• 생명과학회지
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• 제6권2호
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• pp.79-86
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• 1996

A bacterium producing pullulanase was from soil, and was identified Bacillus cereus and named as Bacillus cereus JK36. The optimal culture conditions for the efficident production of pullulanase from B. cereus JK36 was obtained by cultivating with the medium composed of 1% pullulan, 1% teast extract, 1% bactopeptone, 0.1% NaH$_{2}$PO$_{4}$, 2H$_{2}$O, 0.02% MgSO$_{4}$\ulcorner7H$_{2}$O at 40$\circ$C, initial pH 6.5 for 70 hours. Using the culture supernatant as crude enzyme, the optimal pH and temperature of the pullulanase of this strain were 6.5 and 50$\circ$C. In effect of pH and temperature on the stability of the enzyme, the enzyme was stable in the range of pH6.0$\sim$9.5 and up to 40$\circ$C, respectively. The hydrolysis product on pullulan was mainly maltotriose.

• 환경위생공학
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• 제13권2호
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• pp.34-39
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• 1998

For more convenient and rapidly isolation of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis(Bti), 1) heat treatment spore forming bacteria, 2) growth in enrichment culture media for Bacillus sp. and 3) selection of bacteria producing a lecithinase for Bacillus thuringiensis subsp. israelensis, were performed. Spore forming bacteria were counted 4.8 $\times $ 10$^{8}$cells/g soil on NAPGCY media, 9.2 $\times $ 10$^{7}$cells/g soil on NA media, and 3.6 $\times $ 10$^{8}$cells/g soil on NAAC media, respectively. Bacteria producing only a lecithinase were reached at 25.2% on medium contained egg york, bacteria only producing a delta-endotoxin were reached at 23.2% by phase contrast microscope, and bacteria producing a lecithinase & a delta-endotoxin simultaneously were reached at 13.7%. Bacillus thuringiensis which producing a lecithinase and a delta-endotoxin simultaneously among bacteria producing a lecithinase, were reached at 56.5%; A half of Bacillus thuringiensis was produced a delta-endotoxin, but not produced a lecithinase. Among 8 isolates of Bacillus thuringiensis, two strain of Bti which has a mosquito-cidal toxin, were detected by PCR using a specific primer of $\delta $-endotoxin gene from Bti.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권3호
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• pp.216-223
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• 2003

새롭게 분리된 Bacillus cereus H-1으로부터 크기가 45-kDa인 chitosanase를 정제하여 특성을 파악하였고 1.3-kb의 chitosanase 유전자(choA)를 대장균에 클로닝하여 발현시켰다. H-1의 chitosanase 단백질(ChoA)은 ammonium sulfate 침전과 CM-sephadex칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 최적 pH는 약 7이었고 pH 안정성은 $50^{\circ}C$에서 4-11로 나타났다. 최적 온도는 약 5$0^{\circ}C$였으며 효소 활성은 $45^{\circ}C$ 아래에서 비교적 안정하였다. H-1 chitosanase는 soluble 또는 glycol chitosan뿐만아니라 carboxymethyl cellulose(CMC)에 대한 활성도 나타내었다. 정제된 ChoA의 MALDI-TOF MS분석에 기초하여 이미 알려진 다른 Bacillus chitosanases와의 데이터베이스 검색을 통해 전체 아미노산 서열을 밝혀내었다. Chitosanase gene에 해당하는 1.6 kb의 PCR 산물을 얻었으며 그의 DNA 서열을 결정하였다. choA의 추정 아미노산은 Bacillus sp. No 7-M과 Bacillus sp. KCTC0377BP의 아미노산과 98%의 유사성을 나타내었다. 재조합 ChoA단백질은 E. coli DH5$\alpha$에서 원 균주와 동일한 크기로 발현되었다. N말단의 추정아미노산서열을 다른 chitosanas리 서열과 비교해 볼때 ChoA는 chitosanase-cellulase 활성을 갖는 family 8에 속하는 미생물 endo-chitosanaseT. 추정되었다.

• 미생물학회지
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• 제54권4호
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• pp.428-435
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• 2018

본 연구는 담수환경에서 항균활성을 보유한 미생물을 발굴하고, 활성 증진을 위해 배양조건을 최적화하는 것이다. 상주시 중동면 오상저수지에서 시료를 채취하여 38종의 미생물을 순수분리하였다. 16S rRNA 염기서열 분석에 근거하여 Proteobacteria강(22종), Actinobacteria강(7종), Bacteroidetes강(6종), Firmicutes강(3종)으로 구성되어있는 것을 확인하였다. 메티실린내성 황색포도상구군 등 10종의 유해미생물에 대한 항균활성을 보유한 Burkholderia sp. OS17 균주를 선발하였다. 항균활성 증진을 위한 상용배지, 온도, 초기 pH별 생육 및 항균활성 비교실험을 수행하였다. OS17 균주는 YPD 배지, $35^{\circ}C$, pH 6.5로 배양했을 때 가장 활성이 높았다. LB, NB, TSB, R2A 배지와 $20^{\circ}C$, $25^{\circ}C$ 배양했을 때는 생장은 가능하나 항균활성이 전혀 없었다. 이전결과를 바탕으로 YPD 배지, $35^{\circ}C$에서 배양하면서 5 L fermenter를 이용하여 생육, 항균활성, pH 확인을 통해 배양 48시간을 최적 배양시간으로 선정하였다. 항균활성을 보유한 미생물의 배양 최적화는 항균물질 생산에 영향을 미치고, 이는 상업적 응용에 이점으로 작용할 수 있다.

• 한국균학회지
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• 제41권2호
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• pp.118-126
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• 2013

The experiment was carried out to analyze the inhibition effect of plant pathogenic fungi and growth promotion activity induced by the bacterial strains isolated from peatmoss. Among the isolated bacterial strains, B10-2, B10-4, B10-5 and B10-6 which showed more than 30% inhibition rate against Botrytis cinerea and Rhizoctonia solani in vitro, were further analyzed in the greenhouse for the growth promotion activity on lettuce (Lactuca sativa), pak-choi (Brassica compestris L. ssp. chinensis) and Chinese cabbage (Brassica campestris L. ssp. pekinensis). The results showed the treatment of B10-4 on lettuce showed the highest growth promotion activity with the leaf area ($169.17cm^2$), fresh weight (leaf: 40.29 g, root: 8.80 g)and dry weight (leaf: 11.24 g, root: 4.17 g), which was about two folds as compared to control. On pak-choi, the growth promotion rate was the highest with the leaf area of $112.87cm^2$, leaf fresh weight of 60.70 g, root fresh weight of 3.37 g, leaf dry weight of 14.34 g, and root dry weight of 1.90 g. As a result of treatment of B10-13 on chinese cabbage, the growth promotion rate was the highest with the leaf area ($293.56cm^2$), fresh weight (leaf: 113.67 g, root: 2.40 g) and dry weight (leaf: 6.03 g, root: 0.53 g). The production of Indole Acetic Acid (IAA) and Indole-3-Butylic Acid (IBA) were also analyzed in these bacterial isolates. The IAA and IBA analyses were carried out in all bacterial isolates each day within the 5 days of incubation period. The highest production of IAA was observed with $112.57{\mu}g/mg$ protein in B10-4 after 3 days of incubation and IBA production was the highest in B10-2 with $58.71{\mu}g/mg$ protein after 2 days of incubation. Also, phosphate solubilizing activity was expressed significantly in B10-13 in comparison to that of other bacterial isolates. Bacterial identification showed that B10-2 was Bacillaceae bacterium and B10-5 was Bacillus cereus, B10-4 and B10-6 were Bacillus sp. and B-13 was Staphylococcus sp. by ITS sequence.

• 미생물학회지
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• 제49권1호
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• pp.38-45
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• 2013

본 연구에서는 연안갯벌 갯지렁이(Perinereis aibuhitensis)에서 분리한 광염성 미생물, Bacillus sp. EBW4의 특성과 다양한 환경조건에서 유기물 분해능을 분석하였다. 16S rRNA 염기서열에 기초하여 동정한 결과, 균주 EBW4는 Bacillus hemicentroti $JSM076093^T$와 98.3%, Bacillus hwajinponensis SW-$72^T$와 97.96% 그리고 Bacillus algicoa $KMM3737^T$와 96.28%의 상동성을 보였다. EBW4의 생장 가능한 온도 범위는 $4-40^{\circ}C$, 염분도 범위는 0-17%, pH 범위는 5-9로 나타나 EBW4는 광염성 균주로 밝혀졌다. EBW4의 세포막을 구성하는 주요 지방산으로는 anteiso $C_{15:0}$, iso $C_{16:0}$, anteiso $C_{17:0}$, iso $C_{14:0}$ 등으로 각각 48.2, 12.1, 11.6, 9.4% 비율로 나타났다. EBW4는 탄수화물, 단백질, 지방 등 다양한 고분자 유기물을 분해할 수 있는 DNase, amylase, protease, lipase 등의 효소 활성뿐만 아니라, alkaline phosphatase, esterase (C4), leucine arylamidase 그리고 ${\alpha}$-chymotrypsin 효소활성도 가지고 있었다. 다양한 염분 농도 조건에서 합성폐수를 이용한 실험에서 EBW4은 조사한 모든 범위의 염분 조건에서도 유기물 분해능이 우수하였다.

• 생명과학회지
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• 제33권6호
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• pp.506-511
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• 2023

본 연구의 목적은 전통식품에서 MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus)에 대한 항균 활성을 보이는 유산균을 분리하고 특성을 파악한 후에, 분리된 유산균을 이용한 쌀 발효물의 항균 활성을 확인하는 것이었다. 오징어 젓갈에서 선별된 3종의 균주는 16S rRNA 유전자 염기서열을 기반으로 Weissella sp. ISF-1, ISF-2, ISF-3으로 명명하였다. 이들은 장내 유해세균들인 Bacillus cereus, Staphylococcus aureus 및 MRSA에 대해 우수한 항균 활성을 보였다. 이들의 생장은 0-5% (w/v) NaCl에서 우수하였고 7% (w/v) NaCl까지 비교적 양호하였다. 초기 pH 8이 생육에 최적이었으며, pH 6, 7, 9에서도 우수한 생육을 보였다. 분리 된 Weissella sp. ISF-1 균주를 이용하여 발효한 쌀발효 동결건조물들도 B. cereus, S. aureus 및 MRSA에 대해 항균 활성을 보였다. 본 연구결과로 획득한 균주들은 프로바이오틱스 및 안전한 식품 이용을 위한 생물 보존제 개발이나 MRSA 치료에 유용할 수 있고, 쌀의 부가가치를 높이는 새로운 기능의 제품개발에 활용이 가능할 것으로 기대된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권2호
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• pp.344-349
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• 2004

A gene encoding inulin-degrading enzyme of Bacillus sp. snu-7 with ORF of 1536 nucleotides was cloned. And it was overexpressed as His-tagged protein in E. coli BL21(DE3) pLysS using pRSET B vector containing mature enzyme sequence. Maximum enzyme production was achieved by IPTG (0.1 mM) induction at $OD_{600}$ 1.2 and $30^{\circ}C$ followed by 6 h incubation. The expressed protein purified through immobilized metal affinity chromatography showed molecular mass of 60 kDa on SDS-PAGE. Results of thin-layer chromatography using inulin as a substrate showed the enzyme to be an exotype inulinase capable of producing only monomeric fructose as a product. $K_m$ and $k_{cat}$, for the hydrolyses of inulin and sucrose were $2.28\pm0.08$ mM and 358.05$\pm$20.38 $min^{-l}$, and 22.02$\pm$0.41 mM and 4619.11$\pm$215.12 $$min^{-1}, respectively. Optimal activity of the exoinulinase occurred at pH 7.0 and $50^{\circ}C$.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제8권3호
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• pp.627-631
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• 2007

슬러지의 침전성에 영향을 미치는 인자는 F/M비, 유입수의 성분과 조성, 처리수온, 포기조의 pH, 슬러지 일령, 사상성세균의 증식 등으로 알려져 있으며, 유기산의 잔류량이 EPS의 분비에 영향을 미쳐 슬러지의 침강성에 영향을 주게 된다. 바실러스를 이용한 공법에서 생물 반응조는 특히 바실러스 종의 우점화를 위한 포자화의 진행을 이루는데 중요한 것으로 알려져 있으나 이에 대한 기작 설명은 아직 미흡한 실정이다. 바실러스를 이용한 B3 공법과 RABC 공법으로 운전 중인 처리장의 생물반응조는 점감포기를 하고 있으며 침전조에서 포자를 형성한 바실러스가 생물반응조로 반송되면 1.6mg/L로 높아진 DO농도와 유기물질 유입으로 바실러스가 발아를 하고 활성도가 높아지며, 0.5mg/L로 낮아진 DO농도로 인하여 포자를 형성하면 EPS 추출물질 중 Protein의 함량이 109.95mgEPS/gSS에서 131.77 mg EPS/gSS로 증가하고 SVI는 85mL/g에서 96mL/g사이로 양호함에 따라 DO농도가 EPS 추출물질 중 Protein의 생성에 영향을 미치며 Protein의 함량이 침전에 영향을 미치는 것으로 판단된다. 또한 Protein/Carbohydrate 비율에 따라 침강성은 영향을 받는 것으로 나타났다. 특히 RABC 공법에서는 Protein/Carbohydrate의 비가 침전에 영향을 미치는 것으로 나타난 반면, B3 공법에서는 Protein/carbohydrate의 비에 영향을 크게 받지 않는 것으로 나타났다.

• 상하수도학회지
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• 제24권2호
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• pp.195-202
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• 2010

The evaluation of organic matters and nutrients removal was investigated for the synthetic wastewater and the high strength of dairy wastewater. Two different systems were performed for this research. System A composing of a single RBC with tapered aeration was fed with the synthetic wastewater for 74 days with 173L/day of influent, 200% of internal return and 100% of sludge return for the period 1 and 2. The feed conditions were maintained 346L/day of influent, 50% of internal return and sludge return for the period 3. The dairy wastewater was introduced to evaluate treatment efficiency for system B composing of dual RBCs and tapered aeration tanks for 50 days of experimental run time, in which hydraulic rates were maintained at the constant ratios of 346L/day, 50% of internal return and 50% of sludge return. The spiral string media made of nylon fibre was attached by Bacillus sp. in RBC for both systems. The specific area of string media was $1.4m^2$/m and biomass was maintained at the concentrations of 23g/m. The synthetic wastewater was supplied by 1,800mg/L of glucose, 500mg/L of $NH_4Cl$, and 500mg/L of $KH_2PO_4$ to system A. The dairy wastewater was supplied to system B from dairy production plant. The average influent concentrations were 1,334mg/L of BOD, 2,014mg/L of CODcr, 160mg/L of T-N, and 12mg/L of T-P in system A. The average influent concentrations of parameters were 1,006 mg/L for BOD, 1,875mg/L for $COD_{cr}$, 51.6mg/L for T-N and 8.9mg/L for T-P in system B. Results indicated that removal efficiencies of BOD and $COD_{cr}$ were more than 90% however, the removal efficiency of T-N was 87%, and that of T-P was 82% for system A. Removal efficiencies were 98.5% of BOD, 91.3% of nitrogen and 89% of phosphorus for system B. The removal efficiencies of organic matters, T-N and T-P were higher in system B than in system A. The effluent quality issued by the stringent national legislations for the discharge of the high strength of dairy products wastewater can be improved using sequential RBCsand tapered aeration reactors rather than a single RBC and tapered aeration reactors with Bacillus sp.