• Natural Product Sciences
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• 제24권4호
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• pp.288-292
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• 2018

High-performance countercurrent chromatography (HPCCC) coupled with reversed-phase highperformance liquid chromatography (RP-HPLC) method was developed to isolate dihydrophaseic acid 3'-O-${\beta}$-D-glucopyranoside (DHPAG) from the extract of Nelumbo nucifera seeds. Enriched DHPAG sample (2.3 g) was separated by HPCCC using ethyl acetate/n-butanol/water system (6:4:10, v/v/v, normal-phase mode, flow rate: 4.0 mL/min) to give 23.1 mg of DHPAG with purity of 88.7%. Further preparative RP-HPLC experiment gave pure DHPAG (16.3 mg, purity > 98%). The current study demonstrates that utilization of CCC method maximizes the isolation efficiency compared with that of solid-based conventional column chromatography.

• 한국식품과학회지
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• 제36권3호
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• pp.518-521
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• 2004

이상계 용매시스템을 이용하여 물질을 고순도로 대량 분리 할 수 있는 기술인 countercurrent chromatography를 이용하여 인삼으로부터 생리황성 성분인 saponin을 대량 분리 농축하였다. 용매 조성별 인삼 saponin의 분배계수에 따른 인삼 saponin 분리에 적합한 용매시스템은 chloroform/methanol/water(40/39/21, v/v/v)으로 결정되었으며 HSCCC의 작동 조건은 chloroform/methanol/water 용매시스템의 하층부를 이동상으로 한 head to tail mode에서 이동상의 유속 5mL/min, 인삼추출물 injection량 $200{\mu}L$, 컬럼회전속도 800 rpm의 조건이 적합한 것으로 판단되었다. 이러한 조건하에서 분리된 인삼saponin의 양은 $550.7{\mu}g$으로 HSCCC에 주입한 인삼 추출물 $200{\mu}L$중에 존재하는 총 saponin의 양 $865.5{\mu}g$에 비교하여 전체 수율은 63.6%로 나타났으며 TLC로 각 분획의 순도를 확인할 수 있었다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제15권3호
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• pp.191-195
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• 2012

We report here the use of high-speed countercurrent chromatography (HSCCC) in the preparative isolation and purification of the bioactive component, fucosterol, from Pelvetia siliquosa. A crude extract was obtained by ultrasonic extraction of powdered P. siliquosa using methylene chloride and was then subjected to separation and purification by HSCCC, coupled with evaporative light-scattering detection. Preparative HSCCC was performed successfully using a two-phase solvent system, n-heptane:methanol (3:2, v/v), to obtain 10.96 mg fucosterol with 96.8% purity from 50 mg of crude extract; the recovery rate was approximately 90.5%.

• Natural Product Sciences
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• 제21권1호
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• pp.30-33
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• 2015

Anthocyanins are water soluble plant pigments which are responsible for the blue, red, pink, violet colors in several plant organs such as flowers, fruits, leaves and roots. In recent years, anthocyanin-rich foods have been favored as dietary supplements and health care products due to diverse biological activities of anthocyanins including antioxidant, anti-allergic, anti-diabetic, anti-microbial, anti-cancer and preventing cardiovascular disease. High-performance countercurrent chromatography (HPCCC) coupled with reversed-phase medium pressure liquid chromatography (RP MPLC) method was applied for the rapid and efficient isolation of cyanidin 3-glucoside (C3G) and peonidin 3-glucoside (P3G) from black rice (Oryza sativa L., Poaceae). The crude black rice extract (500 mg) was subjected to HPCCC using two-phase solvent system composed of tert-butyl methyl ether/n-butanol/ acetonitrile/0.01% trifluoroacetic acid (TBME/B/A/0.01% TFA, 1 : 3 : 1 : 5, v/v, flow rate - 4.5 mL/min, reversed phase mode) to give enriched anthocyanin extract (37.4 mg), and enriched anthocyanin extract was sequentially chromatographed on RP-MPLC to yield C3G (16.5 mg) and P3G (8.7 mg). The recovery rate and purity of isolated C3G were 76.0% and 98.2%, respectively, and those of P3G were 58.3% and 96.3%, respectively. The present study indicates that HPCCC coupled with RP-MPLC method is more rapid and efficient than multi-step conventional column chromatography for the separation of anthocyanins.

• Natural Product Sciences
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• 제26권3호
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• pp.236-243
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• 2020

Salvia plebeia R. Br. is a plant which has been used as an edible crop and traditional medicine in Asian countries. In this study, HPLC-PDA analysis and countercurrent chromatography (CCC) coupled with reversed-phase (RP) HPLC method were applied to isolate ten isolates from 3.3 g of n-butanol soluble extract from hot-water extract of S. plebeia. The use of CCC enabled us to efficiently fractionate the starting material with less sample loss and facilitate the isolation of compounds from S. plebeia extract using RP-HPLC. The isolates were determined to be caffeic acid (1), 6-hydroxyluteolin 7-O-β-D-glucoside (2), eudebeiolide B (3), (R)-rosmarinic acid (4), homoplantaginin (5), eudebeiolide D (6), plebeiolide C (7), salpleflavone (8), eupafolin (9) and hispidulin (10) based on the spectroscopic evidence.

• 식품기술
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• 제9권4호
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• pp.3-34
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• 1996

• 한국식품과학회지
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• 제29권6호
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• pp.1222-1227
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• 1997

본 연구는 기존의 HPLC방법과는 달리 고정상과 이동상이 모두 액상으로 구성되어 분리하고자 하는 물질의 활성을 상실하지 않고 비교적 높은 순도로 분리, 정제할 수 있는 HSCCC 방법을 이용하여 인체에 유효한 약리작용을 나타내는 생리활성 물질을 분리하기 위한 기초 연구로써 수행 하였다. HSCCC의 운용변수에 따른 분리 효율을 알아보기 위하여 용매시스템의 물리화학적 특성이 생리활성 물질의 분리에 미치는 영향을 알아보기 위하여 용매시스템의 pH, KCl의 농도 및 극성에 따라 분리효율에 미치는 영향을 알아보았다. 용매시스템의 pH가 2.0에서 10.0으로 증가할수록 컬럼내 고정상의 유지율은 각각 73.8%에서 68.9%로 감소하는 경향을 나타내었다. 용매시스템의 상하층부 사이의 계면장력은 계속증가 하여 pH 8.0에서 최대로 증가한 후에 pH 10.0에서 감소하였다. 용매시스템의 pH에 따른 ginkgo flavonoid 표준품의 분획계수는 pH가 증가함에 따라 증가하였으며 특히 quercetin의 경우 pH 10.0에서 크게 증가하여 용매시스템의 pH를 적절히 조절하여 분리하고자 하는 물질의 분획계수를 쉽게 조절할 수 있음을 알 수 있었다. 용매시스템의 염농도가 HSCCC의 분리효율에 미치는 영향을 알아본 결과 KCl의 농도에 따른 컬럼내 고정상 유지율 변화 및 용매시스템의 계면장력에는 크게 영향을 미치지 않았다. 은행잎 flavonoid 표준품에 대한 분칙계수는 KCl의 농도가 변화함에 따라서 약간의 변화를 나타내었다. 용매시스템의 극성에 따른 분획계수의 변화는 blending solvent인 methanol 함량의 증가로 인하여 용매시스템의 극성 차이가 감소함에 따라 상하층부에 대한 물질의 친화성 차이가 감소하여 분획계수 값이 1에 근접하는 경향을 나타내었다.

• 한국작물학회지
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• 제42권6호
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• pp.821-832
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• 1997

본 실험은 알파파 꽃 추출물로부터 Allelopathy와 Autotoxicity에 관련되는 활성물질을 분리, 동정하기 위하여 실시하였다. 알팔파 꽃 200g을 80% MeOH로 추출하여 $CHCl_3$층을 silica gel thin layer chromatography (TLC), microcrystalline cellulose thin layer chromatography (MCTLC)와 droplet countercurrent chromatography(DCCC)의 분획을 이용하여 생물검정을 행하고 DCCC의 생물검정에서 가장 억제력을 보였던 분획 5와 6은 HPLC로 활성물질을 동정하였다. HPLC분석 결과 분획 5에서는 ferulic acid, caffeic acid, vanillic acid, rutin, narringin 이, 분획 6에서는 ferulic acid, caffeic acid, vanillic acid, rutin, coumarin이 동정되었다. 이들 동정된 물질을 이용한 알팔파와 돌피에 대한 발아실험에서도 모두 알팔파와 돌피의 발아와 생육에 억제적으로 작용하였으며, 이중 coumarin의 처리가 가장 억제적이었다. 따라서 이들 물질이 알팔파와 돌피의 autotoxicity와 allelopathy에 관련하는 것으로 생각되었다.

• Natural Product Sciences
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• 제21권1호
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• pp.20-24
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• 2015

Cyanidin-3-glucoside (C3G) and cyanidin-3-rutinoside (C3R) were isolated by high-performance countercurrent chromatography (HPCCC) using a two-phase solvent system composed of tert-butyl methyl ether/n-butanol/acetonitrile/water/trifluoroacetic acid (1 : 3 : 1 : 5 : 0.01, v/v) to give pure C3G (34.1 mg) and C3R (14.3 mg) from 1.5 g crude mulberry fruit extract. Using the pure C3G and C3R, a reliable high-performance liquid chromatography (HPLC) method was developed and validated to determine the C3G and C3R contents in mulberry fruit. C3G and C3R were separated simultaneously using an Eclipse XDB-C18 column ($4.6{\times}250mm$ I.D., $5{\mu}m$) coupled with a photodiode array detector (PDA). The gradient elution of the mobile phase consisting of acetonitrile (0.5% formic acid) and water (0.5% formic acid) was applied (1.0 mL/min), and the detection wavelength was 520 nm. The calibration curves of C3G and C3R showed good linearity (both with $r^2=0.9996$) in the concentration range $15.625-500{\mu}g/mL$, and the relative standard deviations (RSD%) of intra- and inter-day variability were in the ranges 2.1 - 8.2% and 4.1 - 17.1%, respectively. The accuracies were ranged 96.5 - 102.6% for C3G and C3R, respectively. The developed HPLC method was used to determine the contents of C3G and C3R in newly harvested mulberry from eight different provinces of Korea.

• KSBB Journal
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• 제25권3호
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• pp.205-214
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• 2010

역류크로마토그래피 (counter-current chromatography, CCC)는 일련의 분배과정을 한 개의 튜브 내에서 연속적으로 일어나도록 고안된 시스템으로서 컬럼으로는 polytetrafluoroethylene(PTFE) 튜브가 다층으로 감겨있는 원통형의 홀더 3개가 서로 기어를 통해 물려있으며, 홀더가 회전과 공전을 통해 튜브의 꼬임을 방지하는 rotary seal-free flow centrifuge 시스템으로 되어있다. 역상 HPLC (reverse phase HPLC)에서는 고정상이 실리카에 결합된 유기물단 (organic moiety)이 수용성 이동상 물질에 의해서 용매화 (solvated)되는 반면 CCC는 실리카 대신에 강한 중력장에 의해 분리되는 자유로운 용매가 고정상이 되며 이 고정상의 부피비율은 20-30%에 이른다. 즉 고체담체에 결합된 유기관능기 대신에 물과 섞이지 않는 hexane 같은 유기용제가 고정상으로 사용되는 것이다. 고속역류크로마토그래피 (high-performance countercurrent chromatography, HPCCC)는 CCC의 기능을 향상시킨 분리시스템으로서 높은 중력장하에서 높은 이동상 속도와 높은 분리효율과 짧은 분리시간을 특징으로 하고 있다. 특히 mg 단위에서 kg 단위로의 스케일업이 선형적으로 가능하다는 큰 장점을 지니고 있다. 이 총설에서는 현재까지 개발된 CCC의 일반적인 이론을 간략히 정리하고 최신 HPCCC 장비의 적용 예를 살펴보고 그 응용분야로서 생리활성물질의 분리 및 정제와 관련된 연구동향을 정리하였다.