• KSBB Journal
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• 제23권6호
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• pp.484-488
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• 2008

본 연구에서는 peroxidase 활성의 신속한 스크리닝을 위해 peroxidase의 활성을 정량적으로 평가할 수 있는 분석으로 agar plate와 96-well plate에서 peroxdase의 활성에 비례하여 색상감도를 측정할 수 있는 colorimetric 분석법을 개발하였다. 이 방법은 RP-HPLC 결과와 매우 비례적으로 상관적인 결과를 보였다. 이 colorimetric 분석법을 사용하여, 폐수에서 한천 고체배지에서 7회에 걸친 스크리닝으로 높은 농도의 2,4-DCP(1000 ppm)에서 생존하는 균주를 스크리닝하였고 선별된 이들 균주들은 탄소원으로 2,4-DCP 만을 대사할 수 있으며 높은 peroxidase 생산량을 보였다. 분리된 균주들 중 높은 peroxidase 활성을 가지는 2,4-DCP 분해 균주를 분리하였고 최종 분리된 균주는 염색폐수의 COD를 4시간 동안 44%에서 61%까지 제거하였다. 상기의 결과에 의해 본 연구에서 개발된 발색법이 페놀화합물 분해 균주 스크리닝법이 빠르고 쉬운 난분해성 물질인 페놀 혼합물의 분해 균주 탐색에 대하여 성공적으로 적용될 수 있기를 기대한다.

• 통합자연과학논문집
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• 제7권3호
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• pp.173-182
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• 2014

To simplify the different biological investigation of the methanolic extract and solvent-solvent partitioning of Lablab purpures (L. purpures) bark. In-vitro anti-oxidant study was determined using total DPPH radical scavenging assay. In vitro antimicrobial study was measured by observing zone of inhibition. The cytotoxic activity was studied using brine shrimp lethality bioassay and thrombolytic activity by clot disruption method. The antioxidant potential was evaluated by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) and Folin-Ciocalteau reagents using butylated hydroxytolune (BHT) and ascorbic acid as standards. The Aqueous soluble fraction revealed the highest free radical scavenging activity ($IC_{50}=48.76{\mu}g/mL$). The antimicrobial screening of the bark of L. purpures exhibited mild to moderate activity in test microorganisms. The CSF showed the maximum relative percentage inhibition against Salmonella parathyphi (34.2%) for bacteria and C. albicans (28.8%) for fungi whereas, lowest relative percentage inhibition against Sarcina lutea (22.0%) for bacteria and Aspergillus niger (24.4%) for fungi. In the brine shrimp lethality bioassay, The $LC_{50}$ values of Carbon tetrachloride and N-Hexane soluble fraction were found $92.18{\mu}g/mL$, and $68.95{\mu}g/mL$ respectively while the $LC_{50}$ values of standard Vincristine sulphate was $1.37{\mu}g/mL$. The methanolic extract and its organic soluble fractions of Lablab purpureus at concentration 2.0 mg/mL, significantly protected the lysis of erythrocyte membrane induced by hypotonic solution and heat as compared to the standard, acetyl salicylic acid (0.10 mg/mL). The MSF and AQSF produced 61.48 % and 53.75% inhibition of hemolysis of RBC caused by hypotonic solution respectively, whereas acetyl salicylic acid (0.10 mg/mL) showed 76.42%. Ethanol extract of L. purpures and all of its different partitions exhibited moderate thrombolytic activity of 37.25%-2.40%. Very good preliminary screening and simplified experiments were able to show the different biological activity of methanolic extract and its soluble fractions of L. purpures at a time.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권2호
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• pp.129-134
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• 2003

본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 어병세균인 Gram 음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 혹은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20종의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 등에서 분리하여 어류병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, 그리고 Streptococcus sp.에 대해 항균활성이 있는 7종의 균주를 1차 선발을 하였다. pH 및 항생제 내성능을 검토하여 probiotic 균주를 분리하였다. 분리된 후보 균중 창란젓에서 분리된 BK19에서 가장 큰 항균 spectrum과 pH 내성 그리고 항생제에 대한 내성이 확인되어 최종적으로 본 실험의 공시균주로 선발하여 생화학적, 형태학적 특성 및 16S rRNA 분석을 통하여 Lactobacillus sakei BK19로 동정하였다.

• 대한환경공학회지
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• 제27권9호
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• pp.1016-1021
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• 2005

본 연구에서는 산발효 공정에 관여하는 세균들을 조사 분리하고 분리된 세균들을 이용한 VFAs의 생산효율 증가 효과를 검토하였다. 연구 결과는 다음과 같다. 음식물쓰레기 산발효 공정에서 혐기성배지를 이용하여 분리된 주요 세균은 Escherichia coli, Clostridium formicoaceticum, Clostridium butyricum, Clostridium acetobutyricum 등 12 종이며 Escherichia coli와 Clostridium spp.가 우점종을 차지하고 있는 것으로 나타났으며 VFAs 생산에 주도적 역할을 하는 것으로 판단되었다. 아세트산의 생성 효율 향상에 관한 실험에서 E. coli를 $6{\times}10^8\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 287 mg/gTS(8,176 mg/L)이 생산되었고 Clostridium formicoaceticum을 $5{\times}10^4\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 551 mg/gTS(15,715 mg/L)이 생산되어 대조군과 비교하여 3배의 높은 생산성을 보였다. 부틸산의 생산에 대한 실험에서 Clostridium butyricum을 $2.5{\times}10^5\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 214 mg/gTS(6,106 mg/L)이 생성되었고 Clostridium acetobutyricum을 $1.5{\times}10^5\;cells/gTS$의 농도로 접종하였을 때 254 mg/gTS(7,261 mg/L)이 생성되어 대조군과 비교하여 2배의 생산성을 나타내었다.

• 한국축산식품학회지
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• 제35권1호
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• pp.91-100
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• 2015

The present study was conducted to screen candidate probiotic strains for anti-inflammatory activity. Initially, a nitric oxide (NO) assay was used to test selected candidate probiotic strains for anti-inflammatory activity in cultures of the murine macrophage cell line, RAW 264.7. Then, the in vitro probiotic properties of the strains, including bile tolerance, acid resistance, and growth in skim milk media, were investigated. We also performed an in vitro hydrophobicity test and an intestinal adhesion assay using Caenorhabditis elegans as a surrogate in vivo model. From our screening, we obtained 4 probiotic candidate lactic acid bacteria (LAB) strains based on their anti-inflammatory activity in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cell cultures and the results of the in vitro and in vivo probiotic property assessments. Molecular characterization using 16S rDNA sequencing analysis identified the 4 LAB strains as Lactobacillus plantarum. The selected L. plantarum strains (CAU1054, CAU1055, CAU1064, and CAU1106) were found to possess desirable in vitro and in vivo probiotic properties, and these strains are good candidates for further investigations in animal models and human clinical studies to elucidate the mechanisms underlying their anti-inflammatory activities.

• 유기물자원화
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• 제2권2호
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• pp.31-37
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• 1994

퇴비화 과정의 미생물학적 연구를 위해 퇴비화 재료인 유기성 폐기물에 많이 존재하는 고분자 물질의 분해에 관여하는 미생물들과 이들이 분비하는 효소들을 손쉽게 선별, 정량하는 방법을 개발하였고 아울러 혐기적 상태에서의 퇴비화 가능성을 탐색하는 연구의 일환으로 혐기적 분해의 최종적 역할을 하는 황산 환원 균의 퇴비화 과정에서의 분포를 알아보았다. 고분자 물질의 분해 측정법 개발에 사용된 기질은 각각 다당류 및 단백질 중에서 ${\beta}-glucan$, xylan, dextran, CMC(carboxymethylcellulose), casein, collagen 등을 재료로 사용하였고 이들을 가교제를 써서 불용화시키고 색소를 결합시켜 색소기질을 제조하였다. 제조된 기질을 이용하여 실제의 퇴비에서 고분자 분해 세균을 분리할 수 있었으며 기존의 효소 정량법에 비해 민감하게 효소 활성을 정량할 수 있었다. xylan과 ${\beta}-glucan$ 색소기질의 경우 고체 배지 상에서 고분자 분해 미생물을 선별할 때 기존의 Congo red 법과는 달리 미생물 집락에 손상을 입히지 않고도 손쉽게 사용할 수 있었다. 실험에 쓰인 오니에 포함되어 있는 황산 환원 세균은 lactic acid, propionic acid, butyric acid, formic acid 등의 유기산에 대해 높은 활성을 보여 주었고, acetic acid, valeric acid도 이용할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권5호
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• pp.952-958
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• 2004

Of 23 psychrotrophic bacteria isolated from the west Pacific deep-sea sediments, 19 were assigned to the $\gamma$-Proteobacteria, 3 to the <$\beta$-Proteobacteria, and 1 to the Gram-positive bacteria, as determined by their 16S rDNA sequences. Ten psychrotrophs, affiliated to the Psychrobacter, Pseudoalteromonas, and Pseudomonas genera in the $\gamma$-Proteobacteria group, were screened for lipolytic bacteria. The majority of the lipolytic isolates had growth temperatures between 4-$30^\circ{C}$, and all of them were neutrophilic, aerobic, or facultatively anaerobic, and some were able to produce multiple kinds of ectohydrolytic enzymes. The deep-sea strains Psychrobacter sp. wp37 and Pseudoalteromonas sp. wp27 were chosen for further lipase production analysis. Both strains had the highest lipase production when grown at 10 to $20^\circ{C}$; their highest lipase production occurred at the late-exponential growth stage; and the majority of the enzymes were excreted to the outside of the cells. Lipases from both strains had the same optimal reaction temperature and pH (20-$30^\circ{C}$, pH 7-8) and could retain about 60% of their highest activity at $4^\circ{C}$. Furthermore, SDS-PAGE and an in-gel activity test showed that they had the same high molecular mass of about 85 kDa.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권8호
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• pp.792-802
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• 2009

Antimicrobial peptides (AMPs) are considered to be a promising alternative to conventional antibiotics for future generations. We identified four novel hexapeptides with antimicrobial activity: KCM11 (TWWRWW-$NH_2$), KCM12 (KWRWlW-$NH_2$), KCM21 (KWWWRW-$NH_2$), and KRS22 (WRWFIH-$NH_2$), through positional scanning of a synthetic peptide combinatorial library (PS-SCL). The ability of these peptides to inhibit the growth of a variety of bacteria and unicellular fungi was evaluated. KCM11 and KRS22 preferentially inhibited the normal growth of fungal strains, whereas KCM12 and KCM21 were more active against bacterial strains. Bactericidal activity was addressed in a clear zone assay against phytopathogenic bacteria, including Pectobacterium spp., Xanthomonas spp., Pseudomonas spp., etc. KCM21 showed the highest activity and was effective against a wide range of target organisms. Application of KCM21 with inoculation of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum on detached cabbage leaves resulted in an immune phenotype or a significant reduction in symptom development, depending on the peptide concentration. Cytotoxicity of the four hexapeptides was evaluated in mouse and human epithelial cell lines using an MTT test. The results revealed a lack of cytotoxic effects.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제6권1호
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• pp.69-77
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• 2002

During the screening of material which has the antimicrobial activity against aminoglycoside-resistant bacteria, A new material $\varepsilon$-(L-$\beta$-Iysine) polypeptide from a culture medium of Streptomyces sp.(DWGS2) was isolated, and the structure and the physicochemical properties of the new material were elucidated. The new material was separated by column chromatography of the culture medium using Dowex1$\times$2, Silica gel, and Sephadex LH20 etc. The chemical structure and molecular weight were determined with the data of various NMR experiments, MALDI mass, and ESI mass experiments. The antimicrobial activity of $\varepsilon$-(L-$\beta$-Iysine) polypeptide is not only better than equal to the activity of known aminoglycoside type of antibiotics(MIC=3.125 - 6.25ug/mL) but also effective against aminoglycoside-resistant bacteria and fungi. If the mechanism of antimicrobial activity against aminoglycoside- resistant bacteria is figured out, the $\varepsilon$-(L-$\beta$-Iysine) polypeptide can be utilized for the treatment of diseases caused by aminoglycoside-resistant bacteria.

• 한국식품과학회지
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• 제36권6호
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• pp.959-967
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• 2004

인간의 대장내 점막에 대하여 우수한 점착특성을 갖는 probiotic 유산균주를 선별할 목적으로, colonic mucin-binding assay를 고안하고 최적의 분석 조건을 검토한 결과, microtiter plate의 well에 대한 colonic mucin의 부착은 pH 4.8, biotinylated SLP의 농도는 $5.0\;{\mu}g/mL$, 시판 HRP-conjugated streptoavidin은 24,000배 희석용액, TMB의 발색시간은 10분의 조건에서 측정시 최적의 결과를 나타냈다. 동 조건에서 본 assay system을 이용할 경우, 장내 점착능 측정 및 우수 유산균주의 선별에 있어 신속하고 재현성 있는 결과를 제공할 수 있으며, 인간의 대장에 대한 유산균의 점착특성을 정량적으로 분석할 수 있음을 보여주었다. 공시균주 32종 및 유아 분변 유래의 분리균주 18종을 포함한 총 50종의 유산균주에 대하여, colonic mucin-binding assay를 이용하여 대장 mucin에 대한 결합능을 비교한 결과, L. species FSB-1이 가장 높은 결합능을 보여주었다. 따라서 L. species FSB-1을 대상으로 형태학적 특성, 생리 및 생화학적 특성과 16S rDNA에 대한 부분 염기서열 분석을 포함한 동정실험을 수행한 결과, 장내 점착능 우수균주로 선별된 L. species FSB-1은 Lactobacillus brevis로 최종 동정되었다.