습지의 갈대토양으로부터 중금속에 내성이 있는 세균이 분리되었다. 분리된 균주는 16S rDNA 염기서열분석에 의거하여 Alcaligenes sp.로 동정되었다. 납, 크롬, 카드뮴, 아연 및 구리와 같은 중금속을 배지에 첨가하였다. 분리균주 Alcaligenes sp. KC-1을 구리가 0 mM에서 20 mM의 농도로 첨가된 배지에서 배양하였을 때 균주의 생장에 미치는 독성을 알아보았다. 분리균주는 구리가 존재할 때 42시간 배양된 후 7.34 mM의 $EC_{50}$값과 $OD_{600\;nm}$에서 0.83의 흡광도 값을 보여주는 구리 내성균주였다.
Bacteria exist everywhere and continuously come into contact with daily surroundings and humans. Super bacterium methicillin-resistant Staphylococcus aureus, resistant to methicillin, has recently appeared. The morbidity and rate of death associated with super bacteria infection has increased. This study investigated the antibacterial activity of fabrics naturally dyed with Chamaecyparis obtusa leaves extract against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Fabrics were left for 15 min in a natural dyeing solution prepared by extraction from C. obtusa leaves using 11.3% (o.w.f) with a fixed liquor ratio of 1:22 at $40^{\circ}C$. The dyeing process was conducted using three different mordants; subsequently, the K/S value of the dyed fabrics increased in the order of None < Cu < Fe < Al. The color fastness property of the fabrics to washing, dry-cleaning, and rubbing was found to be excellent and ranked in the 4-5 grade. The color fastness to light of natural dyeing is low in most cases and has the problem that the dye color soon becomes bleached. Yet, in most cases cloth dyed with retinispora leaves, the color fastnezz to light was good with a third to fourth grade. Non-mordant fabrics, aluminum mordants, and copper mordants also showed better antibacterial properties (99.9% reduction) against methicillin-resistant Staphylococcus aureus, compared to the control fabrics. The dyed fabrics showed the same antibacterial activity even after three washes. The results highlight the strong potential of fabrics naturally dyed with C. obtusa-extract as a medicinal material with excellent antibacterial function against methicillin-resistant Staphylococcus aureus.
본 연구에서 우리는 광양만의 해수와 표층 퇴적물에서 TBTCl 내성세균의 개체수를 조사하였다. 광양만에서 TBTCl 내성세균의 개체수는 해수에서 $2.5{\times}10^3-3.8{\times}10^3$ cfu/mL 범위였으며, 표층 퇴적물에서 TBTCl 내성세균의 개체수는 $3.2{\times}10^5-9.1{\times}10^5$ cfu/g 범위였다. 광양만에서 TBTCl 내성세균의 종조성은 Vibrio spp. (19.2%)가 가장 높은 우점종으로 나타났고, Bacillus spp. (16.2%), Aeromonas spp. (15.2%), Pseudomonas spp. (13.1%), Klebsiella spp. (11.1%), Alteromonas spp. (9.1%), Pantoea spp. (6.1%), Proteus spp. (3.0%), Listeria spp. (2.0%), unidentified (5.0%)의 순으로 우점하였다. 또한 11개의 대표적인 TBTCl 내성균주는 여러 중금속들(Cd, Cu, Hg 및 Zn)에도 내성을 나타내었다. 이들 중에서 가장 강한 TBTCl 내성을 보이는 T7 균주를 선별하여, API 20NE등을 이용하여 본 균주의 형태학적, 생리학적 및 생화학적 특성들을 조사하였다. T7 균주는 16S rRNA gene 염기서열 분석에 의해 Pantoea 속으로 동정되어 Pantoea sp. T7으로 명명되었다. 또한 본 균주는 $500{\mu}M$의 TBTCl 농도에서도 60시간 배양 후에 정상 균주 성장의 50.7%까지 증식하였다. Pantoea sp. T7의 생물학적 TBTCl 분해활성은 GC-FPD 분석에 의해 측정되었는데, $100{\mu}M$의 TBTCl 농도에서 배양 40시간 후에 TBTCl 제거 효율은 62.7%로 나타났다.
Glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PDH, EC 1.1.1.49) in Deinococcus radiophilus, an extraordinarily UV-resistant bacterium, was investigated to gain insight into its resistance as it was shown to be involved in a scavenging system of superoxide $(O_2^{-1})$ and peroxide $(O_2^{-2})$ generated by UV and oxidative stresses. D. radiophilus possesses two G6PDH isoforms: G6PDH-1 and G6PDH-2, both showing dual coenzyme specificity for NAD and NADP. Both enzymes were detected throughout the growth phase; however, the substantial increase in G6PDH-1 observed at stationary phase or as the results of external oxidative stress indicates that this enzyme is inducible under stressful environmental conditions. The G6PDH-1 and G6PDH-2 were purified 122- and 44-fold (using NADP as cofactor), respectively. The purified G6PDH-1 and G6PDH-2 had the specific activity of 2,890 and 1,033 U/mg protein (using NADP as cofactor) and 3,078 and 1,076 U/mg protein (using NAD as cofactor), respectively. The isoforms also evidenced distinct structures; G6PDH-1 was a tetramer of 35 kDa subunits, whereas G6PDH-2 was a dimer of 60kDa subunits. The pIs of G6PDH-1 and G6PDH-2 were 6.4 and 5.7, respectively. Both G6PDH-1 and G6PDH-2 were inhibited by both ATP and oleic acid, but G6PDH-1 was found to be more susceptible to oleic acid than G6PDH-2. The profound inhibition of both enzymes by ${\beta}-naphthoquinone-4-sulfonic$ acid suggests the involvement of lysine at their active sites. $Cu^{2+}$ was a potent inhibitor to G6PDH-2, but a lesser degree to G6PDH-1. Both G6PDH-1 and G6PDH-2 showed an optimum activity at pH 8.0 and $30^{\circ}C$.
담수 식물 수초의 근계에 부착하는 미생물 중 중금속에 높은 저항성을 가지는 균을 분리하고 이들 중 Enterobacter cloaceae K41를 대상으로 생육최적조건을 검토한 결과는 LB배지에 $1\%$ yeast extract, $1\%$ lactose, $1\%$ NaCl, pH7.0, 최적 온도는 $37^{\circ}C$, 24시간 진탕배양 이었으며 중금속 첨가 시에는 침전을 막기 위하여 Nutrient 배지로 대체하였다. 이 분리균주와 표준균주인 Enterobacter cloaceae KCTC2519를 대상으로 중금속인 구리와 카드뮴이온에 대한 최소생육저지농도(MIC)를 비교한 결과 분리균주인 E. cloacear K41은 구리는 150 ppm, 카드뮴은 50 ppm농도까지 생육이 확인되었으나 표준균주는 구리 50ppm에서 생육이 확인되었으나 카르뮴이나 두 혼합 중금속에서는 확인되지 않는 차이를 나타내었다. 두 균주를 대상으로 유전적 성상을 비교한 결과 분리균주에선 plasmid가 검출되었으나 표준균주에는 없었다. 그리고 분리균주에서 6.4Kb 절편의 plasmid를 분리하여 구리, 카드뮴의 중금속에 민감한 균주인 E, coli $DH5{\alpha}$에 형질전환 시켜 생육에 영향을 미치는 정도를 비교하였다. 그 결과 형질전환 균주의 두 중금속에 대 한 최소생육저지농도가 구리는 7배, 카드뮴은 6배로 증가한 것을 알 수 있었다. 또한 중금속 흡착률은 형질전환 균주가 E. ccli $DH5{\alpha}$보다 구리가 1.3배, 카드뮴은 1.5배 증가함을 알 수 있었다. 따라서 이 plasmid가 중금속 저항성을 증가시키는데 관여하는 것으로 보였다.
중금속으로 오염된 토양을 정화하기 위한 rhizoremediation 기법에서 식물이 중금속을 흡수하고 이동시키는 효율을 증가시키기 위하여 토양 미생물 특히, 근권세균의 역할이 중요하다. 이를 위하여 본 연구에서는 정유공장 주변의 유류 및 중금속으로 장기간 오염된 토양에서 서식하는 4가지 식물의 근권토양으로부터 Methylobacterium sp. SY-NiR1 균주를 분리하였다. 분리한 Methylobacterium sp. SY-NiR1는 분홍색 콜로니 형성, 막대모양 및 $\alpha-proteobacteria$에 속하는 특성으로 보아 pink-pigmented facultative methylotroph인 것으로 사료된다. 이 균주는 식물성호르몬인 indole acetic acid(IAA) 생산능을 가지고 있으며, 카드뮴, 크롬, 구리, 납, 니켈 그리고 아연 등과 같은 다양한 중금속에 대하여 내성을 가지고 있었으며, $EC_{50}$을 기준으로 한 SY-NiR1의 중금속에 대한 내성은 Zn > Ni > Cu > Pb > Cd > Cr 순이다. 따라서 본 연구에서 분리한 Methylobacterium sp. SY-NiR1 균주는 중금속으로 오염된 토양에서 식물의 발아, 생장 및 발달을 도와 식물의 중금속 흡수를 증가시켜 rhizorememdiation 효율을 증가시킬 수 있을 것으로 기대된다.
The bacterial strains, which utilizes 2,4,4'-trichloro-2'-hydroxydiphenyl ether(TCHDPE) as a sole carbon source, were isolated by selective enrichment culture from soil samples of industrial waste deposits. The bacterium that showed the highestt biodegradation activity was designated as EL-O47R The isolated strain EL-O47R was Identified as the genus Pseudomonas from the results of morphological, cultural, and biochemical tests. The optimum conditions of medium for the growth and the degradation of TCHDPE were TCHDPE 500 ppm, (NH4)2SO4 0.1% as the nitrogen source, initial pH 7.0±0.1, and 37℃, respectively. In this conditions, the regradation rate of TCHDPE was about 97%. Pseudomonas sp. EL-O47R was tested for resistance to several metal compounds and antibiotics. Pseudomonas sp. EL-O47R was moderately grown to Cd(NO3)2, ZnCl2, AgSO4, CuSO4 and HgCl2. This strain was sensitive to rifampicin and kanamycln but resistant to ampicillin, penicillin, tetracyclin and chloramphenlcol. Pseudomonas sp. EL-O47R was grown structurally related com- pounds and potential metabolites of TCHDPE, and has the stability on TCHDPE biodegradation.
대표적인 방사선저항성 미생물인 Deinococcus radiodurans의 구리이온($CuCl_2,250{\mu}M$)에 대한 발현체 분석을 DNA microarray를 이용하여 수행하였다. 총 3,187개의 open reading frame중 70개의 유전자 발현이 2배 이상증가(64개) 또는 감소(6개)하였다. 이들 중 흥미롭게도 철이온 흡수 관련 유전자들로 추정되는 두 개 operon ($DRB0014{\sim}DRB0017$과 $DRB0121{\sim}DRB0125$)의 발현이 가장 높게 증가하였다. 두 operon의 첫 번째 유전자인 DRB0014와DRB0125의 발현을 실시간 정략 PCR을 이용하여 분석한 결과, 두 유전자 모두 구리 이온($CuCl_2,250{\mu}M$) 또는 철이온 킬레이트화합물(2,2'-dipyridyl, $ 250{\mu}M$)을 첨가하였을 경우 발현이 10배 이상 증가하였으나 철이온($FeCl_3,250{\mu}M$) 또는 구리 이온 킬레이트화합물(bathocuproine disulphonate, $250{\mu}M$)이 존재할 때에는 발현이 변화하지 않았다. 따라서 D. radiodurans의 구리 대사는 철 흡수 시스템과 관련이 있는 것으로 추정된다. 그러나 DRB0014와DRB0125의 변이는D. radiodurans의 구리 저항성 및 방사선 저항성에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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