼 ES cell system이 완벽히 확립되도록 분리된 ES cell에 대한 미분화상태의 연구 및 미분화상태를 식별할 수 있는 marker등에 대한 연구에 이용될 것이고 복제토끼 및 형질전환토끼의 생산 등을 위한 연구에 이용될 수 있다.