• 대한의생명과학회지
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• 제28권4호
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• pp.237-246
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• 2022

Ischemia-reperfusion results in excess reactive oxygen species (ROS) that affect myocardial cell damage. ROS production inhibition is effectively proposed in treating cardiovascular diseases including myocardial hypertrophy. Studies have shown that oxidizing cultured cells in in vitro experiments gradually decreases the permeability of mitochondrial membranes time- and concentration-dependent, resulting in increased mitochondrial membrane damage due to secondary ROS production and cardiolipin loss. However, recent studies have shown that 5-iodo-6-amino-1,2-benzopyrone (INH₂BP), an anticancer and antiviral drug, inhibited peroxynitrite-induced cell damage in in vitro and alleviated partial or overall inflammation in animal experiments. Therefore, in this paper, we studied the preventive effect of INH₂BP on H9c2 cells derived from mouse heart damaged by oxidative stress using 700 μM of hydrogen peroxide. As a result of oxidative stress to H9c2 cells by hydrogen peroxide whether the treatment of INH₂BP or not, hydrogen peroxide caused serious damage in H9c2 cells. These results were confirmed with cell viability and Hoechst 33342 assays. And this damage was through cell death. However, it was confirmed that H9c2 cells pretreated with INH₂BP significantly reduced cell death by hydrogen peroxide. In addition, measurements with DCF-DA assay to determine whether ROS is produced in H9c2 cells treated with only hydrogen peroxide produced ROS significantly, but H9c2 cells pretreated with INH₂BP significantly reduced ROS production by hydrogen peroxide. Taken together, it is believed that INH₂BP can be useful for the prevention and treatment of cardiovascular diseases induced through oxidative stress such as heart damage caused by ischemia/reperfusion.

• 한국치위생학회지
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• 제14권5호
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• pp.775-781
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• 2014

Objectives : The purpose of the study is to investigate the protective effect of coenzyme $Q_{10}$ on cytotoxicity effect of dental monomers in odontoblast(MDPC-23). Methods : MDPC-23 was incubated with the(co)monomers triethylene glycol dimethacrylate (TEGDMA) with and without addition of coenzyme $Q_{10}$. The cell proliferation and survival was determined using WST-1 assay. The level of reactive oxygen species(ROS) was measured by immunofluorescent staining for DCF-DA. Results : TEGDMA treatment decreased the cell proliferation by dose dependently(0.1, 1, 2.5, 5, 10 mM) on the growth of MDPC-23 cells. Coenzyme $Q_{10}$ showed cell proliferation from 5 to $500{\mu}M$ by WST-1 assay. Pre-treatment coenzyme $Q_{10}$ showed the antioxidant effect on proliferation and viability of MDPC-23 after 48h(p<0.05). The positive cells were observed in non-coenyme $Q_{10}$ treatment group(group 2) in comparison with coenyme $Q_{10}$ pre-treatment group(group 1) by DCF-DA. The fluorescence positive cells showed 14.715(group 1) and 19.788(group 2) using image J system. Conclusions : TEGDMA induced cytotoxicity. The MDPC-23 cell death was associated with the increasing ROS. Coenyme $Q_{10}$ showed the antioxidant effects by decreasing ROS. This effects may contribute to the treatment of periodontal disease induced by TEGDMA after operation.

• Journal of Ginseng Research
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• 제37권4호
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• pp.442-450
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• 2013

The aim of this study was to determine and compare the preventive effect of Korean White Ginseng and Red Ginseng on oxidative stress in $H_2O_2$-treated HepG2 cells. The roots of ginseng were extracted with 70% methanol and partitioned with butanol to obtain saponin fractions, which have been known as bioactive constituents of ginseng. 2',7'-Dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA) assay and malondialdehyde (MDA) content were measured for evaluating intracellular reactive oxygen species (ROS) generation. Also, mRNA expressions and activities of antioxidant enzymes were analyzed to determine the antioxidant activity of saponin or non-saponin fractions of ginsengs. According to DCF-DA assay, $H_2O_2$-induced MDA release and ROS generation were significantly reduced by treatment with saponin fractions of white and red ginseng roots. Also, saponin fractions increased effectively intracellular antioxidant enzyme activities including catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase in $H_2O_2$-treated HepG2 hepatoma cells. In general, red ginseng was more effective than white ginseng for reducing oxidative stress. These results indicate that administration of red ginseng may certainly contribute relatively stronger than white ginseng to prevent from damaging liver function by oxidative stress.

• 생명과학회지
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• 제19권5호
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• pp.598-606
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• 2009

본 연구는 저산소증에서 반하가 대뇌신경세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 $E_18$의 배양 흰쥐 대뇌신경세포를 반하로 전처리한 후, LDH assay와 tryphan blue 염색으로 세포 생존율을 측정하였고, $H_2DCF-DA$, JC-1 염색으로 MMP, ROS 및 RNS 변화를 조사하였다. 이에 반하는 저산소증으로 유발된 대뇌신경세포를 2.5 ${\mu}g/ml$까지 농도의존적으로 세포 생존률을 증가시켰으며, 시간에 따른 생존율을 살펴보면 저산소증 유발 후 1 시간에는 별 차이를 보이지 않았지만 3 일, 5 일 후에는 각각 10.2%, 17.8%로 매우 유의한 증가를 보였다. 저산소증에서 반하가 MMP에 미치는 영향을 보기 위해 저산소증 유발직전과 유발 후 1 일, 3 일, 5 일에 JC-1으로 염색하고 미토콘드리아의 염색강도를 측정한 결과 적색형광은 실험군에서 전반적으로 대조군에 비하여 강하게 염색되는 미토콘드리아의 비율을 증가시킨 반면 녹색형광은 대조군과 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 즉 반하가 저산소증으로 유발된 MMP의 소실을 감소시킴을 알 수 있다. 또한 반하는 전반적으로 $H_2DCF-DA$에 염색되는 세포 비율을 현저하게 낮추는 것으로 나타나 저산소증으로 유발된 ROS 및 RNS의 생성을 유의성 있게 감소시켰다. 따라서 반하는 저산소증에서 ROS의 생성을 억제하고 MMP의 소실을 막아 세포의 에너지고갈을 방지함으로서 신경세포를 보호하는 것으로 이해된다.

• 대한화장품학회지
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• 제32권3호
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• pp.161-171
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• 2006

본 연구에서는 제주도에서 자생하는 37 종의 식물추출물에 대한 미백 및 항산화 효능을 조사하였다. 미백 효능은 in vitro tyrosinase 저해활성과 B16-F1 세포를 이용한 멜라닌 합성 저해효과를 조사하여 확인하였고, 항산화 효능은 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)를 이용한 전자공여능 측정방법과 DCF-DA (dichlorofluorescin diacetate)를 이용한 V79-4 폐 섬유아세포에서 활성 산소종 소거작용 능력을 조사하여 측정하였다. 세포실험 조건에서 식물추출물들의 투여농도에 따른 세포독성 정도를 조사하기 위하여 MTT (3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) assay를 수행하였다. 미백 효능조사 실험에서 우수한 결과를 나타내었던 8종의 식물 추출물들은 토끼를 이용한 국소 독성 시험 및 인체 피부 자극 임상 시험에 적용하여 안전성을 조사하였다. 연구결과에서 높은 미백과 항산화 효능을 동시에 나타내었던 비수리(Lespedeza cuneata), 제주광나무(Ligustrum lucidum (stem)), 산뽕나무(Morus bombycis (stem)), 꿀풀(Prunella vulgaris var. lilacina)의 식물추출물들은 화장품 원료화에 매우 유리한 조건을 갖고 있음을 확인하였다.

• 대한화장품학회지
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• 제48권3호
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• pp.213-223
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• 2022

본 연구에서는 과도한 산화 스트레스에 따른 각종 염증 질환과 피부 노화를 예방하기 위해 수영 지상부(aerial parts of Rumex acetosa L.) 추출물의 항염증, 항산화 효과를 확인하였다. ABTS assay를 시행한 결과 농도 의존적으로 radical 소거능이 증가함을 확인하였다. 활성산소종(reactive oxygen species, ROS) 억제능은 DCF-DA assay를 통하여 확인하였고, 농도 의존적인 ROS 생성억제를 확인하였다. ROS에 따른 세포 핵 손상 억제 효과는 DAPI staining을 통하여 확인하였다. 또한 iNOS, COX-2의 mRNA 발현 수준은 qPCR을 통하여 농도 의존적으로 억제함을 확인하였다. iNOS, COX-2의 단백질 수준을 western blotting을 통해 확인한 결과, iNOS는 모든 농도에서 유의하게 감소하였으며, COX-2는 800 ㎍/mL에서 유의하게 감소하였다. iNOS에 의해 생성된 NO의 생성 억제 효과는 NO assay로 확인하였으며 농도 의존적으로 NO가 감소하였다. 또한, MAPKs 신호전달 경로 중 ERK와 JNK의 인산화를 억제하였다. 따라서 Rumex acetosa L.은 MAPKs 경로를 통한 항염증 효과와 항산화 효과를 보여 항염증 및 항산화 화장품 원료로 사용될 수 있는 가능성이 있다.

• 한국식품조리과학회지
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• 제28권6호
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• pp.821-828
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• 2012

In an attempt to identify the neuroprotective effect of Cudrania tricuspidata (CT) leaves against ROS (reactive oxygen species)-induced oxidative stress in neuronal cells, the extracts from CT leaves were investigated using PC12 cells and N18-RE-105 cells. The methanolic and ethanolic extracts from CT were denoted as CTM (Cudrania tricuspidata Leaves methanolic extracts) and CTE (Cudrania tricuspidata Leaves ethanolic extracts), respectively. The neuroprotective effects of the extracts were measured by DCF-DA assay, MTT reduction assay, and LDH release assay. The PC12 cells exposed to $H_2O_2$-induced oxidative stress and the N18-RE-105 cells exposed to glutamate-induced oxidative stress were treated with various concentrations of CTM and CTE. The results, CTM treatments resulted in the induction of a dose-dependent protective effect in PC12 cells and N18-RE-105 cells. Interestingly, CTE also showed neuroprotective effect in PC12 cells and N18-RE-105 cells. Therefore, these results suggest that CTM and CTE could be a new potential candidate as neuroprotective agents against ROS-induced oxidative stress in neuronal cells.

• 대한화장품학회지
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• 제46권3호
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• pp.253-263
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• 2020

활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 우리 몸의 항상성 유지에 있어 중요한 역할을 한다. 그러나 과도한 ROS의 생성은 단백질, 지질, 핵산과 같은 세포 구성성분을 손상시키고 피부노화를 촉진시킨다. 이에 본 연구에서는 과도한 산화 스트레스를 예방하기 위해 Chungsimyeonja-um (CSYJE)의 항산화 효과를 확인하였다. 먼저 DPPH 및 ABTS assay를 실시하여 CSYJE의 항산화 효과를 확인한 결과 농도 의존적으로 radical 소거 활성을 확인하였다. 세포생존율 확인을 위해 MTT assay를 실시한 결과 1,000 ㎍/mL 농도에서 세포 독성이 없음을 확인하였다. 항산화 관련 단백질인 nuclear-E2-related factor 2 (Nrf2), Heme oxygenase-1 (HO-1)의 발현 수준을 확인하기 위해 western blotting을 실시한 결과 농도 의존적으로 발현이 증가하는 것을 확인하였다. 세포 내 ROS유발 물질인 lipopolysaccharide (LPS)로 ROS를 유도한 후, ROS생성 억제효과를 확인하기 위해 DCF-DA 염색법을 실시한 결과 농도 의존적으로 ROS 생성 억제효과를 확인하였으며 ROS의 생성으로 인한 염증성 사이토카인과 염증인자의 mRNA발현 수준을 확인하기 위해 real-time RT-PCR을 실시한 결과 농도 의존적으로 염증성 사이토카인과 염증인자의 mRNA 발현을 억제시켰다. 따라서, 본 연구는 Nrf2/HO-1 신호 전달 경로 활성을 통해 CSYJE의 항산화효과를 확인했으며 이는 CSYJE가 활성산소를 억제하여 항산화 화장품의 재료로서 사용될 수 있음을 시사한다.

• 대한예방한의학회지
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• 제12권2호
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• pp.51-59
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• 2008

Objectives : Buplueri Radix (BR), used medical plant in Korea traditional medicine, contains various compounds, including a series of triterpene saponins known as saikosaponins. We performed this study for the protective effect of BR against oxidative damage induced by 1,2,4-benzentriol(BT) in human lymphocytes. Methods : In order to investigate the protective effect of BR against carcinogens, genotoxicity induced by benzene metabolite, BT were performed using cytokinesis-block micronucleus(CBMN) assay and comet assay. Results : The frequency of micronucleus at 25, 50 and $100{\mu}M$ concentration of BT were $8{\pm}2.36$, $23{\pm}2.31$, $35{\pm}4.17$ respectively. In addition of BR with concentration of 25 and $50{\mu}g/mL$, MN frequencies were significantly decreased. According to comet assay, BT induced DNA damage in a dose-dependent manner at concentration of 10 and 50 while BT with BR treatment decreased DNA breakage. No genotoxicity was observed by BR($25{\sim}50{\mu}g/mL$) treatment alone on DNA breakage. Since BT can induce DNA damage through the generation of reactive oxygen species(ROS), we examined the level of ROS in human lymphocytes treated with BT and/or BR using DCF-DA, ROS-sensitive probe. The generation of ROS in BT-treated cells was also observed, and BR addition inhibited the level of BT-induced DNA damage. Conclusions : From above results it is suggested that BR could protect the cell and DNA from pro-oxidant effect by ROS by BT

• 한국식품영양과학회지
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• 제42권1호
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• pp.8-16
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• 2013

본 연구는 체내 세포배양을 통한 적양배추 추출물의 항유방암 효과를 검정하기 위해 세포활성, 세포사멸, ROS 축적 및 세포사멸 관련 유전자 발현을 분석하였다. 적양배추 추출물을 0.5, 0.75, 1.0, 1.25, 1.5, 1.75 및 2.0 mg/mL의 농도로 24시간 처리하여 세포 생존율(MTT assay)을 분석한 결과 농도 의존적으로 감소되었다(p<0.05). 또한 세포사멸/괴사분석(Hoechst33342/ethidium bromide 염색법), flow cytometry assay, ROS 측정(DCF-DA 염색법) 등의 세포 화학적 방법을 통해 분석한 결과 처리 농도가 증가할수록 세포사멸이 유의적으로 증가하였고, ROS 생성 또한 증가하였다. 특히 2.0 mg/mL의 농도에서는 다른 농도에 비해 유의적으로 높은 사멸율을 나타내었으며, ROS 또한 다량으로 생성되는 것을 관찰할 수 있었다(p<0.05). RT-PCR을 통해 세포사멸관련 유전자인 Bcl-2, Bax, caspase-3의 mRNA 발현 정도를 관찰한 결과 농도 의존적으로 Bcl-2는 유의적으로 감소하였고, Bax와 caspase-3는 유의적으로 증가하였으며, Bcl-2/Bax의 비율은 유의적으로 감소하였다(p<0.05). 이상의 결과로 보아 적양배추 추출물이 인체 유방암세포 MDAMB-231의 세포사멸을 증가시키는 효과가 있음을 알 수 있었다.