• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제29권2호
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• pp.129-138
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• 2002

Objective: This study was to compare the characteristics between parthenogenetic mES (P-mES) cells and in vitro fertilization mES cells. Materials and Methods: Mouse oocytes were recovered from superovulated 4 wks hybrid F1 (C57BL/6xCBA/N) female mice. For parthenogenetic activation, oocytes were treated with 7% ethanol for 5 min and $5{\mu}g$/ml cytochalasin-B for 4 h. For IVF, oocytes were inseminated with epididymal sperm of hybrid F1 male mice ($1{times}10^6/ml$). IVF and parthenogenetic embryos were cultured in M16 medium for 4 days. Cell number count of blastocysts in those two groups was taken by differential labelling using propidium iodide (red) and bisbenzimide (blue). To establish ES cells, b1astocysts in IVF and parthenogenetic groups were treated by immunosurgery and recovered inner cell mass (ICM) cells were cultured in LIF added ES culture medium. To identify ES cells, the surface markers alkaline phosphatase, SSEA-1, 3,4 and Oct4 staining were examined in rep1ated ICM colonies. Chromosome numbers in P-mES and mES were checked. Also, in vitro differentiation potential of P-mES and mES was examined. Results: Although the cleavage rate (${\geq}$2-cell) was not different between IVF (76.3%) and parthenogenetic group (67.0%), in vitro development rate was significantly low in parthenogenetic group (24.0%) than IVF group (68.4%) (p<0.05). Cell number count of ICM and total cell in parthenogenetic b1astocysts ($9.6{\pm}3.1,\;35.1{\pm}5.2$) were signficantly lower than those of IVF blastocysts ($19.5{\pm}4.7,\;63.2{\pm}13.0$) (p<0.05). Through the serial treatment procedure such as immunosurgery, plating of ICM and colony formation, two ICM colonies in IVF group (mES, 10.0%) and three ICM colonies (P-mES, 42.9%) in parthenogenetic group were able to culture for extended duration (25 and 20 passages, respectively). Using surface markers, alkaline phosphatase, SSEA-l and Oct4 in P-mES and mES colony were positively stained. The number of chromosome was normal in ES colony from two groups. Also, in vitro neural and cardiac cell differentiation derived from mES or P-mES cells was confirmed. Conclusion: This study suggested that P-mES cells can be successfully established and that those cell lines have similar characteristics to mES cells.

• 한국버섯학회지
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• 제11권2호
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• pp.99-106
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• 2013

본 연구에서는 항암제와 면역 조절제로 널리 사용되는 차가버섯을 피부 미백제로 이용할 수 있는지 가능성을 알아보기 위해 멜라닌생성 저해 효과와 자외선 차단 작용과 관련된 여러 실험을 수행하였다. 메탄올을 이용해 차가버섯의 자실체에서 추출한 물질의 총 폴리페놀 함량과 플라보노이드 함량은 각각 31.85 mg/g과 28.33 mg/g으로 측정되었다. B16/F10 melanoma와 NIH3T3 세포주에 추출물의 농도를 10~500 ${\mu}g/mL$으로 처리한 세포생존율 시험에서 시험 세포주의 52% 이상이 생존하여 세포독성은 없는 것으로 확인되었다. DPPH 라디칼 소거 활성과 금속이온 제거능 등의 항산화 시험에서 추출물의 항산화 활성은 양성대조군인 tocopherol이나 BHT에 비해 낮았으나 추출물의 농도가 높아짐에 따라 항산화 활성은 비례적으로 증가하였다. 멜라닌 합성의 초기단계에 관여하는 티로시나아제와 L-DOPA에 차가버섯 메탄올 추출물과 양성대조군인 kojic acid와 arbutin을 각각 직접 처리하고 저해 효과를 측정한 결과 추출물은 양성 대조군인 kojic acid 및 arbutin에 비해 저해 효과가 매우 낮았다. B16/F10 Melanoma 세포에 추출물과 arbutin을 처리하고 세포내 티로시나아제의 저해 활성을 조사한 결과, 100 ${\mu}g/mL$의 농도에서 추출물은 68.59%, arbutin은 58.36%의 활성이 저해되어 메탄올 추출물이 arbutin에 비해 티로시나아제 저해활성이 약 10% 높았다. 또한, B16/F10 melanoma 세포에 차가버섯 추출물과 arbutin을 처리하여 생성된 멜라닌의 양을 측정한 결과, 추출물과 arbutin을 처리한 모든 군에서 생성된 멜라닌의 양은 유사하였으며, 처리 농도가 증가함에 따라 농도 의존적으로 생성된 멜라닌의 양은 감소하였다. 따라서 차가버섯 메탄올 추출물은 세포 밖에서 직접 티로시나아제를 저해하는 작용은 양성 대조군에비해 매우 낮았으나 melanoma 세포내에서 티로시나아제와 멜라닌의 생성을 양성대조군과 대등하게 저해하여 피부에 미백효과를 나타낼 수 있을 것으로 사료된다. 또한 차가버섯 메탄올 추출물을 200-400 nm 파장에서 분광광도계를 이용하여 흡수스펙트럼을 측정한 결과, 280-350 nm의 자외선 영역에서 흡광도가 높아 자외선을 효율적으로 차단하는 것으로 나타났다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권1호
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• pp.489-494
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• 2014

Background: Psychiatric patients appear to be at lower risk of cancer. Some antipsychotic drugs might have inhibitory effects on tumor growth, including penfluridol, a strong agent. To test this, we conducted a study to determine whether penfluridol exerts cytotoxic effects on tumor cells and, if so, to explore its anti-tumor mechanisms. Methods: Growth inhibition of mouse cancer cell lines by penfluridol was determined using the 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Cytotoxic activity was determined by clonogenic cell survival and trypan blue assays. Animal tumor models of these cancer cells were established and to evaluate penfluridol for its anti-tumor efficacy in vivo. Unesterified cholesterol in cancer cells was examined by filipin staining. Serum total cholesterol and tumor total cholesterol were detected using the cholesterol oxidase/p-aminophenazone (CHOD-PAP) method. Results: Penfluridol inhibited the proliferation of B16 melanoma (B16/F10), LL/2 lung carcinoma (LL/2), CT26 colon carcinoma (CT26) and 4T1 breast cancer (4T1) cells in vitro. In vivo penfluridol was particularly effective at inhibiting LL/2 lung tumor growth, and obviously prolonged the survival time of mice bearing LL/2 lung tumors implanted subcutaneously. Accumulated unesterified cholesterol was found in all of the cancer cells treated with penfluridol, and this effect was most evident in LL/2, 4T1 and CT26 cells. No significant difference in serum cholesterol levels was found between the normal saline-treated mice and the penfluridol-treated mice. However, a dose-dependent decrease of total cholesterol in tumor tissues was observed in penfluridol-treated mice, which was most evident in B16/F10-, LL/2-, and 4T1-tumor-bearing mice. Conclusion: Our results suggested that penfluridol is not only cytotoxic to cancer cells in vitro but can also inhibit tumor growth in vivo. Dysregulation of cholesterol homeostasis by penfluridol may be involved in its anti-tumor mechanisms.

• 대한화장품학회지
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• 제40권4호
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• pp.341-347
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• 2014

본 연구에서는 노무라입깃해파리(Nemopilema nomurai) 가수분해 추출물의 미백활성에 대하여 검색하였다. 가수분해 시료(NHE, N. nomurai Hydrolized Extract)는 노무라입깃해파리를 상업용 단백질분해효소(Protamex, Alcalase, Flavourzyme, Neutrase)를 이용하여 $55^{\circ}C$에서 pH 5-8 조건으로 처리하는 과정을 거쳐 얻었다. 미백활성은 B16-F1 멜라노마 세포에서 멜라닌 색소 합성 저해능 평가를 통하여 확인하였다. 실험결과, Neutrase로 처리된 시료(N-NHE)에서 $100{\mu}g/mL$의 농도에서 멜라닌 생성이 가장 효율적으로 89.9% 감소되는 것을 관찰하였다. 이 시료는 또한 tyrosinase와 TRP-1 (tyrosinase related protein-1) 단백질의 발현을 억제하였다. 이상의 연구 결과는 노무라입깃해파리 가수분해 추출물의 화장품 미백 소재로의 개발 가능성을 보여주고 있다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제48권3호
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• pp.280-284
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• 2005

Several biological activities of Rhododendron mucronulatum were investigated. The electron donating abilities of ethanol extracts of Rhododendron mucronulatum were more than 90% at 100 ppm, 500 ppm and 1,000 ppm. Xanthine oxidase was inhibition about 46% by the ethanol extracts of R. mucronulatum at 500 ppm 48% of tyrosinase activity relating to skin-whitening was shown at 1,000 ppm. Uniquely, the anti-microbial effects of water extract and ethanol extract were shown only on Staphylococcus aureus. The water extract 1 mg/disc showed the higher activity than ethanol extract. The growth inhibition effect of each sample on lung cancer (A549) and melanoma (B16F10) cell lines were over 70% at 1,000 ppm, while the effects on the melanoma (G361) and liver cancer (HepG2) were about 50% at the same concentration.

• 한국자원식물학회:학술대회논문집
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• 한국자원식물학회 2018년도 추계학술대회
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• pp.92-92
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• 2018

Silene seulensis Nakai was used as traditional medicines in Korea, we collected plant from demilitarized zone (DMZ). S. seulensis was extracted with 30, 50, and 70% ethanol and partitioned successively with n-hexane, EtOAc, dichloromethane and BuOH. These extracts (30, 50 and 70% ethanol) were evaluated the cytotoxicity on B16F10 and Hacat cell lines. The LC-MS/MS data of each fractions (n-hexane, EtOAc, dichloromethane, and BuOH) were compared with MS library, combined with ultraviolet/visual (UV/Vis) and MS data for faster determine structure by database search results. This led to the identification of four compounds (1-4) from S. seulensis. These compounds was isolated first time from S. seulensis. Their chemical structures are elucidated by combinations of NMR and mass spectrometry techniques.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제61권1호
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• pp.101-108
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• 2018

본 연구에서는 국내산 상황버섯의 효소 가수분해 전처리를 통한 ${\beta}-glucan$의 최적 추출조건을 확립하고 그에 따른 활성을 알아보고자 추출 조건에 따른 생이화학적활성을 측정하였다. 효소가수분해 조건을 최적화하기 위해 실시한 반응표면분석법의 결과 0.66%(v/v)의 viscozyme 농도에서 6.08시간 반응하는 것이 최적이라 예측되었으며($R^2=0.9245$), 이에 따라 최적 추출 조건에서 추출한 시료의 ${\beta}-glucan$ 함량은 1.9594 g/100 g으로 측정되었다. 추출 수율(0.76-16.40%)은 EBE가 NEBE에 비해 약 3배 높았다. ${\beta}-glucan$ 순도(11.15-59.05%)로 가장 높았으며, ${\beta}-glucan$ 함량 또한 0.26-3.38 g/100 g으로 EB (3.38 g/100 g)가 가장 높았다. 총당 함량(0.61-1.17 mg/mL)은 NEB, EB가 NEBE, EBE보다 높았으며, EB가 가장 높았다. 구성당 분석 결과, 모든 추출물에서 glucose의 함량이 가장 높았으며, 대조구와 효소 전처리구 모두 정제하면서 그 비율이 증가하였다. 단백질 함량(0.44-11.73 mg/mL)은 NEBE, EBE가 NEB, EB보다 높았으며, EBE가 가장 높았다. FT-IR 분석 결과 $890cm^{-1}$ 부근에서 peak가 확인되었기에 ${\beta}-glycosidic$ linkage를 가지고 있는 것으로 판단하였다. MTT assay를 통해 B6F10과 SK-MEL-5 세포 독성을 측정한 결과 B6F10의 경우 대조구의 세포 생존율을 100%로 하였을 때 세포 생존율이 80% 이상으로 나타나 세포독성을 보이지 않았으나, SK-MEL-5에서는 EBE를 $100{\mu}g/mL$의 농도로 처리하였을 때 세포 생존율이 75%로 나타나 약간의 세포독성을 보였다. Wound healing assay를 통해 암세포 증식 억제활성 측정 결과, 정제한 NEB, EB가 NEBE, EBE보다 활성이 높았으며, 특히 12시간일 때 EB $30{\mu}g/mL$를 처리한 경우 B6F10과 SK-MEL-5 모두에서 가장 높은 활성을 나타내었다.

• 대한본초학회지
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• 제20권3호
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• pp.19-27
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• 2005

Objectives : The antioxidant activities of Yeonkyo-san and its ingredient were investigated for industrial application. Methods : We experimented radical scavenging effect, superoxide dismutase and cytotoxicity effect of various cancer cell. Results : The result were obtained as follows : Primary testing of cytotoxicity of Yeonkyo-san and ingredient was done for G361. B16F10, MDA and A549 cell lines. Yeonkyo-san and ingredient water extract, ethanol extract showed cytotoxicity of over 90% respectively against cell line. The electron donating ability(EDA) of water extract from the Yeonkyo-san was higher than 60%, ethanol extract from the Yeonkyo-san was over 80% at 1000 ppm. The electron donating ability(EDA) of water extract and ethanol extract from the Yeonkyo-san ingredients were increased as well. SOD-like activity was high as 75% in 700 ppm, it was increased. All the other samples showed less than 40% SOD-like activity. Conclusions : The results indicated that water extract and ethanol extract of Yeonkyo-san and ingredient can be used as a natural ingredient with biological functions in cosmetic and food composition.

• 대한화장품학회지
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• 제47권4호
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• pp.353-360
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• 2021

본 연구는 화장품 소재로서 금화규(Abelmoschus manihot) 꽃의 미백 활성율 및 항주름 활성을 평가하기 위해 수행하였다. 금화규 꽃은 물과 70% 에탄올을 이용하여 추출하였다. Tyrosinase 억제 활성은 물과 70% 에탄올 추출물 모두 농도 의존적으로 억제 활성이 증가 된다고 평가되었으며, B16F10 세포주에서 생존율에 영향을 미치지 않은 농도인 10, 25, 50, 75, 100 ㎍/mL에서 멜라닌 생합성을 저해하는 것으로 확인되었다. 금화규 꽃의 항주름 효능으로는 collagenase와 elastase의 활성 저해 능력을 측정한 결과 70% 에탄올 추출물이 물 추출물보다 높은 항주름 활성을 보였다. 본 연구 결과를 통하여 금화규 꽃 추출물은 미백 활성과 항주름 활성을 가지는 기능성 화장품 소재로 사용 가능할 것으로 사료된다.

• 대한화장품학회지
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• 제31권2호
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• pp.197-206
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• 2005

본 연구에서는 춘천 지역에서 재배되고 있는 메밀의 부위별(종피, 종자, 줄기) 추출물을 이용하여 MTT assay 항산화 효능(수퍼옥사이드 라디칼, 하이드록실 라디칼 소거능), rutin과 phytic acid에 대한 함량 측정, 대표적인 중금속 중의 하나인 카드뮴에 대한 세포 수준에서 방어 효능을 평가하였고, 이들 자료를 토대로 주된 식품재료로 쓰이고 있는 메밀을 기능성 화장품의 소재로써 개발할 수 있는 가능성을 조사하여 보았다. HaCaT 세포와 B16F10 세포를 이용한 세포 독성 실험에서는 각 추출물 $100 {\mu}g/mL$의 농도 범위에서는 독성이 없는 것으로 나타났다. 수퍼옥사이드 라디칼에 대한 소거능은 종피>줄기>종자 추출물 순이었으며, 종피나 줄기는 거의 비슷한 수준의 효능을 보여 주었으며, 항산화 효능에 관여하는 주요 물질중의 하나인 rutin은 줄기 부위에 가장 많이 함유하고 있었다. 하이드록실 라디칼에 대한 소거능은 각 추출물 모두 거의 없는 것을 확인할 수 있었다. 중금속에 대한 chelate 물질로 알려진 phytic acid는 rutin처럼 줄기 부위에 높은 농도로 함유되어 있었다. 카드뮴에 대한 독성은 HaCaT 세포에서 $50{\mu}M$의 농도일 때 $50\%$ 정도의 치사율을 보였으며, 카드뮴을 추출물과 같이 처리하였을 때는 카드뮴의 독성에 대해 약 $10\%$ 정도 방어 효과를 나타냈다. Confocal laser scanning microscope를 이용하여 카드뮴에 의한 세포내 활성산소종의 생성을 확인하였고. 생성된 활성 산소 종에 대한 방어 효능은 줄기추출물에서 가장 우수한 것을 확인하였다.